Ⅰ抗孵育时间对免疫组织化学实验结果的影响(摘要)
作者：陈彦红 王廷华 朱兴宝
单位：陈彦红(昆明医学院神经科学研究所，昆明 650031)； 王廷华(昆明医学院神经科学研究所，昆明 650031)； 朱兴宝(昆明医学院第一附属医院神经外科，昆明 650032 )
关键词：Ⅰ抗；孵育时间；免疫组织化学；实验结果
昆明医学院学学报000127 分类号：R 651.2▲
为了解不同的Ⅰ抗孵育时间对免疫组织化学实验结果的影响，用成年SD大鼠脊髓L5节段制作冰冻切片(20 μm)并分为两组，分别按程序1，2用NGF抗体(1∶3 000)作免疫组织化学ABC法染色.程序1：0.05 mol/L PBS (pH 7.2)， 5 min×3；3%H2O2， 室温，30 min；0.05 mol/L PBS (pH 7.2)，5 min×3；0.4% Triton X-100， 15 min； 2% 羊血清，37℃，30 min；I抗兔抗NGF,(1:3 000)，37℃，2 h；0.05 mol/L PBS (pH 7.2)， 5 min×3； Ⅱ抗羊抗兔IgG(1:200)， 37℃， 1 h；0.05 mol/L PBS (pH 7.2)，5 min×3；ABC ( 1:100)，37℃， 1.5 h；0.05 mol/L PBS (pH 7.2)，5 min×3；0.05 mol/L Tris-HCl， DAB显色，5～10 min,5 min；0.05 mol/L PBS (pH 7.2)，5 min×3.程序2：除Ⅰ抗孵育时间改为4℃， 48 h外，余者同程序1.结果两种程序均可获得免疫组织化学阳性结果.但程序1者主要是神经元胞浆染色，程序2者则除胞浆染色外，胞核亦明显染色，且胞浆阳性反应较程序1者深.表明Ⅰ抗于4℃孵育48 h，阳性反应明显较37℃孵育2 h者好.胞核有染色，可能是因孵育48 h使Ⅰ抗有足够时间穿透核膜所致.提示用不同的时间孵育Ⅰ抗对免疫组织化学实验结果有影响.■
收稿日期：1999-12-20, 百拇医药
单位：陈彦红(昆明医学院神经科学研究所，昆明 650031)； 王廷华(昆明医学院神经科学研究所，昆明 650031)； 朱兴宝(昆明医学院第一附属医院神经外科，昆明 650032 )
关键词：Ⅰ抗；孵育时间；免疫组织化学；实验结果
昆明医学院学学报000127 分类号：R 651.2▲
为了解不同的Ⅰ抗孵育时间对免疫组织化学实验结果的影响，用成年SD大鼠脊髓L5节段制作冰冻切片(20 μm)并分为两组，分别按程序1，2用NGF抗体(1∶3 000)作免疫组织化学ABC法染色.程序1：0.05 mol/L PBS (pH 7.2)， 5 min×3；3%H2O2， 室温，30 min；0.05 mol/L PBS (pH 7.2)，5 min×3；0.4% Triton X-100， 15 min； 2% 羊血清，37℃，30 min；I抗兔抗NGF,(1:3 000)，37℃，2 h；0.05 mol/L PBS (pH 7.2)， 5 min×3； Ⅱ抗羊抗兔IgG(1:200)， 37℃， 1 h；0.05 mol/L PBS (pH 7.2)，5 min×3；ABC ( 1:100)，37℃， 1.5 h；0.05 mol/L PBS (pH 7.2)，5 min×3；0.05 mol/L Tris-HCl， DAB显色，5～10 min,5 min；0.05 mol/L PBS (pH 7.2)，5 min×3.程序2：除Ⅰ抗孵育时间改为4℃， 48 h外，余者同程序1.结果两种程序均可获得免疫组织化学阳性结果.但程序1者主要是神经元胞浆染色，程序2者则除胞浆染色外，胞核亦明显染色，且胞浆阳性反应较程序1者深.表明Ⅰ抗于4℃孵育48 h，阳性反应明显较37℃孵育2 h者好.胞核有染色，可能是因孵育48 h使Ⅰ抗有足够时间穿透核膜所致.提示用不同的时间孵育Ⅰ抗对免疫组织化学实验结果有影响.■
收稿日期：1999-12-20, 百拇医药