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编号:10499322
RP-HPLC法测定降糖清胶囊中马钱素的含量
http://www.100md.com 《中草药》 1999年第11期
     作者:李吉峰 潘扬 秦小荣 张弦

    单位:南京中医药大学(210029)

    关键词:降糖清胶囊;马钱素;RP-HPLC

    中草药991108摘 要 建立了测定降糖清胶囊中马钱素含量的RP-HPLC法,固定相为Sperisorb-C18[4.6 mm (id)×250 mm]色谱柱,流动相为甲醇-水(30∶70),检测波长为236 nm;马钱素的平均加样回收率为96.52%。本法快速、专一、重现性好,为降糖清胶囊质控提供了可靠的检测手段。

    Determination of Loganin in Jiangtangqing Capsule by RP-HPLC

    Li Jifeng Pan Yang Qin Xiaorong et al.
, 百拇医药
    (Nanjing University of Traditional Chinese Medicine

    and Materia Medica, Nanjing, 210029)

    Abstract A reverse-phase HPLC method was described for the determination of loganin in Jiangtangqing Capsule, a prescription containing 12 Chinese herbal drugs including Cornus officinalis Sieb. et Zucc. for the treatment of type Ⅱ diabetes mellitus. The ingredient was separated on a Sperisorb-C18 4.6 mm (i. d.)×250 mm column, using methanol-water (30∶70) as the mobile phase, and detected at UV 236 nm. The method was rapid, specific and with good reproducibility. It can be used for the quality control of Jiangtangqing Capsule.
, 百拇医药
    Key words Jiangtangqing Capsule loganin RP-HPLC hypoglycemic Chinese prescription

    降糖清胶囊是南京中医药大学徐士清教授的经验方,原方由山茱萸、麦冬、僵蚕、地骨皮、鬼箭羽等12味药材组成,诸药经煎煮、浓缩、纯化、干燥、制粒等制剂过程制成胶囊。本品临床主要用于治疗Ⅱ型糖尿病。其主要组成药物之一山茱萸为山茱萸科植物Cornus officinalis Sied. et Zucc. 除去种子的成熟果实,除含熊果酸、齐墩果酸等三萜类成分外,主要含马钱素(loganin)、马鞭草苷等环烯醚萜苷类化合物〔1〕。山茱萸中熊果酸的定量方法药典已有收载〔2〕,而马钱素的定量方法也有薄层扫描法〔3〕、高效液相法〔4〕,我们探索用灵敏、专属的高效液相色谱法对降糖清胶囊中的马钱素进行含量测定。

    1 仪器和材料
, 百拇医药
    1.1 仪器:Waters高效液相色谱仪510 泵,U6 K进样器,486可调紫外检测仪;Sperisorb-C18柱,4.6 mm (id)×250 mm (中科院大连化学物理研究所);江申通用汉化色谱工作站 for Windows,版本号:3.20(大连江申分离技术公司);Shimadzu Libror AEL 40SM电子天平;SYZ-A石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏信达仪器厂);H66025超声波清洗机。

    1.2 试剂与药品:甲醇(分析纯);水(重蒸馏,临用前制备)。

    马钱素(loganin)为本实验室提取分离,经UV,IR,1HNMR,13CNMR及LD-MS确定结构。

    山茱萸购于浙江省临安县药材公司,经鉴定为山茱萸科植物Cornus officinalis Sieb. et Zucc. 除去种子的成熟果实;降糖清胶囊及其阴性对照品(按全方去山茱萸配制)由本校制药厂试制。
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    2 方法和结果

    2.1 色谱条件的选择:对马钱素甲醇溶液进行紫外扫描,发现其在236 nm处有最大吸收,故选择236 nm为样品的检测波长。固定相:Sperisorb-C18柱;流动相:甲醇-水(30∶70);流量:0.8 mL/min;理论塔板数按马钱素计算应不低于3 000。在此条件下,马钱素与其它组分均能达到良好分离(图1)。

    A-马钱素、B-降糖清胶囊、C-阴性对照

    马钱素A-t*R=8.541 min;B-t*R=8.807 min;C-不出峰

    图1 样品HPLC图

    2.2 马钱素对照品纯度检查:精密称取马钱素标准品10.00 mg,用甲醇溶解并定容至10 mL,吸取上述溶液20 μL,注入HPLC仪测定,归一化法计算,结果表明:马钱素对照品纯度为96.89% (n=5)。
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    2.3 提取条件选择:取供试品约1 g,置具塞离心管内,加30%甲醇5 mL超声提取15 min,3 000 r/min离心5 min,倾取上清液,过滤。同上操作共4次,每次滤液定容至10 mL,按上述实验条件进样,测定,计算,结果表明:经4次提取后即可完全提尽。

    2.4 线性关系考察:精密称取马钱素标准品10.02 mg,用甲醇溶解并定容成10 mL,作为贮备液;吸取上液0.25 mL,用流动相稀释并定容成25 mL,作为对照品液。吸取6,9,12,15,18和21 μL,注入HPLC仪测定,以进样量X(μL)为横座标,峰面积Y为纵座标,计算回归方程为Y=4024+56382X,r=0.9999,表明马钱素在60.12~210.42 ng范围内线性关系良好。

    2.5 精密度试验:精密吸取上述对照品液10 μL,注入HPLC仪,重复进行5 次测定,计算马钱素峰面积的RSD为1.58%。

, 百拇医药     2.6 稳定性试验:精密吸取上述对照品液10 μL,分别于0,1,4,8,12,24,36 h时进样测定,计算马钱素峰面积的RSD为3.87%。

    2.7 加样回收率试验:取已知含量供试品,分成5 份,每份1 g,精密称定;加入对照品贮备液0.8 mL(相当于马钱素0.8016 mg),照“样品测定”项下方法分别制备供试品液,进样测定,计算马钱素的平均加样回收率为96.52%(RSD=3.38%)。

    2.8 样品测定:取供试品1 g(药材0.5 g),精密称定,用30%甲醇20 mL分3 次(每次15 min)超声振荡提取,滤过,弃去滤渣,合并滤液,用30%甲醇定容至25 mL(药材溶液含量太大须稀释3~5倍),微孔滤膜滤过,弃去初滤液约3 mL,取滤液5 mL作为供试品液。取上液5 μL,注入HPLC仪,测定,计算,即得。结果见表1。

    表1 供试品中马钱素的含量测定 样品
, 百拇医药
    来源及批号

    平均含量

    (mg/g)

    备注

    山茱萸

    浙江临安

    8.71

    生品(烘干)

    山茱萸

    浙江临安

    5.12

    炮制品

    降糖清胶囊
, 百拇医药
    本校制药厂970910

    0.73

    炮制品

    降糖清胶囊

    本校制药厂970911

    0.78

    炮制品

    降糖清胶囊

    本校制药厂970912

    0.72

    炮制品

    2.9 重现性试验:取供试品,分成5 份,每份1 g,精密称定,照“样品测定”项下方法分别制备供试品液,进样测定,计算,样品5 次马钱素含量测定的RSD为 1.87%。
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    3 结论与讨论

    3.1 从上述结果可以看出,山茱萸及其制剂中均含有一定的马钱素,生品的马钱素含量比炮制品的略高,提示炮制过程对马钱素含量有所影响;而降糖清胶囊处方中山茱萸用炮制品,因此,有必要加强对原料炮制质量的控制。

    3.2 马钱素等环烯醚萜苷类化合物是山茱萸的主要成分,其具有增强机体免疫能力等药理作用〔5,6〕,对糖尿病的治疗是有益的,以其作为降糖清胶囊的含量测定指标具有一定意义。

    基金项目:江苏省中医管理局资助项目

    作者简介:李吉峰,男,1988年毕业于南京中医药大学中药学院,主管中药师,现为南京

    中医药大学制药厂生产技术厂长,总工程师.曾先后有十几篇文章发表在各类
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    专业杂志上,现主要从事中药外用药物的研制与开发,作为主要研制者的新药

    “复方南星止痛膏”获国家级新产品证书.

    参考文献

    1 黄泰康.常用中药成分与药理手册.北京:中国医药科技出版社,1994:368

    2 中华人民共和国药典.一部.1995:21

    3 李克明,等.中国中药杂志,1991,19:738

    4 原田正敏(日).国外医学*植物药分册,1991,6(1):20

    5 赵武述,等.中草药,1990,21:17

    6 赵武述,等.中日友好医院学报,1991,5:17,139

    收稿日期:1999-04-09, 百拇医药