不同波长及数据处理方法对HBsAg检测结果的影响
作者：沈小雷 汪亮
单位：236200 安徽省颍上县血站
关键词：乙型肝炎表面抗原；酶联免疫吸附测定
蚌埠医学院学报9906100
中国图书资料分类法分类号 R 392.11 R 446.61
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)测定是献血员筛选的常规检查项目之一，所用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法通常使酶标仪对检验结果进行测定。在使用过程中，笔者发现同一个HBsAg可疑标本，采用不同波长(单波长或双波长)及不同空白方式(减与不减试剂空白)所得的结果不同，现予报道。
1 材料与方法
1.1 标本来源 标本来自于本地参加无偿献血人员，经乙肝筛选测定光密度(OD)值接近临界值均为可疑标本，共5份。
, 百拇医药
1.2 试剂及仪器 试剂盒(均“批批检”)购自上海科华公司，HBsAg参考标准(批号9701，1.0 ng/ml;2.0 ng/ml；5.0 ng/ml)由上海血液中心提供；美国产STAT FAX 2100酶标仪；洗板机为北京拓普公司提供(MED-Ⅱ型)。
1.3 方法 酶标测定严格按试剂盒说明书操作，分别设空白、阴性、阳性对照孔，反应终止后，用酶标仪分别于450 nm(单波长)和450/630 nm(双波长)测定OD值。
1.4 统计学方法 采用方差分析和配对t检验。
2 结果
2.1 反应板底均一性 用开启封闭的空白反应板不加任何反应液情况下于室温平衡10 min进行测定，以排除反应板本底误差。同时在不同波长下测定，可见双波长对空白反应板的OD值较单波长低(P<0.01)(见表1)。
, 百拇医药
表1 不同波长下空白反应板的OD值(n=5) 波长(nm)
±s
F
P
450
450/630
0.059±0.006 7
0.007±0.001 3
290.25
<0.01
2.2 采用单、双波长对可疑标本进行测定 在不减空白情况下单波长Cut off值为0.159，双波长Cut off值为0.105(阴性对照值小于0.05时按0.05计算)，因此单波长易造成弱阳性标本3＃漏检(见表2)。表2 可疑标本在不同波长下的OD值 波长(nm)
, 百拇医药
标本编号
阴性
对照
阳性
对照
1
2
3
4
5
450
450/630
0.131
, 百拇医药 0.072
0.182
0.141
0.157
0.112
0.162
0.120
0.171
0.137
0.076
0.023
1.291
1.243
, 百拇医药
2.3 采用空白方式对可疑标本测定结果 按试剂盒Cut off判断标准阴性对照小于0.05时按0.05计算，单波长及双波长Cut off值均为0.105时提示双波长减空白易造成弱阳性标本漏检(见表3)。表3 可疑标本在不同波长下去空白后的OD值 波长(nm)
标本编号
阴性
对照
阳性
对照
1
2
3
4
, 百拇医药
5
450
450/630
0.077
0.042
0.176
0.104
0.105
0.077
0.113
0.096
0.123
0.099
, 百拇医药
0.019
0.016
1.241
1.232
3 讨论
随着我国对输血而引起疾病传播的重视，要求实验室所用检测试剂要有很高的精度和灵敏度。目前国内HBsAg测定试剂盒经“批批检”后均已达到或超过国家的标准和要求，但对于操作时所选波长并未作严格要求。笔者在长期应用中得知在不减空白时，双波长测定优于单波长，空白测定值仅为计算时参考依据，不参与数据处理；当减空白时，单波长测定优于双波长，此时两者阴性对照的OD值均小于0.05而按0.05计算，而使可疑标本全部漏检。因此在使用酶标仪检测结果时，应合理的选择测定波长和空白方式，以使弱阳性标本及接近临界值的标本(可疑标本)筛出，以确保输血安全。 收稿日期 1999-03-22, 百拇医药
单位：236200 安徽省颍上县血站
关键词：乙型肝炎表面抗原；酶联免疫吸附测定
蚌埠医学院学报9906100
中国图书资料分类法分类号 R 392.11 R 446.61
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)测定是献血员筛选的常规检查项目之一，所用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法通常使酶标仪对检验结果进行测定。在使用过程中，笔者发现同一个HBsAg可疑标本，采用不同波长(单波长或双波长)及不同空白方式(减与不减试剂空白)所得的结果不同，现予报道。
1 材料与方法
1.1 标本来源 标本来自于本地参加无偿献血人员，经乙肝筛选测定光密度(OD)值接近临界值均为可疑标本，共5份。
, 百拇医药
1.2 试剂及仪器 试剂盒(均“批批检”)购自上海科华公司，HBsAg参考标准(批号9701，1.0 ng/ml;2.0 ng/ml；5.0 ng/ml)由上海血液中心提供；美国产STAT FAX 2100酶标仪；洗板机为北京拓普公司提供(MED-Ⅱ型)。
1.3 方法 酶标测定严格按试剂盒说明书操作，分别设空白、阴性、阳性对照孔，反应终止后，用酶标仪分别于450 nm(单波长)和450/630 nm(双波长)测定OD值。
1.4 统计学方法 采用方差分析和配对t检验。
2 结果
2.1 反应板底均一性 用开启封闭的空白反应板不加任何反应液情况下于室温平衡10 min进行测定，以排除反应板本底误差。同时在不同波长下测定，可见双波长对空白反应板的OD值较单波长低(P<0.01)(见表1)。
, 百拇医药
表1 不同波长下空白反应板的OD值(n=5) 波长(nm)
±s
F
P
450
450/630
0.059±0.006 7
0.007±0.001 3
290.25
<0.01
2.2 采用单、双波长对可疑标本进行测定 在不减空白情况下单波长Cut off值为0.159，双波长Cut off值为0.105(阴性对照值小于0.05时按0.05计算)，因此单波长易造成弱阳性标本3＃漏检(见表2)。表2 可疑标本在不同波长下的OD值 波长(nm)
, 百拇医药
标本编号
阴性
对照
阳性
对照
1
2
3
4
5
450
450/630
0.131
, 百拇医药 0.072
0.182
0.141
0.157
0.112
0.162
0.120
0.171
0.137
0.076
0.023
1.291
1.243
, 百拇医药
2.3 采用空白方式对可疑标本测定结果 按试剂盒Cut off判断标准阴性对照小于0.05时按0.05计算，单波长及双波长Cut off值均为0.105时提示双波长减空白易造成弱阳性标本漏检(见表3)。表3 可疑标本在不同波长下去空白后的OD值 波长(nm)
标本编号
阴性
对照
阳性
对照
1
2
3
4
, 百拇医药
5
450
450/630
0.077
0.042
0.176
0.104
0.105
0.077
0.113
0.096
0.123
0.099
, 百拇医药
0.019
0.016
1.241
1.232
3 讨论
随着我国对输血而引起疾病传播的重视，要求实验室所用检测试剂要有很高的精度和灵敏度。目前国内HBsAg测定试剂盒经“批批检”后均已达到或超过国家的标准和要求，但对于操作时所选波长并未作严格要求。笔者在长期应用中得知在不减空白时，双波长测定优于单波长，空白测定值仅为计算时参考依据，不参与数据处理；当减空白时，单波长测定优于双波长，此时两者阴性对照的OD值均小于0.05而按0.05计算，而使可疑标本全部漏检。因此在使用酶标仪检测结果时，应合理的选择测定波长和空白方式，以使弱阳性标本及接近临界值的标本(可疑标本)筛出，以确保输血安全。 收稿日期 1999-03-22, 百拇医药