益督丸对老龄小鼠白细胞介素-2和白细胞介素-6活性的影响
作者：温平康
单位：深圳市中医院 深圳 518033
关键词：益督丸，中药药理学，白细胞介素-2，白细胞介素-6
中国医院药学杂志991210
摘要 目的:研究益督丸的免疫调节作用。方法:用放射免疫法(RIA)测定白细胞介素-2(IL-2)的活性，用KD83细胞株MTT法测定白细胞介素-6(IL-6)的活性。结果:益督丸对老龄小鼠IL-2活性有明显升高作用。而对老龄小鼠异常升高的IL-6水平则有降低作用。结论:益督丸的补肾、益督、壮阳等作用与调节机体免疫功能有关。
Influence of Yidu pill on the activity of
IL-2 and IL-6 in senile mice
, 百拇医药
Wen Pingkang
Shenzhen Hospital of TCM,Shenzhen 518033
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the immune regulation of Yidu pill.METHODS：The activity of IL-2 was tested by RIA technique,and the content of IL-6 was tested by MTT technique with KD83 cells.RESULTS：Yidu pill could obviously improve the activity of IL-2,and lower the abnormal high level of IL-6.CONCLUSION：Yidu pill can reinforce kidney,nourish the Du-Meridian,and invigorate Yang;Which might be related with the immuns regulaion of Yidu pill.
, 百拇医药
KEY WORDS Yidu pill,pharmacology,intrleukin-2,interleukin-6
益督丸是我院常用院内制剂，临床用于中、老年肾阳亏惫，督脉虚损之慢性腰腿痛等老年病症，屡获良效。为探讨其免疫药理作用，我们对老龄小鼠血清白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2)，脾细胞白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)活性的变化进行了观察，以期从分子水平揭示其调节免疫的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物及分组 选择24月龄昆明种小鼠30只，体重(18±2)g，随机分3组，即益督丸高、低剂量组和阴性对照组；另选4月龄昆明种小鼠10只，作为幼龄正常对照组，各组均为♀♂各半，由省医科院动物中心提供。
1.2 给药途径、剂量、方法 益督丸由本院药剂科制备，其组成为菟丝子、杜仲、续断等，批号980213，实验时用蒸馏水配成所需浓度。益督丸高剂量组按6g.kg-1.d-1生药，低剂量组按2g.kg-1.d-1生药，两组均灌胃给药，qd，每次0.6ml，对照组灌等量自来水，疗程2周。
, http://www.100md.com
1.3 仪器与试剂 TC-2323型美国产双门全自动CO2培养箱，516MC国产双波长酶标仪，SN-682型放免γ计数仪、台式离心机等。IL-2放免检测试剂盒购自上海长征医学科学有限公司，其原理为RIAKit-双抗体法。IL-6检测细胞株为KD83细胞株，购自北京医科大学免疫中心。鼠重组白细胞介素-6标准品(浓度为1×109.L-1)、四甲基偶氮唑盐(MTT)、ConA及酸化异丙醇、RPMI1640培养液等均购自Sigma公司。
1.4 标本制备与检测方法 疗程结束后，立即断头取血，常规分离血清，按IL-2放免测定药盒说明检测IL-2活性，结果见表1。迅速无菌取脾脏，置Hank's液中，制成脾细胞悬液，用Tris-NH4Cl溶解红细胞后，再用Hank's液洗3次。等KD83细胞生长到对数生长期，将细胞数调整为1×109.L-1，加入96孔细胞培养板，每孔加细胞悬液100μl，分别加入待测样品各100μl，37℃，5%CO2培养48h后加入MTT(0.5mg.ml-1)50μl/孔，培养4h，加盐酸异丙醇(1∶300)，振荡，酶标仪测其OD值，波长570nm，绘出标准曲线，求出样品IL-6含量，见表2。统计学处理用成组资料t检验。
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2 实验结果
2.1 益督丸对于老龄小鼠血清IL-2活性影响如表1所示。
表1 各组动物血清IL-2活性变化(±s) 组 别
动物数
IL-2/ng.ml-1
幼龄对照组
8
6.2
±
1.1*2
老龄对照组
, http://www.100md.com
8
2.8
±
1.0
益督丸高剂量*3
10
4.8
±
1.3*2
益督丸低剂量*4
10
4.0
, 百拇医药
±
1.2*1
*1：与老龄空白组比较P<0.05；*2；与老龄空白组比较P<0.01；*3：剂量为6g.kg-1.d-1生药；*4：为2g.kg-1.d-1生药 结果表明：老龄小鼠血清IL-2活性水平明显低于幼龄组，经益督丸治疗2周后均有明显上升，以益督丸高剂量组最为明显(P<0.01)。
2.2 益督丸对老龄小鼠脾细胞IL-6活性的影响，结果见表2。
表2 各组动物IL-6活性变化(±s) 组 别
动物数
IL-6/u.ml-1
, 百拇医药
幼龄正常组
10
28.6
±
5.4*2
老龄空白组
10
81.6
±
10.1
益督丸高剂量*3
10
48.2
, http://www.100md.com
±
5.8*2
益督丸低剂量*4
10
5.0
±
6.4*1
*1：与老龄空白组比较P<0.05；*2；与老龄空白组比较P<0.01；*3：剂量为6g.kg-1.d-1生药；*4：为2g.kg-1.d-1生药 结果表明：老龄小鼠脾细胞IL-6活性较幼龄对照组明显升高，经益督丸治疗后均有明显回升，但仍低于幼龄正常组。
, 百拇医药
3 讨论
督脉者乃阳脉之海，其行于背部正中多次与手足三阳经及阳脉交会，对全身阳经起着调节作用。益督丸临床即用于益督壮阳，强腰健肾。许多研究表明，其方中主药杜仲、续断、菟丝子均有一定调节免疫，增加机体抗病力的作用[1]，但其复方的免疫作用及对IL-2、IL-6活性的影响尚未见报道。
IL-2又称T细胞生长因子(TCGF)，是机体免疫调节网络中最重要的细胞因子之一，它具有增强NK细胞的杀伤活性及促进B细胞分化与增殖、诱导LAK细胞的产生等重要生物学作用[2]。其在衰老时水平明显降低，本研究也证实这一结果，益督丸可升高老龄小鼠的血清IL-2水平与其益督补肾、振奋阳气的作用相一致。
IL-6是一种多功能的细胞因子，许多研究表明衰老时其水平增高，并与许多老年疾病的发生有着密切关系[3]。本实验发现老龄小鼠脾细胞IL-6水平明显高于幼龄正常组，经益督丸治疗后两组均有明显下降(P<0.01)，说明益督丸具有降低衰老时异常升高的IL-6水平的作用。
, 百拇医药
本研究结果证实：益督丸具有较好的抗免疫衰老作用，其具体作用在哪一个环节，以及益督脉这一治法与免疫调节的关系等都有待进一步研究。
参考文献
1 阴健，郭力弓.中药现代研究与临床运用.北京：学苑出版社，1995
2 曹雪涛.白细胞介素-2的基础与临床.北京：北京科技出版社，1990：50
3 戴庆棠.白细胞介素-6与老年病.中华老年医学杂志，1995：14(5)：317
收稿日期：1998年12月30日, 百拇医药
单位：深圳市中医院 深圳 518033
关键词：益督丸，中药药理学，白细胞介素-2，白细胞介素-6
中国医院药学杂志991210
摘要 目的:研究益督丸的免疫调节作用。方法:用放射免疫法(RIA)测定白细胞介素-2(IL-2)的活性，用KD83细胞株MTT法测定白细胞介素-6(IL-6)的活性。结果:益督丸对老龄小鼠IL-2活性有明显升高作用。而对老龄小鼠异常升高的IL-6水平则有降低作用。结论:益督丸的补肾、益督、壮阳等作用与调节机体免疫功能有关。
Influence of Yidu pill on the activity of
IL-2 and IL-6 in senile mice
, 百拇医药
Wen Pingkang
Shenzhen Hospital of TCM,Shenzhen 518033
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the immune regulation of Yidu pill.METHODS：The activity of IL-2 was tested by RIA technique,and the content of IL-6 was tested by MTT technique with KD83 cells.RESULTS：Yidu pill could obviously improve the activity of IL-2,and lower the abnormal high level of IL-6.CONCLUSION：Yidu pill can reinforce kidney,nourish the Du-Meridian,and invigorate Yang;Which might be related with the immuns regulaion of Yidu pill.
, 百拇医药
KEY WORDS Yidu pill,pharmacology,intrleukin-2,interleukin-6
益督丸是我院常用院内制剂，临床用于中、老年肾阳亏惫，督脉虚损之慢性腰腿痛等老年病症，屡获良效。为探讨其免疫药理作用，我们对老龄小鼠血清白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2)，脾细胞白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)活性的变化进行了观察，以期从分子水平揭示其调节免疫的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物及分组 选择24月龄昆明种小鼠30只，体重(18±2)g，随机分3组，即益督丸高、低剂量组和阴性对照组；另选4月龄昆明种小鼠10只，作为幼龄正常对照组，各组均为♀♂各半，由省医科院动物中心提供。
1.2 给药途径、剂量、方法 益督丸由本院药剂科制备，其组成为菟丝子、杜仲、续断等，批号980213，实验时用蒸馏水配成所需浓度。益督丸高剂量组按6g.kg-1.d-1生药，低剂量组按2g.kg-1.d-1生药，两组均灌胃给药，qd，每次0.6ml，对照组灌等量自来水，疗程2周。
, http://www.100md.com
1.3 仪器与试剂 TC-2323型美国产双门全自动CO2培养箱，516MC国产双波长酶标仪，SN-682型放免γ计数仪、台式离心机等。IL-2放免检测试剂盒购自上海长征医学科学有限公司，其原理为RIAKit-双抗体法。IL-6检测细胞株为KD83细胞株，购自北京医科大学免疫中心。鼠重组白细胞介素-6标准品(浓度为1×109.L-1)、四甲基偶氮唑盐(MTT)、ConA及酸化异丙醇、RPMI1640培养液等均购自Sigma公司。
1.4 标本制备与检测方法 疗程结束后，立即断头取血，常规分离血清，按IL-2放免测定药盒说明检测IL-2活性，结果见表1。迅速无菌取脾脏，置Hank's液中，制成脾细胞悬液，用Tris-NH4Cl溶解红细胞后，再用Hank's液洗3次。等KD83细胞生长到对数生长期，将细胞数调整为1×109.L-1，加入96孔细胞培养板，每孔加细胞悬液100μl，分别加入待测样品各100μl，37℃，5%CO2培养48h后加入MTT(0.5mg.ml-1)50μl/孔，培养4h，加盐酸异丙醇(1∶300)，振荡，酶标仪测其OD值，波长570nm，绘出标准曲线，求出样品IL-6含量，见表2。统计学处理用成组资料t检验。
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2 实验结果
2.1 益督丸对于老龄小鼠血清IL-2活性影响如表1所示。
表1 各组动物血清IL-2活性变化(±s) 组 别
动物数
IL-2/ng.ml-1
幼龄对照组
8
6.2
±
1.1*2
老龄对照组
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8
2.8
±
1.0
益督丸高剂量*3
10
4.8
±
1.3*2
益督丸低剂量*4
10
4.0
, 百拇医药
±
1.2*1
*1：与老龄空白组比较P<0.05；*2；与老龄空白组比较P<0.01；*3：剂量为6g.kg-1.d-1生药；*4：为2g.kg-1.d-1生药 结果表明：老龄小鼠血清IL-2活性水平明显低于幼龄组，经益督丸治疗2周后均有明显上升，以益督丸高剂量组最为明显(P<0.01)。
2.2 益督丸对老龄小鼠脾细胞IL-6活性的影响，结果见表2。
表2 各组动物IL-6活性变化(±s) 组 别
动物数
IL-6/u.ml-1
, 百拇医药
幼龄正常组
10
28.6
±
5.4*2
老龄空白组
10
81.6
±
10.1
益督丸高剂量*3
10
48.2
, http://www.100md.com
±
5.8*2
益督丸低剂量*4
10
5.0
±
6.4*1
*1：与老龄空白组比较P<0.05；*2；与老龄空白组比较P<0.01；*3：剂量为6g.kg-1.d-1生药；*4：为2g.kg-1.d-1生药 结果表明：老龄小鼠脾细胞IL-6活性较幼龄对照组明显升高，经益督丸治疗后均有明显回升，但仍低于幼龄正常组。
, 百拇医药
3 讨论
督脉者乃阳脉之海，其行于背部正中多次与手足三阳经及阳脉交会，对全身阳经起着调节作用。益督丸临床即用于益督壮阳，强腰健肾。许多研究表明，其方中主药杜仲、续断、菟丝子均有一定调节免疫，增加机体抗病力的作用[1]，但其复方的免疫作用及对IL-2、IL-6活性的影响尚未见报道。
IL-2又称T细胞生长因子(TCGF)，是机体免疫调节网络中最重要的细胞因子之一，它具有增强NK细胞的杀伤活性及促进B细胞分化与增殖、诱导LAK细胞的产生等重要生物学作用[2]。其在衰老时水平明显降低，本研究也证实这一结果，益督丸可升高老龄小鼠的血清IL-2水平与其益督补肾、振奋阳气的作用相一致。
IL-6是一种多功能的细胞因子，许多研究表明衰老时其水平增高，并与许多老年疾病的发生有着密切关系[3]。本实验发现老龄小鼠脾细胞IL-6水平明显高于幼龄正常组，经益督丸治疗后两组均有明显下降(P<0.01)，说明益督丸具有降低衰老时异常升高的IL-6水平的作用。
, 百拇医药
本研究结果证实：益督丸具有较好的抗免疫衰老作用，其具体作用在哪一个环节，以及益督脉这一治法与免疫调节的关系等都有待进一步研究。
参考文献
1 阴健，郭力弓.中药现代研究与临床运用.北京：学苑出版社，1995
2 曹雪涛.白细胞介素-2的基础与临床.北京：北京科技出版社，1990：50
3 戴庆棠.白细胞介素-6与老年病.中华老年医学杂志，1995：14(5)：317
收稿日期：1998年12月30日, 百拇医药