96型-血液凝固分析仪的抗干扰功能
作者：程大卫 张威 阮长耿
单位：苏州医学院附属一院，江苏省血液研究所，苏州，215006
关键词：血液凝固；仪器；抗干扰；血液学
苏州医学院学报991256 摘要 采用96型-血液凝固分析仪，测定加入不同浓度溶血性血红蛋白、直接胆红素、间接胆红素和乳脂蛋白等4种干扰物的实验血浆的PT、APTT和TT。结果表明该仪对加入低浓度干扰物的实验血浆，具有抗干扰的能力，但对含有较高或高浓度干扰物的实验血浆，则抗干扰能力差。
中图法分类 R466.11
血液凝固分析仪(血凝仪)-血液学检验术已广泛应用于临床，并逐步更新血液学检验项目。由于各种疾病引起血液-血浆外观及色泽的变化，对检测系统有程度不一的干扰。96型-血凝仪具有抗上述物质干扰的功能，我们对该仪抗干扰的能力作实验研究。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料：
1.1.1 实验用血浆：20名供血员的109mmol/L枸橼酸钠抗凝血，抗凝剂与血的比例为1∶9。采血后1h内分离血浆；抗凝血以1200～1500g离心，血浆等量混合，立即上机测定。全部过程使用塑料试管和吸管。
1.1.2 96型-血凝仪：上海通用机电技术研究所生产。
1.1.3 干扰物试剂：Interference Check.A 79290(日本国际试药株式会社产品)，溶血性血红蛋白49g/L，直接胆红素1.84g/L，间接胆红素2.04g/L，乳脂蛋白(Lipemia，包含中性脂肪、脂质、脂肪酸、牛白蛋白)29700 Formazine浊度单位。
1.1.4 实验用血凝试剂：DADE试剂(Dade International Inc USA)。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 96型-血凝仪重复性测定试验：采用实验用血浆，在血凝仪上分别测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)。各重复测定10次。
1.2.2 4种干扰物分别用实验血浆稀释和混合，终浓度为：溶血性血红蛋白0～4.9g/L，直接胆红素0～184mg/L，间接胆红素0～204mg/L，乳脂蛋白0～2970u。
1.2.3 各种浓度干扰物-血浆混合待测物，在血凝仪上分别测定PT、APTT和TT。各2次，取均数。
2 结果
2.1 96型-血凝仪重复测定PT、APTT和TT的结果(
±s):PT为11.57±0.37s,CV3.20%;APTT为36.72±0.80s，CV2.20%；TT为17.50±0.69s，CV3.94%。
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2.2 96型-血凝仪测定加入各类不同浓度干扰物的实验血浆PT、APTT和TT的结果：见表1～4。
表1 96型-血凝仪测定溶血性血红蛋白
对PT、APTT和TT的影响
添加浓度(%)
(g/L)
0
0
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0.98
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1.96
, 百拇医药 60
2.94
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4.90
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s
影响度(%)
12.2
0
12.7
4.1
, 百拇医药 12.4
1.6
13.3
9.0
12.6
3.3
13.6
11.5
APTT
s
影响度(%)
36.2
0
, 百拇医药
38.0
5.1
39.1
8.1
38.3
5.8
38.6
6.8
37.8
4.4
TT
s
影响度(%)
, 百拇医药
12.4
0
12.0
-3.2
12.5
0.4
12.1
-2.4
11.8
-4.8
11.9
-4.0
表2 96型-血凝仪测定直接胆红素
, 百拇医药
对PT、APTT和TT的影响
添加浓度(%)
(mg/L)
0
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, 百拇医药
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PT
s
影响度(%)
13.0
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-3.5
13.2
1.5
13.8
6.5
, http://www.100md.com
14.6
12.7
14.8
14.2
APTT
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影响度(%)
37.7
0
40.1
6.1
41.1
8.9
, 百拇医药
40.3
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45.5
20.5
46.6
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TT
s
影响度(%)
12.3
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1.2
, 百拇医药
12.5
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-0.4
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-3.7
12.2
-0.8
表3 96型-血凝仪测定间接胆红素
对PT、APTT和TT的影响
添加浓度(%)
(mg/L)
, 百拇医药
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0
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PT
s
, http://www.100md.com
影响度(%)
13.4
0
12.7
-5.2
13.3
-0.7
13.1
-2.6
13.3
-0.7
13.2
-1.5
, 百拇医药
APTT
s
影响度(%)
41.0
0
40.2
-1.9
40.8
-0.4
41.8
2.1
37.9
-7.6
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36.6
-10.8
TT
s
影响度(%)
11.8
0
11.9
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12.1
3.0
12.6
6.4
, http://www.100md.com
12.6
6.4
12.9
9.7
表4 96型-血凝仪测定乳脂蛋白
对PT、APTT和TT的影响
添加浓度(%)
(FTU)
0
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20
594
40
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80
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影响度(%)
12.7
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-3.9
13.3
4.3
12.9
1.6
12.3
-3.1
11.9
-6.7
APTT
s
影响度(%)
36.2
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0
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41.7
15.3
41.1
13.5
TT
s
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影响度(%)
12.3
0
11.8
-4.0
12.4
0.8
11.2
-9.3
11.8
-4.0
12.0
-2.8
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3 讨论
临床沿用几十年的“凝血时间测定法”，由于方法学简陋致检测灵敏度很低，仅能检测出重型血友病中因子Ⅷ∶C和Ⅸ∶C水平<0.15%的患者，远远不能满足现代医学的要求，故应淘汰。中华医学会血液分会和检验分会联合建议以“APTT检测法”替代[1]。为更完善地了解患者(尤其是手术前)体内凝血和纤溶系统状态，扩展为检测PT、APTT、TT和Fig(纤维蛋白原定量)，定为“血凝常规”检验项目，达到简便、快速、实用。市场已有试剂盒提供，还可用多种血凝仪测定，方便于临床广泛应用。沪产96型-血凝仪使用于血液病患者正常外观血浆标本，测定PT、APTT和TT时变异系数都<5%，效果较理想，可满足临床要求。当“血凝常规”替代“凝血时间”后，在血凝仪上检测的对象越出血液病范畴，面对各科临床病症，涉及许多异常外观血浆标本，如深浅不一的黄疸色、含脂类或蛋白引起的混浊等都成为干扰物，干扰测定结果。为此，我们做了干扰性试验，采用日本临床化学会制定的日本工业规格(JIS)的统一标准干扰物，并借鉴临床检验标准委员会(NCCLS)制定的干扰性试验检测方法[2]。
, http://www.100md.com
实验结果表明，溶血性血红蛋白、直接胆红素、间接胆红素和乳脂蛋白等4种干扰物对PT、APTT和TT测定均有不同程度的干扰。PT测定时，低浓度干扰物(0%～40%)影响度较小(≤±5%)，高浓度(60%～100%)则影响度较大(>±5%～14%)，且出现非规则的递增(减)性波动，提示该仪对高浓度干扰物的反应灵敏度呈现不稳定性；TT测定中，除高浓度间接胆红素和乳脂蛋白(60%～100%)对测定有较大干扰(影响度>±5%～±9%)外，其余各种浓度的4种干扰物均影响较小(≤±5%)；在测定APTT时发现，仅20%～60%间接胆红素影响度≤5%，而当其在80%～100%时就和其余3种干扰物的各种浓度(20%～100%)一样，对测定的干扰都较大，影响度>±5%～23%，同样也出现非规则的递增(减)性波动。
以上结果说明，96型-血凝仪对加入低浓度干扰物的实验血浆，即血浆外观呈淡黄色或微浊时，具有抗干扰的能力，对测定的影响度较小，属正常范围内波动。但对含有较高或高浓度干扰物的实验血浆，则其对测定过程和结果的影响度很大，反映该仪抗高浓度干扰物的能力差。这是由于该仪采用的是透射比浊法原理[3]：根据待检样品在凝固过程中吸光度的变化来确定凝固终点的检测方法，血浆同试剂快速混合，在混合的瞬间，吸光度最弱，将吸光度强度置为0%；随着血浆纤维蛋白原转变成纤维蛋白，标本吸光度也逐渐增加，当标本凝固完全以后，吸光度就稳定下来，此时吸光最强，将吸光度强度置为100%，0%～100%之间的光强度变化被描成一条曲线，所对应的时间为凝血时间。如被测标本自身存在一定量的色泽或浊度，则将明显干扰测定过程，使该仪判别终点发生偏差，引起影响度增大且呈非规则的递增(减)性波动，从而最终影响测定结果。综上所述，应用“血凝常规”测定时，96型-血凝仪适合标本量不大的医疗单位使用，如遇深色黄疸或明显浊度的血浆标本，可临时采用手工测定法。
参考文献
1 王鸿利.出血时间和凝血时间的建议.临床检验信息，1998，5(2)∶49
2 芦田克已.ホルマジリ浊度数.检查と技术，1992，20(13)∶1125
3 丛玉隆，王淑娟，主编.今日临床检验学.北京∶中国科学技术出版社，1997∶196
(1999年3月1日收稿), 百拇医药
单位：苏州医学院附属一院，江苏省血液研究所，苏州，215006
关键词：血液凝固；仪器；抗干扰；血液学
苏州医学院学报991256 摘要 采用96型-血液凝固分析仪，测定加入不同浓度溶血性血红蛋白、直接胆红素、间接胆红素和乳脂蛋白等4种干扰物的实验血浆的PT、APTT和TT。结果表明该仪对加入低浓度干扰物的实验血浆，具有抗干扰的能力，但对含有较高或高浓度干扰物的实验血浆，则抗干扰能力差。
中图法分类 R466.11
血液凝固分析仪(血凝仪)-血液学检验术已广泛应用于临床，并逐步更新血液学检验项目。由于各种疾病引起血液-血浆外观及色泽的变化，对检测系统有程度不一的干扰。96型-血凝仪具有抗上述物质干扰的功能，我们对该仪抗干扰的能力作实验研究。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料：
1.1.1 实验用血浆：20名供血员的109mmol/L枸橼酸钠抗凝血，抗凝剂与血的比例为1∶9。采血后1h内分离血浆；抗凝血以1200～1500g离心，血浆等量混合，立即上机测定。全部过程使用塑料试管和吸管。
1.1.2 96型-血凝仪：上海通用机电技术研究所生产。
1.1.3 干扰物试剂：Interference Check.A 79290(日本国际试药株式会社产品)，溶血性血红蛋白49g/L，直接胆红素1.84g/L，间接胆红素2.04g/L，乳脂蛋白(Lipemia，包含中性脂肪、脂质、脂肪酸、牛白蛋白)29700 Formazine浊度单位。
1.1.4 实验用血凝试剂：DADE试剂(Dade International Inc USA)。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 96型-血凝仪重复性测定试验：采用实验用血浆，在血凝仪上分别测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)。各重复测定10次。
1.2.2 4种干扰物分别用实验血浆稀释和混合，终浓度为：溶血性血红蛋白0～4.9g/L，直接胆红素0～184mg/L，间接胆红素0～204mg/L，乳脂蛋白0～2970u。
1.2.3 各种浓度干扰物-血浆混合待测物，在血凝仪上分别测定PT、APTT和TT。各2次，取均数。
2 结果
2.1 96型-血凝仪重复测定PT、APTT和TT的结果(
±s):PT为11.57±0.37s,CV3.20%;APTT为36.72±0.80s，CV2.20%；TT为17.50±0.69s，CV3.94%。, 百拇医药
2.2 96型-血凝仪测定加入各类不同浓度干扰物的实验血浆PT、APTT和TT的结果：见表1～4。
表1 96型-血凝仪测定溶血性血红蛋白
对PT、APTT和TT的影响
添加浓度(%)
(g/L)
0
0
20
0.98
40
1.96
, 百拇医药 60
2.94
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影响度(%)
12.2
0
12.7
4.1
, 百拇医药 12.4
1.6
13.3
9.0
12.6
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13.6
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s
影响度(%)
36.2
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38.0
5.1
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38.6
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12.4
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-3.2
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-4.8
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表2 96型-血凝仪测定直接胆红素
, 百拇医药
对PT、APTT和TT的影响
添加浓度(%)
(mg/L)
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表3 96型-血凝仪测定间接胆红素
对PT、APTT和TT的影响
添加浓度(%)
(mg/L)
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12.6
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12.9
9.7
表4 96型-血凝仪测定乳脂蛋白
对PT、APTT和TT的影响
添加浓度(%)
(FTU)
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1188
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影响度(%)
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12.4
0.8
11.2
-9.3
11.8
-4.0
12.0
-2.8
, 百拇医药
3 讨论
临床沿用几十年的“凝血时间测定法”，由于方法学简陋致检测灵敏度很低，仅能检测出重型血友病中因子Ⅷ∶C和Ⅸ∶C水平<0.15%的患者，远远不能满足现代医学的要求，故应淘汰。中华医学会血液分会和检验分会联合建议以“APTT检测法”替代[1]。为更完善地了解患者(尤其是手术前)体内凝血和纤溶系统状态，扩展为检测PT、APTT、TT和Fig(纤维蛋白原定量)，定为“血凝常规”检验项目，达到简便、快速、实用。市场已有试剂盒提供，还可用多种血凝仪测定，方便于临床广泛应用。沪产96型-血凝仪使用于血液病患者正常外观血浆标本，测定PT、APTT和TT时变异系数都<5%，效果较理想，可满足临床要求。当“血凝常规”替代“凝血时间”后，在血凝仪上检测的对象越出血液病范畴，面对各科临床病症，涉及许多异常外观血浆标本，如深浅不一的黄疸色、含脂类或蛋白引起的混浊等都成为干扰物，干扰测定结果。为此，我们做了干扰性试验，采用日本临床化学会制定的日本工业规格(JIS)的统一标准干扰物，并借鉴临床检验标准委员会(NCCLS)制定的干扰性试验检测方法[2]。
, http://www.100md.com
实验结果表明，溶血性血红蛋白、直接胆红素、间接胆红素和乳脂蛋白等4种干扰物对PT、APTT和TT测定均有不同程度的干扰。PT测定时，低浓度干扰物(0%～40%)影响度较小(≤±5%)，高浓度(60%～100%)则影响度较大(>±5%～14%)，且出现非规则的递增(减)性波动，提示该仪对高浓度干扰物的反应灵敏度呈现不稳定性；TT测定中，除高浓度间接胆红素和乳脂蛋白(60%～100%)对测定有较大干扰(影响度>±5%～±9%)外，其余各种浓度的4种干扰物均影响较小(≤±5%)；在测定APTT时发现，仅20%～60%间接胆红素影响度≤5%，而当其在80%～100%时就和其余3种干扰物的各种浓度(20%～100%)一样，对测定的干扰都较大，影响度>±5%～23%，同样也出现非规则的递增(减)性波动。
以上结果说明，96型-血凝仪对加入低浓度干扰物的实验血浆，即血浆外观呈淡黄色或微浊时，具有抗干扰的能力，对测定的影响度较小，属正常范围内波动。但对含有较高或高浓度干扰物的实验血浆，则其对测定过程和结果的影响度很大，反映该仪抗高浓度干扰物的能力差。这是由于该仪采用的是透射比浊法原理[3]：根据待检样品在凝固过程中吸光度的变化来确定凝固终点的检测方法，血浆同试剂快速混合，在混合的瞬间，吸光度最弱，将吸光度强度置为0%；随着血浆纤维蛋白原转变成纤维蛋白，标本吸光度也逐渐增加，当标本凝固完全以后，吸光度就稳定下来，此时吸光最强，将吸光度强度置为100%，0%～100%之间的光强度变化被描成一条曲线，所对应的时间为凝血时间。如被测标本自身存在一定量的色泽或浊度，则将明显干扰测定过程，使该仪判别终点发生偏差，引起影响度增大且呈非规则的递增(减)性波动，从而最终影响测定结果。综上所述，应用“血凝常规”测定时，96型-血凝仪适合标本量不大的医疗单位使用，如遇深色黄疸或明显浊度的血浆标本，可临时采用手工测定法。
参考文献
1 王鸿利.出血时间和凝血时间的建议.临床检验信息，1998，5(2)∶49
2 芦田克已.ホルマジリ浊度数.检查と技术，1992，20(13)∶1125
3 丛玉隆，王淑娟，主编.今日临床检验学.北京∶中国科学技术出版社，1997∶196
(1999年3月1日收稿), 百拇医药