恶性血液病患者游离Fas的检测及临床意义
作者：郑佳 刘复强 翟艳玲 刘元波 王天 李守静 赵相印
单位：(首都医科大学附属北京同仁医院血液科)
关键词：游离Fas；恶性血液病；细胞凋亡
首都医科大学学报000113 摘 要：为了解游离Fas (sFas ) 在恶性血液病中的水平及临床意义，用酶联免疫吸附法测定了60例恶性血液病患者的血清sFas。结果：恶性血液病患者血清sFas质量浓度高于正常人(P<0.01)，治疗后sFas下降，下降的程度与疗效有关，但治疗前sFas质量浓度的高低与疗效预测无关。结果提示：sFas对恶性血液病的诊断及疗效判定有一定意义，并可能对其发病机制产生影响。
分类号：R733
The Serum Levels of Soluble Fas in
, 百拇医药
Patients with Malignant Hematologic
Diseases and its Clinical Implication
Zheng Jia Liu Fuqiang Zhai Yanling Liu Yuanpo
Wang Tian Li Shoujing Zhao Xiangyin
(Department of Hematology,Beijing Tongren Hospital, Affiliate of Capital University of Medical Sciences)
Abstract：In order to study the serum levels of soluble Fas (sFas) in malignant hematologic diseases and its clinical implication, serum levels of sFas in 60 patients with malignant hematologic diseases and in a control group of 30 health volunteers were measured by sandwich enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) method.Before chemotherapy, the serum levels of sFas in patients with malignant hematologic diseases were significantly higher than those of control group(P<0.01), and were not related to respose to chemotherapy. After chemotherapy, the levels of sFas significantly lowered in complete remission (CR) group (P<0.05), but did not in unremission (NR) group. The levels and changes of sFas might be served as a reference finger to diagnosis some malignant hematologic diseases and to evaluate chemotherapy effect. sFas might be involved in pathogenesis of some malignant hematologic diseases .
, 百拇医药
Key words：soluble Fas; malignant hematologic diseases; apoptosis▲
Fas抗原(又称Apo-1，CD95)是介导细胞凋亡的膜受体分子，其表达异常或功能缺陷所致的凋亡路径障碍，对肿瘤的形成和维持具有重要的病理生理意义[1]。由于缺乏跨膜蛋白而游离于血清中的Fas分子称为游离Fas(sFas)。为探讨sFas是否参与了Fas-FasL(Fas配体)信号传递系统，它在恶性血液病中的表达如何，以及对恶性血液病患者的疗效及预后的判定有无帮助，进行了此项研究。
1 临床资料和方法
1.1 病例和标本
60例血清标本全部来自1996年10月至1998年12月我院血液科住院患者，男30例，女30例，年龄23～73岁(中位年龄47岁)。其中急性白血病(AL)22例，完全缓解(CR)及部分缓解(PR)12例，未缓解(NR)10例；非霍奇金淋巴瘤(NHL)27例，CR及PR 19例，稳定(NC)及进展(PD)8例；慢性粒细胞性白血病(CML)7例，CR 6例，NR 1例；多发性骨髓瘤(MM)4例，PR 2例，无效(NE)2例。诊断及疗效标准符合文献[2]。30例健康志愿者作为对照，其中男15例，女15例，年龄23～33岁(中位年龄28岁)。患者在初诊时和化疗后取静脉血2 mL，不抗凝，血液凝固后分离血清，-20 ℃保存，避免反复冻融。
, 百拇医药
1.2 试剂盒和方法
试剂盒为美国Biosource International公司Biosource Cytoscreen药盒。
实验方法：采用双抗夹心酶联免疫吸附法测定，操作按说明书进行。酶标仪为Bio-Red450型。
1.3 统计学方法
样本均数间比较采用t检验，治疗前后比较采用配对t检验。
2 结果
恶性血液病患者初诊时sFas测定结果见表1。在恶性血液病中，sFas质量浓度与疗效的关系见表2(因部分病例缺乏治疗前后的对应资料，未纳入本表统计)。
表1 正常人与恶性血液病患者sFas比较 组别
, 百拇医药
n
ρ(sFas)/(μg。L-1)
正常对照组
30
3.37±1.46
AL组
22
7.62±2.28**
NHL组
27
12.58±7.56**
, http://www.100md.com
CML组
7
8.68±1.74**
MM组
4
12.11±5.75**
**与正常对照比较P<0.01表2 4种恶性血液病sFas质量浓度与疗效的关系 病种
疗效
n
ρ(sFas)/(μg。L-1)
, http://www.100md.com
P值(配对t检验)
化疗前
化疗后
AL
CR
12
6.86±1.58
4.18±2.31
<0.05
NR
6
7.91±3.45
7.27±3.16
, 百拇医药
>0.05
NHL
CR+PR
17
11.84±4.56
8.54±4.24
<0.05
NC+PD
5
12.81±7.75
11.43±5.39
>0.05
, 百拇医药 CML
CR
4
9.47±1.62
4.43±2.84
NR
1
9.30
8.47
MM
PR
1
11.98
, http://www.100md.com
3.20
NE
2
14.03±4.64
12.87±4.17
由表2可见，上述4种恶性血液病化疗后sFas均有所下降，在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤，化疗前后sFas值经配对t检验显示有效(CR、PR)组差别有显著性(P<0.05)，无效(NR、NC、PD)组差别无显著性(P>0.05)。因CML、MM组样本数小，未行统计学处理。
sFas对恶性血液病患者治疗反应的预测：化疗前AL患者有效组sFas为(7.18±1.39) μg/L，无效组为(8.16±3.26) μg/L，2组比较无显著性差异(P>0.05)。NHL患者有效组sFas为(12.29±5.26) μg/L，无效组为(13.17±7.66) μg/L，2组比较无显著性差异(P>0.05)。因CML、MM组样本数小，未行统计学处理。可见，化疗前sFas水平不能预测恶性血液病对治疗的反应。3 讨论
, 百拇医药
细胞凋亡作为维持机体自身稳定的负调节机制，在恶性肿瘤的病理机制研究中日益受到重视。Fas及其天然配体FasL是介导凋亡的重要膜蛋白分子。当FasL结合到细胞表面的Fas分子后，后者发生交联，向胞内传递死亡信号，导致该Fas阳性细胞凋亡[3]。Fas/Apo-1抗原是由325个氨基酸组成的相对分子质量约为4.5万的跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子和神经生长因子(TNF/NGF)受体超家庭成员，为Ⅰ型跨膜蛋白，其分子结构中有2个具有重要功能的区域，其一为约由70个氨基酸组成的传递凋亡信号所需的结构域，称为“死亡结构域”。若此功能区缺失突变，Fas介导的细胞凋亡功能也随之消失[4]。白血病细胞Fas表达明显下调，细胞凋亡受到抑制，可能是导致白血病细胞大量存在的原因之一[5]。其二为17个氨基酸构成的Fas疏水跨膜(TM)区。研究发现耐受Fas抗体介导的凋亡作用的骨肉瘤细胞的Fas基因表达有正常和变异2种，前者表达产物为完整膜Fas(mFas)；后者则表达了1个可溶性或分泌性的相对分子质量4万的Fas蛋白。它在Fas基因转录的mRNA变换剪接时丢失了63个碱基对框架[6，7]，sFas就是这种变换剪接所致跨膜蛋白缺乏的产物。目前， sFas的成功检测也为上述基因变异提供了直接的证据。
, 百拇医药
sFas的意义尚不十分清楚，关于其在恶性肿瘤时的表达报告不一[8，9]，但多数研究提示在恶性肿瘤时sFas升高[10]。本研究结果显示在恶性血液病血清sFas均较正常人升高，化疗后sFas均有所下降，下降的水平与疗效有关，但化疗前sFas质量浓度的高低与判断预后无关。故sFas水平与恶性血液病的肿瘤负荷有关，对恶性血液病的诊断及疗效判定有一定意义。最近有人发现带有变异的信使RNA转染的细胞上清液能阻断由Fas抗体介导的凋亡[7]。
推测sFas与膜Fas竞争性结合FasL，从而阻断由Fas介导的细胞凋亡。另外，sFas作为膜Fas的脱落部分，减低了细胞膜上Fas的密度，也减少了Fas介导的凋亡。总之，游离Fas可能作为Fas的阻断因子，通过影响Fas-FasL信号传递系统而参与恶性疾病的发病机制。
在我们检测的标本中，正常人sFas水平较为一致，但在疾病状态(尤其是NHL和MM)sFas表达的范围差异较大，对这些不同表达的含义及sFas与其他凋亡相关蛋白的相互关系需要进一步研究阐明。■
, 百拇医药
参考文献：
[1]Shima Y, Nishimoto N, Ogata A, et al. Myeloma cells express Fas antigen/APO-1(CD95) but only some are sensitive to anti-Fas antibody resul-ting in apoptosis . Blood,1995,85:757～764
[2]张之南主编.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京:科学出版社,1998
[3]Nagata S, Golstein P. The Fas death factor. Science, 1995,267:1449～1453
[4]Nagata S, Suda T. Fas and Fas ligand: Lpr and gld mutation. Today, 1995,16:39～43
, 百拇医药
[5]陈燕，乐蓓蓓，向直富,等.Fas/APO-1抗原在急性白血病中的表达及其意义.临床血液学杂志,1998,11:108～110
[6]Laurie B, Owen-Schaub, Laura S, et al. Soluble Fas/APO-1 in tumor cells: A potential regulator of apoptosis? Cancer Lett, 1995, 94:1～8
[7]Jianhua Cheng, Tong Zhou, Changdan Liu, et al. Protection from Fas-mediated apoptosis by souble form of the Fas molecule. Science, 1994, 263:1759～1762
[8]Sugahara K, Yamada Y, Hiragata Y, et al. Soluble and membrane isoform of Fas/CD95 in fresh adult T-cell leukemia(ALT) cells and ALT-cell lines. Int J Cancer, 1997,72:128～132
, 百拇医药
[9]Munker R,Midis G,Owen-Schaub L,et al. Soluble Fas(CD95) is not elevated in the serum of patient with myeloid leukemias, myeloproliferative and myelodysplastic syndromes.Leukemia,1996,10:1531～1533
[10]Digiuseppe J A , Lebeau P, Augenbraun J, et al. Multiparameter flow-cytometric analysis of bcl-2 and Fas expression in normal and neoplastic hematopoiesis. Am J Clin Pathol,1996,106:345～351
收稿日期：1999-02-06, http://www.100md.com
单位：(首都医科大学附属北京同仁医院血液科)
关键词：游离Fas；恶性血液病；细胞凋亡
首都医科大学学报000113 摘 要：为了解游离Fas (sFas ) 在恶性血液病中的水平及临床意义，用酶联免疫吸附法测定了60例恶性血液病患者的血清sFas。结果：恶性血液病患者血清sFas质量浓度高于正常人(P<0.01)，治疗后sFas下降，下降的程度与疗效有关，但治疗前sFas质量浓度的高低与疗效预测无关。结果提示：sFas对恶性血液病的诊断及疗效判定有一定意义，并可能对其发病机制产生影响。
分类号：R733
The Serum Levels of Soluble Fas in
, 百拇医药
Patients with Malignant Hematologic
Diseases and its Clinical Implication
Zheng Jia Liu Fuqiang Zhai Yanling Liu Yuanpo
Wang Tian Li Shoujing Zhao Xiangyin
(Department of Hematology,Beijing Tongren Hospital, Affiliate of Capital University of Medical Sciences)
Abstract：In order to study the serum levels of soluble Fas (sFas) in malignant hematologic diseases and its clinical implication, serum levels of sFas in 60 patients with malignant hematologic diseases and in a control group of 30 health volunteers were measured by sandwich enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) method.Before chemotherapy, the serum levels of sFas in patients with malignant hematologic diseases were significantly higher than those of control group(P<0.01), and were not related to respose to chemotherapy. After chemotherapy, the levels of sFas significantly lowered in complete remission (CR) group (P<0.05), but did not in unremission (NR) group. The levels and changes of sFas might be served as a reference finger to diagnosis some malignant hematologic diseases and to evaluate chemotherapy effect. sFas might be involved in pathogenesis of some malignant hematologic diseases .
, 百拇医药
Key words：soluble Fas; malignant hematologic diseases; apoptosis▲
Fas抗原(又称Apo-1，CD95)是介导细胞凋亡的膜受体分子，其表达异常或功能缺陷所致的凋亡路径障碍，对肿瘤的形成和维持具有重要的病理生理意义[1]。由于缺乏跨膜蛋白而游离于血清中的Fas分子称为游离Fas(sFas)。为探讨sFas是否参与了Fas-FasL(Fas配体)信号传递系统，它在恶性血液病中的表达如何，以及对恶性血液病患者的疗效及预后的判定有无帮助，进行了此项研究。
1 临床资料和方法
1.1 病例和标本
60例血清标本全部来自1996年10月至1998年12月我院血液科住院患者，男30例，女30例，年龄23～73岁(中位年龄47岁)。其中急性白血病(AL)22例，完全缓解(CR)及部分缓解(PR)12例，未缓解(NR)10例；非霍奇金淋巴瘤(NHL)27例，CR及PR 19例，稳定(NC)及进展(PD)8例；慢性粒细胞性白血病(CML)7例，CR 6例，NR 1例；多发性骨髓瘤(MM)4例，PR 2例，无效(NE)2例。诊断及疗效标准符合文献[2]。30例健康志愿者作为对照，其中男15例，女15例，年龄23～33岁(中位年龄28岁)。患者在初诊时和化疗后取静脉血2 mL，不抗凝，血液凝固后分离血清，-20 ℃保存，避免反复冻融。
, 百拇医药
1.2 试剂盒和方法
试剂盒为美国Biosource International公司Biosource Cytoscreen药盒。
实验方法：采用双抗夹心酶联免疫吸附法测定，操作按说明书进行。酶标仪为Bio-Red450型。
1.3 统计学方法
样本均数间比较采用t检验，治疗前后比较采用配对t检验。
2 结果
恶性血液病患者初诊时sFas测定结果见表1。在恶性血液病中，sFas质量浓度与疗效的关系见表2(因部分病例缺乏治疗前后的对应资料，未纳入本表统计)。
表1 正常人与恶性血液病患者sFas比较 组别
, 百拇医药
n
ρ(sFas)/(μg。L-1)
正常对照组
30
3.37±1.46
AL组
22
7.62±2.28**
NHL组
27
12.58±7.56**
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CML组
7
8.68±1.74**
MM组
4
12.11±5.75**
**与正常对照比较P<0.01表2 4种恶性血液病sFas质量浓度与疗效的关系 病种
疗效
n
ρ(sFas)/(μg。L-1)
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P值(配对t检验)
化疗前
化疗后
AL
CR
12
6.86±1.58
4.18±2.31
<0.05
NR
6
7.91±3.45
7.27±3.16
, 百拇医药
>0.05
NHL
CR+PR
17
11.84±4.56
8.54±4.24
<0.05
NC+PD
5
12.81±7.75
11.43±5.39
>0.05
, 百拇医药 CML
CR
4
9.47±1.62
4.43±2.84
NR
1
9.30
8.47
MM
PR
1
11.98
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3.20
NE
2
14.03±4.64
12.87±4.17
由表2可见，上述4种恶性血液病化疗后sFas均有所下降，在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤，化疗前后sFas值经配对t检验显示有效(CR、PR)组差别有显著性(P<0.05)，无效(NR、NC、PD)组差别无显著性(P>0.05)。因CML、MM组样本数小，未行统计学处理。
sFas对恶性血液病患者治疗反应的预测：化疗前AL患者有效组sFas为(7.18±1.39) μg/L，无效组为(8.16±3.26) μg/L，2组比较无显著性差异(P>0.05)。NHL患者有效组sFas为(12.29±5.26) μg/L，无效组为(13.17±7.66) μg/L，2组比较无显著性差异(P>0.05)。因CML、MM组样本数小，未行统计学处理。可见，化疗前sFas水平不能预测恶性血液病对治疗的反应。3 讨论
, 百拇医药
细胞凋亡作为维持机体自身稳定的负调节机制，在恶性肿瘤的病理机制研究中日益受到重视。Fas及其天然配体FasL是介导凋亡的重要膜蛋白分子。当FasL结合到细胞表面的Fas分子后，后者发生交联，向胞内传递死亡信号，导致该Fas阳性细胞凋亡[3]。Fas/Apo-1抗原是由325个氨基酸组成的相对分子质量约为4.5万的跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子和神经生长因子(TNF/NGF)受体超家庭成员，为Ⅰ型跨膜蛋白，其分子结构中有2个具有重要功能的区域，其一为约由70个氨基酸组成的传递凋亡信号所需的结构域，称为“死亡结构域”。若此功能区缺失突变，Fas介导的细胞凋亡功能也随之消失[4]。白血病细胞Fas表达明显下调，细胞凋亡受到抑制，可能是导致白血病细胞大量存在的原因之一[5]。其二为17个氨基酸构成的Fas疏水跨膜(TM)区。研究发现耐受Fas抗体介导的凋亡作用的骨肉瘤细胞的Fas基因表达有正常和变异2种，前者表达产物为完整膜Fas(mFas)；后者则表达了1个可溶性或分泌性的相对分子质量4万的Fas蛋白。它在Fas基因转录的mRNA变换剪接时丢失了63个碱基对框架[6，7]，sFas就是这种变换剪接所致跨膜蛋白缺乏的产物。目前， sFas的成功检测也为上述基因变异提供了直接的证据。
, 百拇医药
sFas的意义尚不十分清楚，关于其在恶性肿瘤时的表达报告不一[8，9]，但多数研究提示在恶性肿瘤时sFas升高[10]。本研究结果显示在恶性血液病血清sFas均较正常人升高，化疗后sFas均有所下降，下降的水平与疗效有关，但化疗前sFas质量浓度的高低与判断预后无关。故sFas水平与恶性血液病的肿瘤负荷有关，对恶性血液病的诊断及疗效判定有一定意义。最近有人发现带有变异的信使RNA转染的细胞上清液能阻断由Fas抗体介导的凋亡[7]。
推测sFas与膜Fas竞争性结合FasL，从而阻断由Fas介导的细胞凋亡。另外，sFas作为膜Fas的脱落部分，减低了细胞膜上Fas的密度，也减少了Fas介导的凋亡。总之，游离Fas可能作为Fas的阻断因子，通过影响Fas-FasL信号传递系统而参与恶性疾病的发病机制。
在我们检测的标本中，正常人sFas水平较为一致，但在疾病状态(尤其是NHL和MM)sFas表达的范围差异较大，对这些不同表达的含义及sFas与其他凋亡相关蛋白的相互关系需要进一步研究阐明。■
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参考文献：
[1]Shima Y, Nishimoto N, Ogata A, et al. Myeloma cells express Fas antigen/APO-1(CD95) but only some are sensitive to anti-Fas antibody resul-ting in apoptosis . Blood,1995,85:757～764
[2]张之南主编.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京:科学出版社,1998
[3]Nagata S, Golstein P. The Fas death factor. Science, 1995,267:1449～1453
[4]Nagata S, Suda T. Fas and Fas ligand: Lpr and gld mutation. Today, 1995,16:39～43
, 百拇医药
[5]陈燕，乐蓓蓓，向直富,等.Fas/APO-1抗原在急性白血病中的表达及其意义.临床血液学杂志,1998,11:108～110
[6]Laurie B, Owen-Schaub, Laura S, et al. Soluble Fas/APO-1 in tumor cells: A potential regulator of apoptosis? Cancer Lett, 1995, 94:1～8
[7]Jianhua Cheng, Tong Zhou, Changdan Liu, et al. Protection from Fas-mediated apoptosis by souble form of the Fas molecule. Science, 1994, 263:1759～1762
[8]Sugahara K, Yamada Y, Hiragata Y, et al. Soluble and membrane isoform of Fas/CD95 in fresh adult T-cell leukemia(ALT) cells and ALT-cell lines. Int J Cancer, 1997,72:128～132
, 百拇医药
[9]Munker R,Midis G,Owen-Schaub L,et al. Soluble Fas(CD95) is not elevated in the serum of patient with myeloid leukemias, myeloproliferative and myelodysplastic syndromes.Leukemia,1996,10:1531～1533
[10]Digiuseppe J A , Lebeau P, Augenbraun J, et al. Multiparameter flow-cytometric analysis of bcl-2 and Fas expression in normal and neoplastic hematopoiesis. Am J Clin Pathol,1996,106:345～351
收稿日期：1999-02-06, http://www.100md.com