柄海鞘(Styela clava)化学成分的研究
作者：顾谦群 俎成立 方玉春 刘红兵 管华诗
单位：(青岛海洋大学海洋药物与食品研究所，青岛 266003)
关键词：海鞘；柄海鞘；GC-MS联用
中国海洋药物000102 摘 要：应用GC-MS联用技术从柄海鞘(Styela clava)中鉴定了3个高级脂肪酸类化合物：十六酸、十七酸、十八酸，以及六个甾醇类化合物：(22Z)-26，27-二降-麦角甾-5，22-二烯-3β-醇、胆甾-5.22-二烯-3β-醇、胆甾-8(14)-烯-3α-醇、豆甾-4，22-二烯-3β-醇、(22Z)-5α-麦角甾-7，22-二烯-3β-醇、豆甾-8(14)-烯-3β醇、豆甾-8(14)-烯-3β-醇。
STUDIES ON THE CHEMICAL CONSTITUENTS OF ASCIDIAN STYELA CLAVA
, http://www.100md.com
Gu Qianqun Zu Chengli Fang Yuchun Liu Hongbing Guan Huashi
(Institute of marine drugs and foods, Ocean University of Qing Dao,Qing Dao,266003)
ABSTRACT：Three fatty acids and six sterols from Ascidian Styela clava were identified by the method of GC-MS. These compounds are hexadecanoic acid,heptadecanoic acid,octadecanoic acid,(22Z)-26,27-dinorergosta-5,22-dien-3β-ol,cholesta-5,22-dien-3β-ol,cholest-8(14)-en-3α-ol,(22Z)-5α-ergosta-7,22-dien-3β-ol,stigmasta-4,22-dien-3β-ol and stigmast-8(14)-en-3β-ol.
, 百拇医药
KEY WORDS：Ascidian,Styela clava,GC-MS▲
海鞘(Ascidian)属于脊椎动物门的尾索动物亚门。海鞘纲与尾索动物亚门的另外两个纲一起被称为被囊动物，全世界大约有2000多种被囊动物，其中海鞘占大多数。近年，从海鞘中发现许多结构新颖、活性独特的化合物，引起天然产物化学家和药物学家的重视。我国海鞘记录有11科约65种，仅青岛地区就有20余种，其中柄海鞘Styela clava分布最广。国外对Styela属海鞘有所研究[1]；国内中山大学对长纹海鞘(Ascidia longistriata)化学成分有过报道[2]，对青岛海域产海鞘化学成分研究尚未见报道。为了从海洋生物中寻找有活性的先导化合物，我们对青岛海域产海鞘的化学成分进行了研究。本文报道利用GC-MS方法，从中分离鉴定的两类共9个成分，其中化合物Ⅰ～Ⅲ为高级脂肪酸类化合物，Ⅳ～Ⅸ为甾醇类化合物。
1 实验部分
, 百拇医药
1.1 样品
柄海鞘(Styela clava Herdman)，1996年4月采集于青岛附近海域，由青岛海洋大学生命科学学院刘云老师鉴定。
1.2 仪器与试剂
熔点仪：WRX-1S型(上海物理光学仪器厂)(温度未校正)；GC-EIMS仪：Finnigan TSQ-7000型。柱层析和薄层层析硅胶均为青岛海洋化工厂产品，Sephadex LH-20为Pharmacia进口分装产品，所用试剂均为分析纯。
1.3 提取与分离
柄海鞘(1.027kg)洗净后加4.0L95%EtOH浸提，EtOH提取液过滤，浓缩至浸膏，EtOAc/H2O分配，EtOAc萃取液用无水Na2SO4干燥，浓缩得到浸膏(10.13g)。浸膏依次进行常压硅胶柱层析(MeOH/CHCl3梯度洗脱)和Sephadex LH-20凝胶柱层析(MeOH/CHCl3，1/1)，主要得到两个组分，组分Ⅰ的TLC呈现脂肪酸类物质的层析性质；组分Ⅱ为一无色针晶，甾体反应阳性，TLC显示一个斑点(Rf=0.5,Acetone/Petrolieu ether,1/8)，但熔距较长：215.5～217.6℃，推测可能是甾体的混合物。
, 百拇医药
1.4 GC-MS分析条件
色谱条件：HP-1毛细管柱，柱长17m,内径0.25mm,涂层0.11μm。分流进样，10∶1。程序升温，180℃-231℃(3.3℃/min)，>310℃(30℃/min)。载气，He,～0.8ml/min(180℃)。进样温度，280℃。接口温度，280℃。
质谱条件：四级杆质谱，离化电压，70ev。扫描范围，50～500/0.8s。所得化合物用计算机检索NBS标准质谱库确定。
2 结果与讨论
2.1 组分1的GC-MS分析
组分1的GC图(见图1)有3个峰，各化合物的质谱图相似：m/z 60是羧基和γ-氢原子进行麦氏重排的结果；m/z 73，129，185等是含羧基的离子片断，以上离子的存在充分表明了化合物属于羧酸类物质[3]。另外，还出现了一系列烃离子碎片m/z 57，71，85，99等，说明有长脂肪链存在。结合化合物的分子离子峰，并经计算机检索鉴定各化合物分别为：十六酸(hexadecanoic acid)，Ⅰ；十七酸(heptadecanoic acid)，Ⅱ；十八酸(octadecanoic acid),Ⅲ。质核比数据见表1。
, http://www.100md.com
图1 组分Ⅰ的GC图
Chart 1 GC chromatogram of fraction Ⅰ
表1 化合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ的质谱数据及GC-RRT
Tab 1 the MS data and GC-RRT of compounds Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ 序
号
RRT
(min)
化合
物
质谱特征离子质荷比(m/z)
, http://www.100md.com
1
3.23
Ⅰ
256(74)，213(39)，185(30)，171(33)，157(30)，143(18)，129(72)，127(8)，113(21)，99(12)，85(30)，73(100)，71(42)，60(69)，57(62)
2
3.97
Ⅱ
270(79)，227(42)，213(13)，185(38)，143(18)，127(8)，113(21)，71(49)，129(79)，97(31)，85(33)，83(34)，73(100)，60(69)，57(63)
, 百拇医药
3
5.49
Ⅲ
284(100)，241(39)，199(15)，185(50)，171(24)，157(8)，143(15)，129(81)，98(30)，85(32)，73(94)，60(66)，57(63)
2.2 组分2的GC-MS分析
组分2的GC图(见图2)呈见8个峰，但只检索出了其中6个化合物。这些甾醇按结构主要分两类：第一类包括化合物Ⅳ，Ⅴ，Ⅶ和Ⅷ，结构中甾核及侧链C22均有双键，质谱中有这类化合物的典型裂解片断m/z 300[4]，该离子的形成过程是侧链双键由C22转至C23，然后进行麦氏重排而生成。结构计算机检索结果，确定了它们的结构分别为：(22Z)-26，27-二降-麦角甾-5，22-二烯-3β-醇(22Z)-26，27-dinorergosta-5,22-dien-3β-ol),Ⅳ;胆甾-5，22-二烯-3β-醇(cholesta-5,22-dien-3β-ol),Ⅴ;豆甾-4，22-二烯-3β-醇(stigmasta-4,22-dien-3β-ol),Ⅶ;(22Z)-5α-麦角甾-7，22-二烯-3β-醇((22Z)-5α-ergosta-7,22-dien-3β-ol),Ⅷ。第二类包括化合物Ⅵ和Ⅸ，结构中甾核有双键而侧链饱和，质谱中除了存在M-15，M-18，M-18-15外，还存在该类化合物典型的裂解碎片M-18-67，M-18-93，M-18-121等，这是侧链饱和的甾醇类化合物的特征离子[5]。结合计算机检索结果，确定了它们的结构分别为：胆甾-8(14)-烯-3α-醇(Cholest-8(14)-en-3α-ol),6和豆甾-8(14)-烯-3β-醇(stigmast-8(14)-en-3β-ol),9。质核比数据见表2。
, http://www.100md.com
图2 组分Ⅱ的GC图
Chart 2 GC chromatogram of fraction Ⅱ
表2 化合物Ⅳ～Ⅸ的质谱数据及GC-RRT
Tab 2 the MS data and GC-RRT of compound Ⅳ～Ⅸ 序
号
RRT
(min)
化合
物
质谱特征离子质荷比(m/z)
, http://www.100md.com 1
16.47
Ⅳ
370(100)，355(18)，352(12)，337(14)，300(78)，285(30)，273(32)，271(51)，255(63)，213(20)，173(14)，159(38)，145(40)，97(61)，81(30)，55(48)
2
17.46
Ⅴ
384(100)，369(11)，366(10)，351(20)，300(58)，285(20)，273(31)，271(54)，255(59)，213(20)，159(30)，111(30)，81(20)，69(34)，55(30)
, 百拇医药
3
17.79
Ⅵ
386(100)，371(25)，368(30)，353(23)，301(48)，275(58)，273(23)，247(11)，247(10)，231(11)，232(12)，215(60)，173(15)，145(32)，107(62)，81(36)，69(18)
4
17.94
Ⅶ
398(100)，383(7)，380(5)，365(6)，300(53)，285(25)，273(30)，271(63)，255(60)，229(12)，213(18)，173(22)，159(44)，145(40)，81(40)，81(40)，69(58)
, 百拇医药
5
18.14
Ⅷ
412(100)，397(3)，394(3)，379(10)，300(38)，285(10)，273(27)，271(65)，255(50)，213(21)，175(16)，159(32)，145(33)，107(20)，97(28)，83(45)，69(48)，55(45)
6
18.57
Ⅸ
414(100)，399(19)，396(26)，381(20)，329(42)，303(29)，273(22)，246(10)，231(7)，232(11)，213(21)，145(30)，107(23)，69(14)，55(21)
, 百拇医药
参考文献：
[1]Dvidson B S,Ascidians:producers of amino acid derived metabolites,Chem Rev,1993(93):1771.
[2]王艳红，闫素君，苏镜娱，等.长纹海鞘(Ascidia longistriara)的化学成分的研究，中山大学学报.1999，38(2)，118.
[3]丛浦珠编著.质谱学在天然有机化学中的应用.北京：科学出版社，1987，68.
[4]丛浦珠编著.质谱学在天然有机化学中的应用.北京：科学出版社，1987，756.
[5]孟艳辉，苏镜娱，曾陇梅.海绵Hircinia variabilis化学成分研究.中山大学学报，1993，32(2)，90.
收稿日期：99-07-01, http://www.100md.com
单位：(青岛海洋大学海洋药物与食品研究所，青岛 266003)
关键词：海鞘；柄海鞘；GC-MS联用
中国海洋药物000102 摘 要：应用GC-MS联用技术从柄海鞘(Styela clava)中鉴定了3个高级脂肪酸类化合物：十六酸、十七酸、十八酸，以及六个甾醇类化合物：(22Z)-26，27-二降-麦角甾-5，22-二烯-3β-醇、胆甾-5.22-二烯-3β-醇、胆甾-8(14)-烯-3α-醇、豆甾-4，22-二烯-3β-醇、(22Z)-5α-麦角甾-7，22-二烯-3β-醇、豆甾-8(14)-烯-3β醇、豆甾-8(14)-烯-3β-醇。
STUDIES ON THE CHEMICAL CONSTITUENTS OF ASCIDIAN STYELA CLAVA
, http://www.100md.com
Gu Qianqun Zu Chengli Fang Yuchun Liu Hongbing Guan Huashi
(Institute of marine drugs and foods, Ocean University of Qing Dao,Qing Dao,266003)
ABSTRACT：Three fatty acids and six sterols from Ascidian Styela clava were identified by the method of GC-MS. These compounds are hexadecanoic acid,heptadecanoic acid,octadecanoic acid,(22Z)-26,27-dinorergosta-5,22-dien-3β-ol,cholesta-5,22-dien-3β-ol,cholest-8(14)-en-3α-ol,(22Z)-5α-ergosta-7,22-dien-3β-ol,stigmasta-4,22-dien-3β-ol and stigmast-8(14)-en-3β-ol.
, 百拇医药
KEY WORDS：Ascidian,Styela clava,GC-MS▲
海鞘(Ascidian)属于脊椎动物门的尾索动物亚门。海鞘纲与尾索动物亚门的另外两个纲一起被称为被囊动物，全世界大约有2000多种被囊动物，其中海鞘占大多数。近年，从海鞘中发现许多结构新颖、活性独特的化合物，引起天然产物化学家和药物学家的重视。我国海鞘记录有11科约65种，仅青岛地区就有20余种，其中柄海鞘Styela clava分布最广。国外对Styela属海鞘有所研究[1]；国内中山大学对长纹海鞘(Ascidia longistriata)化学成分有过报道[2]，对青岛海域产海鞘化学成分研究尚未见报道。为了从海洋生物中寻找有活性的先导化合物，我们对青岛海域产海鞘的化学成分进行了研究。本文报道利用GC-MS方法，从中分离鉴定的两类共9个成分，其中化合物Ⅰ～Ⅲ为高级脂肪酸类化合物，Ⅳ～Ⅸ为甾醇类化合物。
1 实验部分
, 百拇医药
1.1 样品
柄海鞘(Styela clava Herdman)，1996年4月采集于青岛附近海域，由青岛海洋大学生命科学学院刘云老师鉴定。
1.2 仪器与试剂
熔点仪：WRX-1S型(上海物理光学仪器厂)(温度未校正)；GC-EIMS仪：Finnigan TSQ-7000型。柱层析和薄层层析硅胶均为青岛海洋化工厂产品，Sephadex LH-20为Pharmacia进口分装产品，所用试剂均为分析纯。
1.3 提取与分离
柄海鞘(1.027kg)洗净后加4.0L95%EtOH浸提，EtOH提取液过滤，浓缩至浸膏，EtOAc/H2O分配，EtOAc萃取液用无水Na2SO4干燥，浓缩得到浸膏(10.13g)。浸膏依次进行常压硅胶柱层析(MeOH/CHCl3梯度洗脱)和Sephadex LH-20凝胶柱层析(MeOH/CHCl3，1/1)，主要得到两个组分，组分Ⅰ的TLC呈现脂肪酸类物质的层析性质；组分Ⅱ为一无色针晶，甾体反应阳性，TLC显示一个斑点(Rf=0.5,Acetone/Petrolieu ether,1/8)，但熔距较长：215.5～217.6℃，推测可能是甾体的混合物。
, 百拇医药
1.4 GC-MS分析条件
色谱条件：HP-1毛细管柱，柱长17m,内径0.25mm,涂层0.11μm。分流进样，10∶1。程序升温，180℃-231℃(3.3℃/min)，>310℃(30℃/min)。载气，He,～0.8ml/min(180℃)。进样温度，280℃。接口温度，280℃。
质谱条件：四级杆质谱，离化电压，70ev。扫描范围，50～500/0.8s。所得化合物用计算机检索NBS标准质谱库确定。
2 结果与讨论
2.1 组分1的GC-MS分析
组分1的GC图(见图1)有3个峰，各化合物的质谱图相似：m/z 60是羧基和γ-氢原子进行麦氏重排的结果；m/z 73，129，185等是含羧基的离子片断，以上离子的存在充分表明了化合物属于羧酸类物质[3]。另外，还出现了一系列烃离子碎片m/z 57，71，85，99等，说明有长脂肪链存在。结合化合物的分子离子峰，并经计算机检索鉴定各化合物分别为：十六酸(hexadecanoic acid)，Ⅰ；十七酸(heptadecanoic acid)，Ⅱ；十八酸(octadecanoic acid),Ⅲ。质核比数据见表1。
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图1 组分Ⅰ的GC图
Chart 1 GC chromatogram of fraction Ⅰ
表1 化合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ的质谱数据及GC-RRT
Tab 1 the MS data and GC-RRT of compounds Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ 序
号
RRT
(min)
化合
物
质谱特征离子质荷比(m/z)
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1
3.23
Ⅰ
256(74)，213(39)，185(30)，171(33)，157(30)，143(18)，129(72)，127(8)，113(21)，99(12)，85(30)，73(100)，71(42)，60(69)，57(62)
2
3.97
Ⅱ
270(79)，227(42)，213(13)，185(38)，143(18)，127(8)，113(21)，71(49)，129(79)，97(31)，85(33)，83(34)，73(100)，60(69)，57(63)
, 百拇医药
3
5.49
Ⅲ
284(100)，241(39)，199(15)，185(50)，171(24)，157(8)，143(15)，129(81)，98(30)，85(32)，73(94)，60(66)，57(63)
2.2 组分2的GC-MS分析
组分2的GC图(见图2)呈见8个峰，但只检索出了其中6个化合物。这些甾醇按结构主要分两类：第一类包括化合物Ⅳ，Ⅴ，Ⅶ和Ⅷ，结构中甾核及侧链C22均有双键，质谱中有这类化合物的典型裂解片断m/z 300[4]，该离子的形成过程是侧链双键由C22转至C23，然后进行麦氏重排而生成。结构计算机检索结果，确定了它们的结构分别为：(22Z)-26，27-二降-麦角甾-5，22-二烯-3β-醇(22Z)-26，27-dinorergosta-5,22-dien-3β-ol),Ⅳ;胆甾-5，22-二烯-3β-醇(cholesta-5,22-dien-3β-ol),Ⅴ;豆甾-4，22-二烯-3β-醇(stigmasta-4,22-dien-3β-ol),Ⅶ;(22Z)-5α-麦角甾-7，22-二烯-3β-醇((22Z)-5α-ergosta-7,22-dien-3β-ol),Ⅷ。第二类包括化合物Ⅵ和Ⅸ，结构中甾核有双键而侧链饱和，质谱中除了存在M-15，M-18，M-18-15外，还存在该类化合物典型的裂解碎片M-18-67，M-18-93，M-18-121等，这是侧链饱和的甾醇类化合物的特征离子[5]。结合计算机检索结果，确定了它们的结构分别为：胆甾-8(14)-烯-3α-醇(Cholest-8(14)-en-3α-ol),6和豆甾-8(14)-烯-3β-醇(stigmast-8(14)-en-3β-ol),9。质核比数据见表2。
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图2 组分Ⅱ的GC图
Chart 2 GC chromatogram of fraction Ⅱ
表2 化合物Ⅳ～Ⅸ的质谱数据及GC-RRT
Tab 2 the MS data and GC-RRT of compound Ⅳ～Ⅸ 序
号
RRT
(min)
化合
物
质谱特征离子质荷比(m/z)
, http://www.100md.com 1
16.47
Ⅳ
370(100)，355(18)，352(12)，337(14)，300(78)，285(30)，273(32)，271(51)，255(63)，213(20)，173(14)，159(38)，145(40)，97(61)，81(30)，55(48)
2
17.46
Ⅴ
384(100)，369(11)，366(10)，351(20)，300(58)，285(20)，273(31)，271(54)，255(59)，213(20)，159(30)，111(30)，81(20)，69(34)，55(30)
, 百拇医药
3
17.79
Ⅵ
386(100)，371(25)，368(30)，353(23)，301(48)，275(58)，273(23)，247(11)，247(10)，231(11)，232(12)，215(60)，173(15)，145(32)，107(62)，81(36)，69(18)
4
17.94
Ⅶ
398(100)，383(7)，380(5)，365(6)，300(53)，285(25)，273(30)，271(63)，255(60)，229(12)，213(18)，173(22)，159(44)，145(40)，81(40)，81(40)，69(58)
, 百拇医药
5
18.14
Ⅷ
412(100)，397(3)，394(3)，379(10)，300(38)，285(10)，273(27)，271(65)，255(50)，213(21)，175(16)，159(32)，145(33)，107(20)，97(28)，83(45)，69(48)，55(45)
6
18.57
Ⅸ
414(100)，399(19)，396(26)，381(20)，329(42)，303(29)，273(22)，246(10)，231(7)，232(11)，213(21)，145(30)，107(23)，69(14)，55(21)
, 百拇医药
参考文献：
[1]Dvidson B S,Ascidians:producers of amino acid derived metabolites,Chem Rev,1993(93):1771.
[2]王艳红，闫素君，苏镜娱，等.长纹海鞘(Ascidia longistriara)的化学成分的研究，中山大学学报.1999，38(2)，118.
[3]丛浦珠编著.质谱学在天然有机化学中的应用.北京：科学出版社，1987，68.
[4]丛浦珠编著.质谱学在天然有机化学中的应用.北京：科学出版社，1987，756.
[5]孟艳辉，苏镜娱，曾陇梅.海绵Hircinia variabilis化学成分研究.中山大学学报，1993，32(2)，90.
收稿日期：99-07-01, http://www.100md.com