舒喘灵对环加氧酶PGI2合成酶和TXA2合成酶活性的影响
作者：熊忠明 韩八斤
单位：同济医科大学计划生育研究所, 武汉 430030
关键词：舒喘灵；环加氧酶；血栓素合成酶类
同济医科大学学报000124 摘要 取猪肺微粒体用体外方法观察了舒喘灵对花生四烯酸(AA)实验代谢中环加氧酶、前列腺素(PGI2)合成酶及血栓素A(TXA2)合成酶的作用。结果表明，当以AA为底物反应时各组均无明显反应，而当以前列腺素内过氧化物(PGH2)为底物反应时，舒喘灵3×10-6 mol/L组6-酮基-PGF1α的生成量明显增加(P<0.05)。提示舒喘灵对AA代谢中环加氧酶和TXA2合成酶影响不大,而对PGI2合成酶的活性有促进作用，故使PGI2生成量增加，6-keto-PGF1α/TXA2比值增大，因此有利于纠正PGI2-TXA2的平衡失调。
, http://www.100md.com
中图法分类号 R974， Q554.1， Q558.3
Effect of Salbutamol on Cyclooxygenase, PGI2 and TXA2Synthetase Activities
Xiong Zhongmin Han Bajing
(Family Planning Research Institute, Tongji Medical Uni versity, Wuhan430030)
Abstract The effects of Salbutamol on cyclooxygenase,prostaglandin (PG) I2 synthetase and thromboxane (TX) A2 synthetase during the metabolism of arach idoic acid (AA)were studied in vitro. The results showed that when AA was u sed as a substrate, the levels of6-keto-PGF1α and TXB2 had no signi ficant difference among the groups, but when PGH2 was used as asubstrate, th e level of 6-keto-PGF1αwas increased significantly following the use of Salbutamol3×10-6 mol/L. The results showed that Salbutamol could enhan ce the activity of PGI2 synthetase, but had nosignificant influence on the a c tivities of cyclooxygenase and TXA2 synthetase. Therefore, the amount of PGI 2 wasincreased and the ratio of the amount of 6-keto-PGF1α to TXB2 w as augmented by which the balance ofPGI2 and TXA2 was corrected.
, 百拇医药
Keywords salbutamol; cyclooxygenase; thromboxane synthetase
实验证明舒喘灵可使妊娠家兔血浆中前列腺素(PGI2)合成量增加，PGI2/TXA2比值明显增大，大大有利于改善子宫胎盘血液循环。但其作用机制尚需进一步了解。我们采用体外实验方法，分析药物对花生四烯酸(arachidonic acid sodium salt, AA)代谢途径中花生四烯酸环加氧酶、PGI2合成酶和TXA2合成酶的作用，利用放射免疫测定法检测猪肺微粒中6-酮基-PGF1α(PGI2的稳定代谢物)和TXB2(TXA2的稳定代谢物 )，借以探讨舒喘灵调节TXA2和PGI2平衡的作用机制。
, http://www.100md.com 1 材料与方法
1.1 主要试剂
舒喘灵(salbutamol)由英国Allon HamburgsLTD提供，临用前用50 mmol/L缓冲液 (pH<7.5)配成3×10-8 mol/L和3×10-6mol/L的浓度备用；AA从美国Sig ma Chemical Co购得，临用前用50 mmol/L Tris-HCl 缓冲液(pH 7.5)配成1mg/ml溶液 备用；前列腺素内过氧化物(PGH2)由中国医学科学院基础所药理室提供。原包装5 mg/ 100ml，临用前稀释成5 ng/ml。
1.2 方法
猪肺微粒体酶的制备：见参考文献[1]的方法。 人血红蛋白的制备：见参考文献[2] 的方法。实验方法：见参考文献[3]的方法。
, 百拇医药
无论是以AA为底物还是以PGH2为底物，其反应液中均包括血红蛋白、异丙肾上腺素、猪肺微粒体酶。实验设有死酶组、0剂量对照组、舒喘灵3×10-8 mol/L组和3×10- 6 mol/L组。
2 结果
2.1 以AA为底物时舒喘灵对猪肺微粒体酶活性的影响
如表1所示，0剂量对照组6-keto-PGF1α和TXB2的生物量均明显高于死酶组(P<0.01)。说明实验中所有的猪肺微粒体酶活性是正常的。不同剂量的舒喘灵组6-keto-PGF1α与TXB2的总量与0剂量对照组相比，其差异无显著性意义(P>0.05)。说明舒喘灵对花生四烯酸环加氧酶活性无明显影响。若分别观察6-keto-PGF1α与TXB2生成量，发现舒喘灵剂量为3×10-6 mol/L时，6-keto-PGF1α的生成量比0剂量对照组升高而TXB2却减少。但两者变化均无显著意义(P>0.05)。提示舒喘灵对PGI2合成酶是否有促进作用尚待证实。
, 百拇医药
表1 以AA为底物时舒喘灵对6-keto-PGF1α和TXB2生成的影响(
±s) 组 别
n
6-keto-PGF1α(ng/L)
TXB2 (ng/L)
6-keto-PGF1α/TXB2
死酶组
8
48.61±5.82
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42.18± 2.63
0剂量组
8
207.45±26.58*
147.64±7.95*
355.09±6. 34
舒喘灵 (3×10-8mol/L)
8
219.34±31.25*
110.52±15.33*
, http://www.100md.com
329.86±3.41
舒喘灵(3×10-6 mol/L)
8
251.08±21.93*
120.17±16.57*
371.25±6.27
与死酶组比较 * P<0.012.2 以PGH2为底物时舒喘灵对猪肺微粒体酶活性的影响
以AA、PGH2为底物时均设死酶组(即加入底物前，杀死猪肺微粒体酶)、0剂量对照组(不加药物，加同体积缓冲液)、舒喘灵组(3×10-8 mol/L，3×10-6 mol/L)。
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加底物AA和PGH2，在37 ℃下温育8 min，然后将反应管置于100 ℃沸水中7 min终止反应，死酶组加猪肺微粒体酶后，先置100 ℃沸水7 min，再加AA和PGH2，反应终止后，将各管在室温下以3000 r/min离心10 min，取上清液测定。
从表2可见，0剂量对照组与死酶组比较6-keto-PGF1α和TXB2均有显著性差异(P<0.01)，说明实验所用猪肺微粒体酶活性正常。舒喘灵3×10-8 mol/L、3× 10-6mol/L与0剂量对照组间TXB2含量无显著性差异(P>0.05)，6-keto-PGF1α的含量在舒喘灵3×10-8 mol/L组也较0剂量对照组无明显增加。但在3× 10-6mol/L组有显著性差异(P<0.05)。说明舒喘灵对猪肺微粒体中的PGH2合成酶有促进作用，且与剂量有关。而对TXA2合成酶的活性则无明显影响。
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表2 以PGH2为底物时舒喘灵对6-keto-PGF1α和TXB2的生成的影响(±s) 组 别
n
6-keto-PGF1α (ng/L)
TXB2 (ng/L)
死酶组
8
38.67±4.55
26.93±14.51
0剂量组
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8
472.63±25.14*
295.64±51.90*
舒喘灵 (3×10-8mol/L)
7
477.26±23.69*
283.39±17.79*
舒喘灵 (3×10-6mol/L)
8
589.72±51.93△*
, 百拇医药
302.80±25.1 4△*
与死酶组比较 * P<0.01； 与0剂量对照比较 △ P<0.053 讨论
猪肺微粒体含有大量的花生四烯酸环加氧酶、PGI2合成酶和TXA2合成酶。在适宜的条件下，前者可催化AA生成PGH2和PGG2，后二者则能催化PGH2和PGG2生成PGI2和TXA2。若影响该代谢途径中的任一环节，如底物含量或酶活性的改变均能导致终产物PGI2和TXA2含量的变化，反之PGI2和TXA2含量的变化亦能反映该代谢途径中一个或数个环 节的改变。
, 百拇医药 根据上述理论，我们采用了以AA和PGH2为底物的反应体系，以反应终产物为指标判断药物影响AA代谢的实验方法，分别观察了舒喘灵在两个不同底物反应体系中对终产物PGI2和TXA2生成的影响。结果在以AA为底物时，PGI2和TXA2的生成变化不大，而在以PGH2为底物时PGI2生成增加，TXA2的变化不大。实验表明舒喘灵的作用主要是促进PGI2合成酶的活性，因而使PGI2生成增加，PGI2/TXA2比值增大。这有利于改善子宫胎盘血液循环，纠正PGI2/TXA2的平衡失调。
众所周知，妊娠期间胎儿血液循环包括子宫-胎盘和胎儿-胎盘两套完全分开的循环通道。 胎儿血液经脐动脉进入胎盘，母血则来自子宫内膜的螺旋动脉。良好的血循系统与血管壁的收缩与舒张息息相关，TXA2使血管收缩，促血小板聚集，而PGI2则使血管舒张，抗血小板 聚集。因此，TXA2与PGI2这两种强效血管物质的平衡对子宫血液循环起着重要的作用。子宫 胎盘血循障碍对母、胎双方危害极大，有报道妊高征和胎儿宫内窒息与TXA2/PGI2平衡失调 、TXA2占优势有关。故寻找改善这一循环的药物对优生优育极其重要。本实验期望通过探讨舒喘灵对TXA2和PGI2两种物质平衡的调节，达到改善子宫胎盘血液循环的目的，从而促进胎儿的正常生长发育。
, http://www.100md.com
熊忠明，女，1953年生，主管技师
参 考 文 献
1，Gilbert J, Mique F, Precigouux G.Inhibition of prostaglandin synthe sis by Di- and triphenylethylene derivatives: A structure-activity study. J Me d Chem,1983, 26:693
2，Gupta S P, Hanash S M. Separation of hemoglobin types by cation-exh angehigh-performance liquid chromatography. Anal Biochem, 1983, 134:117
3，汪钟, 黄如松,朱国强. 前列腺素内过氧化物的生物合成及其应用. 中国医 学科学院学报, 1988, 10(4):266
4，史以庆. 6-酮基-PGF1α的放射免疫测定及其应用. 中国医学科学院 学报, 1986, 8(4)：310
5，汪钟. 血栓素B2放射免疫测定. 中国医学科学院学报, 1986, 8(2)：139
(1999-05-10 收稿), 百拇医药
单位：同济医科大学计划生育研究所, 武汉 430030
关键词：舒喘灵；环加氧酶；血栓素合成酶类
同济医科大学学报000124 摘要 取猪肺微粒体用体外方法观察了舒喘灵对花生四烯酸(AA)实验代谢中环加氧酶、前列腺素(PGI2)合成酶及血栓素A(TXA2)合成酶的作用。结果表明，当以AA为底物反应时各组均无明显反应，而当以前列腺素内过氧化物(PGH2)为底物反应时，舒喘灵3×10-6 mol/L组6-酮基-PGF1α的生成量明显增加(P<0.05)。提示舒喘灵对AA代谢中环加氧酶和TXA2合成酶影响不大,而对PGI2合成酶的活性有促进作用，故使PGI2生成量增加，6-keto-PGF1α/TXA2比值增大，因此有利于纠正PGI2-TXA2的平衡失调。
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中图法分类号 R974， Q554.1， Q558.3
Effect of Salbutamol on Cyclooxygenase, PGI2 and TXA2Synthetase Activities
Xiong Zhongmin Han Bajing
(Family Planning Research Institute, Tongji Medical Uni versity, Wuhan430030)
Abstract The effects of Salbutamol on cyclooxygenase,prostaglandin (PG) I2 synthetase and thromboxane (TX) A2 synthetase during the metabolism of arach idoic acid (AA)were studied in vitro. The results showed that when AA was u sed as a substrate, the levels of6-keto-PGF1α and TXB2 had no signi ficant difference among the groups, but when PGH2 was used as asubstrate, th e level of 6-keto-PGF1αwas increased significantly following the use of Salbutamol3×10-6 mol/L. The results showed that Salbutamol could enhan ce the activity of PGI2 synthetase, but had nosignificant influence on the a c tivities of cyclooxygenase and TXA2 synthetase. Therefore, the amount of PGI 2 wasincreased and the ratio of the amount of 6-keto-PGF1α to TXB2 w as augmented by which the balance ofPGI2 and TXA2 was corrected.
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Keywords salbutamol; cyclooxygenase; thromboxane synthetase
实验证明舒喘灵可使妊娠家兔血浆中前列腺素(PGI2)合成量增加，PGI2/TXA2比值明显增大，大大有利于改善子宫胎盘血液循环。但其作用机制尚需进一步了解。我们采用体外实验方法，分析药物对花生四烯酸(arachidonic acid sodium salt, AA)代谢途径中花生四烯酸环加氧酶、PGI2合成酶和TXA2合成酶的作用，利用放射免疫测定法检测猪肺微粒中6-酮基-PGF1α(PGI2的稳定代谢物)和TXB2(TXA2的稳定代谢物 )，借以探讨舒喘灵调节TXA2和PGI2平衡的作用机制。
, http://www.100md.com 1 材料与方法
1.1 主要试剂
舒喘灵(salbutamol)由英国Allon HamburgsLTD提供，临用前用50 mmol/L缓冲液 (pH<7.5)配成3×10-8 mol/L和3×10-6mol/L的浓度备用；AA从美国Sig ma Chemical Co购得，临用前用50 mmol/L Tris-HCl 缓冲液(pH 7.5)配成1mg/ml溶液 备用；前列腺素内过氧化物(PGH2)由中国医学科学院基础所药理室提供。原包装5 mg/ 100ml，临用前稀释成5 ng/ml。
1.2 方法
猪肺微粒体酶的制备：见参考文献[1]的方法。 人血红蛋白的制备：见参考文献[2] 的方法。实验方法：见参考文献[3]的方法。
, 百拇医药
无论是以AA为底物还是以PGH2为底物，其反应液中均包括血红蛋白、异丙肾上腺素、猪肺微粒体酶。实验设有死酶组、0剂量对照组、舒喘灵3×10-8 mol/L组和3×10- 6 mol/L组。
2 结果
2.1 以AA为底物时舒喘灵对猪肺微粒体酶活性的影响
如表1所示，0剂量对照组6-keto-PGF1α和TXB2的生物量均明显高于死酶组(P<0.01)。说明实验中所有的猪肺微粒体酶活性是正常的。不同剂量的舒喘灵组6-keto-PGF1α与TXB2的总量与0剂量对照组相比，其差异无显著性意义(P>0.05)。说明舒喘灵对花生四烯酸环加氧酶活性无明显影响。若分别观察6-keto-PGF1α与TXB2生成量，发现舒喘灵剂量为3×10-6 mol/L时，6-keto-PGF1α的生成量比0剂量对照组升高而TXB2却减少。但两者变化均无显著意义(P>0.05)。提示舒喘灵对PGI2合成酶是否有促进作用尚待证实。
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表1 以AA为底物时舒喘灵对6-keto-PGF1α和TXB2生成的影响(
±s) 组 别n
6-keto-PGF1α(ng/L)
TXB2 (ng/L)
6-keto-PGF1α/TXB2
死酶组
8
48.61±5.82
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42.18± 2.63
0剂量组
8
207.45±26.58*
147.64±7.95*
355.09±6. 34
舒喘灵 (3×10-8mol/L)
8
219.34±31.25*
110.52±15.33*
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329.86±3.41
舒喘灵(3×10-6 mol/L)
8
251.08±21.93*
120.17±16.57*
371.25±6.27
与死酶组比较 * P<0.012.2 以PGH2为底物时舒喘灵对猪肺微粒体酶活性的影响
以AA、PGH2为底物时均设死酶组(即加入底物前，杀死猪肺微粒体酶)、0剂量对照组(不加药物，加同体积缓冲液)、舒喘灵组(3×10-8 mol/L，3×10-6 mol/L)。
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加底物AA和PGH2，在37 ℃下温育8 min，然后将反应管置于100 ℃沸水中7 min终止反应，死酶组加猪肺微粒体酶后，先置100 ℃沸水7 min，再加AA和PGH2，反应终止后，将各管在室温下以3000 r/min离心10 min，取上清液测定。
从表2可见，0剂量对照组与死酶组比较6-keto-PGF1α和TXB2均有显著性差异(P<0.01)，说明实验所用猪肺微粒体酶活性正常。舒喘灵3×10-8 mol/L、3× 10-6mol/L与0剂量对照组间TXB2含量无显著性差异(P>0.05)，6-keto-PGF1α的含量在舒喘灵3×10-8 mol/L组也较0剂量对照组无明显增加。但在3× 10-6mol/L组有显著性差异(P<0.05)。说明舒喘灵对猪肺微粒体中的PGH2合成酶有促进作用，且与剂量有关。而对TXA2合成酶的活性则无明显影响。
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表2 以PGH2为底物时舒喘灵对6-keto-PGF1α和TXB2的生成的影响(
±s) 组 别n
6-keto-PGF1α (ng/L)
TXB2 (ng/L)
死酶组
8
38.67±4.55
26.93±14.51
0剂量组
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8
472.63±25.14*
295.64±51.90*
舒喘灵 (3×10-8mol/L)
7
477.26±23.69*
283.39±17.79*
舒喘灵 (3×10-6mol/L)
8
589.72±51.93△*
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302.80±25.1 4△*
与死酶组比较 * P<0.01； 与0剂量对照比较 △ P<0.053 讨论
猪肺微粒体含有大量的花生四烯酸环加氧酶、PGI2合成酶和TXA2合成酶。在适宜的条件下，前者可催化AA生成PGH2和PGG2，后二者则能催化PGH2和PGG2生成PGI2和TXA2。若影响该代谢途径中的任一环节，如底物含量或酶活性的改变均能导致终产物PGI2和TXA2含量的变化，反之PGI2和TXA2含量的变化亦能反映该代谢途径中一个或数个环 节的改变。
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众所周知，妊娠期间胎儿血液循环包括子宫-胎盘和胎儿-胎盘两套完全分开的循环通道。 胎儿血液经脐动脉进入胎盘，母血则来自子宫内膜的螺旋动脉。良好的血循系统与血管壁的收缩与舒张息息相关，TXA2使血管收缩，促血小板聚集，而PGI2则使血管舒张，抗血小板 聚集。因此，TXA2与PGI2这两种强效血管物质的平衡对子宫血液循环起着重要的作用。子宫 胎盘血循障碍对母、胎双方危害极大，有报道妊高征和胎儿宫内窒息与TXA2/PGI2平衡失调 、TXA2占优势有关。故寻找改善这一循环的药物对优生优育极其重要。本实验期望通过探讨舒喘灵对TXA2和PGI2两种物质平衡的调节，达到改善子宫胎盘血液循环的目的，从而促进胎儿的正常生长发育。
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熊忠明，女，1953年生，主管技师
参 考 文 献
1，Gilbert J, Mique F, Precigouux G.Inhibition of prostaglandin synthe sis by Di- and triphenylethylene derivatives: A structure-activity study. J Me d Chem,1983, 26:693
2，Gupta S P, Hanash S M. Separation of hemoglobin types by cation-exh angehigh-performance liquid chromatography. Anal Biochem, 1983, 134:117
3，汪钟, 黄如松,朱国强. 前列腺素内过氧化物的生物合成及其应用. 中国医 学科学院学报, 1988, 10(4):266
4，史以庆. 6-酮基-PGF1α的放射免疫测定及其应用. 中国医学科学院 学报, 1986, 8(4)：310
5，汪钟. 血栓素B2放射免疫测定. 中国医学科学院学报, 1986, 8(2)：139
(1999-05-10 收稿), 百拇医药