急性单核细胞白血病免疫表型研究
作者：姚锡珍 李建勇 夏学鸣 阮长耿 耿美菊 王爱青 陈黎 朱明清
单位：姚锡珍 李建勇 夏学鸣 阮长耿(苏州医学院附属第一医院血液科，江苏省血液研究所，苏州，215006)；耿美菊 王爱青 陈黎 朱明清(苏州医学院核医学生物技术重点实验室)
关键词：急性单核细胞白血病；免疫表型；流式细胞术
苏州医学院学报991213 摘要 目的 探讨急性单核细胞白血病(M5)的免疫表型特征及其诊断价值。方法 采用一组系列相关单克隆抗体和流式细胞术及间接免疫荧光技术对60例FAB分型拟诊为M5的患者进行免疫表型分析。结果 4例诊断为急性巨核细胞白血病，5例为急性淋巴细胞白血病；51例最后诊断为M5的患者中，免疫分型显示8%裸型，49%表达CD34，髓系标志以CD13表达最高，其次为CD33和CD14，分别有24%和18%的患者表达T系和B系相关抗原。结论 免疫分型对于急性单核细胞白血病的诊断具有重要价值。
, 百拇医药
中图法分类 R733.7104
Immunophenotypic Study on the Acute Monocytic Leukemia
Yao Xizheng, Li Jianyong, Xia Xueming,et al
(Clinical Division of Medical College, Jiangsu Institute of Hemato logy, Suzhou Medical College，Suzhou，215006)
Abstract Objective To explore the immunophenotypic feature of acute monocytic leukemia(M5) and its diagnostic significance. Methods A panel of lineage associated monoclonal antibodies and flow cytometric immunofluorescence technique were used to immunophenotype 60 cases with FAB diag nosed M5. Results Combining with immunophenotype, 4 and 5 cases w ere diagnosed as acute megakaryocytic leuke mia and acute lymphoblastic leukemia respectively, and 51 cases were finally dia gnosed as M5. Of the 51 cases with M5,immunophenotype showed that 8% was nude, 49% expressed CD34,as for the myeloid markers, CD13 were more frequently express ed,then CD33 and CD14. T and B lineage associated antigens were expressed in 24% and 18%,respectively. Conclution Immunophenotyping was importa nt for the diagnosis of acute monocytic leukemia.
, 百拇医药
Key words acute monocytic leukemia; immunophenotype; flow cyt ometry
急性髓细胞白血病的分型主要依靠形态学及细胞化学，近20年来，由于单克隆抗体的不断开发，以及流式细胞术的广泛开展，使急性白血病免疫表型研究得到迅猛发展，对一些形态学难以分类的急性髓细胞白血病的诊断及其分型具有重要价值。现报道初诊急性单核细胞白血病的免疫表型特征，并探讨了免疫分型在急性单核细胞白血病诊断与鉴别诊断中的价值。
1 资料和方法
1.1 研究对象：1995年11月～1999年5月经形态学、细胞化学诊断或拟诊为急性单核细胞白血病(M5)初治患者60例，主要来自苏州医学院附属第一医院、江苏省血液研究所，部分来自苏州医学院附属儿童医院、苏州100医院及苏州沧浪区医院。男38例，女22例。年龄7～75岁，平均41岁。
, 百拇医药
1.2 形态学检查：骨髓及血涂片经瑞氏染色后分类计数，常规行髓过氧化物酶染色、非特异性酯酶+氟化物抑制试验及糖原染色等细胞化学检查，按法国-美国-英国协作组(FAB)标准确定急性白血病类型。
1.3 免疫表型检测：所用单克隆抗体包括T淋巴细胞系列的CD2、CD3、CD7；B淋巴系列的CD10、CD19、CD22；髓细胞系列的CD13、CD14、CD33、CD42b、CD61；干/祖细胞标志CD34。抗体主要为法国Immunotech公司产品。样本为治疗前新鲜骨髓标本，肝素抗凝，密度梯度离心法常规分离制备单个核细胞悬液，采用活细胞间接免疫荧光技术染色，流式细胞仪(EpicsXL型，Coulter,USA)检测。结果判断：CD34阳性细胞≥10%为阳性，髓系单抗及B淋系单阳性细胞≥20%，T淋系单抗阳性细胞≥30%为阳性。
2 结果
60例患者中，57例按FAB标准诊断为M5，3例形态学难以区分是急性淋巴细胞白血病(ALL)L2型或AML的M5。结合免疫表型特征57例FAB为M5的患者中，3例最后诊断为AML的急性巨核细胞白血病(M7),另有3例和2例分别诊断为T系和B系ALL；3例L2/M5难鉴别者中，1例最后诊断为M7，2例为M5。9例最后诊断为非M5的患者的免疫表型特征见附表。
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附表 9例非急性单核细胞白血病的免疫表型 例号
初诊
阳性免疫表型
最后诊断
1
2
3
4
5
6
7
8
9
, 百拇医药
M5
M5
M5
M5
M5
M5
M5
M5
L2/M5
CD13CD33CD14CD42bCD61
CD2CD3CD7CD33
CD13CD33CD42bCD61CD34
, 百拇医药
CD2CD3CD7CD13CD34
CD2CD3CD7
CD10CD19CD22CD13
CD10CD19CD22CD13
CD10CD19CD13CD33
CD42bCD61CD34
CD13CD33CD42bCD61CD34
M7
T-ALL
M7
T-ALL
, 百拇医药
T-ALL
B-ALL
B-ALL
M7
M7
FAB分型结合免疫表型特征，60例患者中，51例最后诊断为M5，其中，4例(8%)无任何抗原表达，即为裸型；25例(49%)表达干细胞标志CD34，其中2例为纯CD34阳性；髓系标志中CD13、CD33、CD14阳性率分别为65%、55%及14%；12例(24%)至少表达1个T淋巴系标志〔CD2和(或)CD7〕；9例(18%)至少表达1个B淋巴系标志〔CD10和(或)CD19〕。
3 讨论
除形态学、细胞化学和细胞遗传学分析外，免疫分型已成为急性白血病诊断的关键技术[1]。在AML，对于髓过氧化物酶阴性患者的诊断及鉴别诊断具有重要价值[2]。大量系列特异和相关单克隆抗体的问世，以及流式细胞术的使用，使急性白血病免疫分型的敏感性和特异性不断提高[3，4]。对于AML，我们报道了急性早幼粒细胞白血病(M3)[5,6]和急性粒细胞白血病部分分化型(M2)[4]的免疫表型特征。有关急性单核细胞白血病的免疫表型特点文献报道较少，为此，本研究探讨了M5患者的免疫表型特征及其免疫分型对其诊断和鉴别诊断的价值。
, 百拇医药
60例形态学诊断或不能排除M5的患者，9例根据系列相关/特异的免疫表型得到纠正，其中4例诊断为M7，5例为ALL，表明在形态学上M5易误诊为AML的M7和ALL，而三者细胞化学染色均可表现为髓过氧化物酶阴性。所以为提高急性白血病的诊断水平，建议对所有患者，特别是髓过氧化物酶阴性者进行免疫分型。
51例最后诊断为M5的患者中，髓系相关抗原中以CD13表达最高，其次为CD33，而仅14%的患者表达单核细胞相关的CD14，表明其在单核细胞白血病中的诊断价值有限。CD68也为单核细胞相关抗原[1]，同时检测CD14和CD68可能提高免疫分型在诊断单核细胞白血病中的价值。本组分别有24%和18%的患者表达T系和B系相关抗原，而Casasnovas等[7]报道所有M5患者均无B系相关抗原表达，是否存在种族或地区差异还有待进一步研究。
参考文献
1 Garand R, Robillard N. Immunophenotypic characterization of ac ute leukemias and chronic lymphoproliferative disorders: practical recommenda tions and classifications. Hematol Cell Ther,1996,38∶471
, 百拇医药
2 李建勇,等. 免疫学和细胞遗传学诊断FAB标准难以分型的急性白血病. 江苏医药 ,1998,10(24)∶721
3 李建勇,等. 219例成人急性白血病免疫表型特点. 实验血液学杂志,1996,4(4)∶ 411
4 李建勇,等. 急性髓细胞白血病M2/t(8;21)型的免疫表型及临床特征. 1998,18(1 )∶11
5 曾慧兰,等. 急性早幼粒细胞白血病免疫表型分析. 中华血液学杂志,1998,19 (1)∶31
6 仇惠英,等. 急性早幼粒细胞白血病的形态学、免疫性及细胞遗传学特征. 江苏 医药,1997,23(10)∶704
7 Casasnovas RO,et al. Immunophenotypic patterns and cytogenetic anomali es in acute non-lymphoblastic leukemia subtypes: a prospective study of 432 pati ents. Leukemia,1998,12∶34
(1999年9月3日收稿), 百拇医药
单位：姚锡珍 李建勇 夏学鸣 阮长耿(苏州医学院附属第一医院血液科，江苏省血液研究所，苏州，215006)；耿美菊 王爱青 陈黎 朱明清(苏州医学院核医学生物技术重点实验室)
关键词：急性单核细胞白血病；免疫表型；流式细胞术
苏州医学院学报991213 摘要 目的 探讨急性单核细胞白血病(M5)的免疫表型特征及其诊断价值。方法 采用一组系列相关单克隆抗体和流式细胞术及间接免疫荧光技术对60例FAB分型拟诊为M5的患者进行免疫表型分析。结果 4例诊断为急性巨核细胞白血病，5例为急性淋巴细胞白血病；51例最后诊断为M5的患者中，免疫分型显示8%裸型，49%表达CD34，髓系标志以CD13表达最高，其次为CD33和CD14，分别有24%和18%的患者表达T系和B系相关抗原。结论 免疫分型对于急性单核细胞白血病的诊断具有重要价值。
, 百拇医药
中图法分类 R733.7104
Immunophenotypic Study on the Acute Monocytic Leukemia
Yao Xizheng, Li Jianyong, Xia Xueming,et al
(Clinical Division of Medical College, Jiangsu Institute of Hemato logy, Suzhou Medical College，Suzhou，215006)
Abstract Objective To explore the immunophenotypic feature of acute monocytic leukemia(M5) and its diagnostic significance. Methods A panel of lineage associated monoclonal antibodies and flow cytometric immunofluorescence technique were used to immunophenotype 60 cases with FAB diag nosed M5. Results Combining with immunophenotype, 4 and 5 cases w ere diagnosed as acute megakaryocytic leuke mia and acute lymphoblastic leukemia respectively, and 51 cases were finally dia gnosed as M5. Of the 51 cases with M5,immunophenotype showed that 8% was nude, 49% expressed CD34,as for the myeloid markers, CD13 were more frequently express ed,then CD33 and CD14. T and B lineage associated antigens were expressed in 24% and 18%,respectively. Conclution Immunophenotyping was importa nt for the diagnosis of acute monocytic leukemia.
, 百拇医药
Key words acute monocytic leukemia; immunophenotype; flow cyt ometry
急性髓细胞白血病的分型主要依靠形态学及细胞化学，近20年来，由于单克隆抗体的不断开发，以及流式细胞术的广泛开展，使急性白血病免疫表型研究得到迅猛发展，对一些形态学难以分类的急性髓细胞白血病的诊断及其分型具有重要价值。现报道初诊急性单核细胞白血病的免疫表型特征，并探讨了免疫分型在急性单核细胞白血病诊断与鉴别诊断中的价值。
1 资料和方法
1.1 研究对象：1995年11月～1999年5月经形态学、细胞化学诊断或拟诊为急性单核细胞白血病(M5)初治患者60例，主要来自苏州医学院附属第一医院、江苏省血液研究所，部分来自苏州医学院附属儿童医院、苏州100医院及苏州沧浪区医院。男38例，女22例。年龄7～75岁，平均41岁。
, 百拇医药
1.2 形态学检查：骨髓及血涂片经瑞氏染色后分类计数，常规行髓过氧化物酶染色、非特异性酯酶+氟化物抑制试验及糖原染色等细胞化学检查，按法国-美国-英国协作组(FAB)标准确定急性白血病类型。
1.3 免疫表型检测：所用单克隆抗体包括T淋巴细胞系列的CD2、CD3、CD7；B淋巴系列的CD10、CD19、CD22；髓细胞系列的CD13、CD14、CD33、CD42b、CD61；干/祖细胞标志CD34。抗体主要为法国Immunotech公司产品。样本为治疗前新鲜骨髓标本，肝素抗凝，密度梯度离心法常规分离制备单个核细胞悬液，采用活细胞间接免疫荧光技术染色，流式细胞仪(EpicsXL型，Coulter,USA)检测。结果判断：CD34阳性细胞≥10%为阳性，髓系单抗及B淋系单阳性细胞≥20%，T淋系单抗阳性细胞≥30%为阳性。
2 结果
60例患者中，57例按FAB标准诊断为M5，3例形态学难以区分是急性淋巴细胞白血病(ALL)L2型或AML的M5。结合免疫表型特征57例FAB为M5的患者中，3例最后诊断为AML的急性巨核细胞白血病(M7),另有3例和2例分别诊断为T系和B系ALL；3例L2/M5难鉴别者中，1例最后诊断为M7，2例为M5。9例最后诊断为非M5的患者的免疫表型特征见附表。
, http://www.100md.com
附表 9例非急性单核细胞白血病的免疫表型 例号
初诊
阳性免疫表型
最后诊断
1
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3
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, 百拇医药
M5
M5
M5
M5
M5
M5
M5
M5
L2/M5
CD13CD33CD14CD42bCD61
CD2CD3CD7CD33
CD13CD33CD42bCD61CD34
, 百拇医药
CD2CD3CD7CD13CD34
CD2CD3CD7
CD10CD19CD22CD13
CD10CD19CD22CD13
CD10CD19CD13CD33
CD42bCD61CD34
CD13CD33CD42bCD61CD34
M7
T-ALL
M7
T-ALL
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T-ALL
B-ALL
B-ALL
M7
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FAB分型结合免疫表型特征，60例患者中，51例最后诊断为M5，其中，4例(8%)无任何抗原表达，即为裸型；25例(49%)表达干细胞标志CD34，其中2例为纯CD34阳性；髓系标志中CD13、CD33、CD14阳性率分别为65%、55%及14%；12例(24%)至少表达1个T淋巴系标志〔CD2和(或)CD7〕；9例(18%)至少表达1个B淋巴系标志〔CD10和(或)CD19〕。
3 讨论
除形态学、细胞化学和细胞遗传学分析外，免疫分型已成为急性白血病诊断的关键技术[1]。在AML，对于髓过氧化物酶阴性患者的诊断及鉴别诊断具有重要价值[2]。大量系列特异和相关单克隆抗体的问世，以及流式细胞术的使用，使急性白血病免疫分型的敏感性和特异性不断提高[3，4]。对于AML，我们报道了急性早幼粒细胞白血病(M3)[5,6]和急性粒细胞白血病部分分化型(M2)[4]的免疫表型特征。有关急性单核细胞白血病的免疫表型特点文献报道较少，为此，本研究探讨了M5患者的免疫表型特征及其免疫分型对其诊断和鉴别诊断的价值。
, 百拇医药
60例形态学诊断或不能排除M5的患者，9例根据系列相关/特异的免疫表型得到纠正，其中4例诊断为M7，5例为ALL，表明在形态学上M5易误诊为AML的M7和ALL，而三者细胞化学染色均可表现为髓过氧化物酶阴性。所以为提高急性白血病的诊断水平，建议对所有患者，特别是髓过氧化物酶阴性者进行免疫分型。
51例最后诊断为M5的患者中，髓系相关抗原中以CD13表达最高，其次为CD33，而仅14%的患者表达单核细胞相关的CD14，表明其在单核细胞白血病中的诊断价值有限。CD68也为单核细胞相关抗原[1]，同时检测CD14和CD68可能提高免疫分型在诊断单核细胞白血病中的价值。本组分别有24%和18%的患者表达T系和B系相关抗原，而Casasnovas等[7]报道所有M5患者均无B系相关抗原表达，是否存在种族或地区差异还有待进一步研究。
参考文献
1 Garand R, Robillard N. Immunophenotypic characterization of ac ute leukemias and chronic lymphoproliferative disorders: practical recommenda tions and classifications. Hematol Cell Ther,1996,38∶471
, 百拇医药
2 李建勇,等. 免疫学和细胞遗传学诊断FAB标准难以分型的急性白血病. 江苏医药 ,1998,10(24)∶721
3 李建勇,等. 219例成人急性白血病免疫表型特点. 实验血液学杂志,1996,4(4)∶ 411
4 李建勇,等. 急性髓细胞白血病M2/t(8;21)型的免疫表型及临床特征. 1998,18(1 )∶11
5 曾慧兰,等. 急性早幼粒细胞白血病免疫表型分析. 中华血液学杂志,1998,19 (1)∶31
6 仇惠英,等. 急性早幼粒细胞白血病的形态学、免疫性及细胞遗传学特征. 江苏 医药,1997,23(10)∶704
7 Casasnovas RO,et al. Immunophenotypic patterns and cytogenetic anomali es in acute non-lymphoblastic leukemia subtypes: a prospective study of 432 pati ents. Leukemia,1998,12∶34
(1999年9月3日收稿), 百拇医药