NF-κB调控IL-1刺激人脐静脉内皮细胞合成PGI2
作者：郭甫坤 李亦蕾 吴曙光
单位：郭甫坤(第一军医大学药物研究所，广东广州510515)；李亦蕾(第一军医大学药物研究所，广东广州510515)；吴曙光(第一军医大学药物研究所，广东广州510515)
关键词：NF-κB；IL1；内皮细胞；PGI2
细胞与分子免疫学杂志000113
中图号：R392.11 文献标识码：A
文章编号:1007-8738(2000)01-0041-41
白细胞介素-1(IL-1)是在炎症反应中起重要作用的细胞因子。它能激活在炎症过程中调控相关基因表达的核因子-κB(NF-κB)及刺激内皮细胞分泌炎症介质PGI2。以往研究表明，NF-κB可调控LPS刺激的J774巨噬细胞分泌PG2〔1〕，但其是否可调节IL-1诱导内皮细胞分泌PGI2目前还不清楚。因此，我们研究了NF-κB活化的抑制剂N-α-tosyl-L-lysine chloromethyl ketone(TLCK)对人脐静脉内皮细胞合成PGI2的影响，讨论了NF-κB在IL-1刺激内皮细胞合成PGI2中的作用。
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1 材料和方法
1.1 材料 rhIL-1β购自北京邦定生物医学公司。TLCK从Boehringer Mannheim 公司购买。6-keto- PGF-1α检测试剂盒由R
D System提供。DMEM为Gibco BRL产品。胎牛血清由杭州四季青生物工程材料研究所生产。
1.2 方法
1.2.1 人脐静脉内皮细胞的分离与培养〔2〕 脐静脉用PBS冲洗数次(尽可能洗去红细胞)，灌入2.5 g/L胰酶消化10 min分离细胞，以1000 r/min离心7 min后，用含20 mL/L胎牛血清的DMEM重悬并调整细胞密度至5×108/L。按每孔200 μL接种于96孔细胞培养板中，于37℃，50 mL/L CO2条件下培养1 d后，更换培养液，以后每2 d换液1次。至细胞长满皿底，更换培养基，加入105 U/L IL1β和实验浓度的TLCK，37℃孵育24 h。
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1.2.2 培养上清6-keto-PGF-1α的检测 采用竞争ELISA法检测。每份样品均做4个复孔。操作步骤参照6-keto-PGF-1α试剂盒中的说明进行。实验数据以
±s表示，并以t检验进行统计学分析。
2 结 果
TLCK可抑制IL-1β诱导的PGI2合成(通过PGI2的稳定代谢产物6-keto-PGF-1α来反映)，且呈浓度依赖性。TLCK<1 μmol/L时，就能产生抑制作用，当其用量为100 μmol/L时，抑制作用相当显著(P<0.01，图1)。
图1 TLCK抑制IL-1β诱导的PGI2合成
, http://www.100md.com 3 讨 论
TLCK是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂能抑制IκB(NF-κB抑制蛋白)降解，从而阻止NF-κB从IκB解离，进入细胞核而调控基因的表达〔3〕。我们发现，TLCK可抑制内皮细胞产生PGI2，表明NF-κB可调控IL-1刺激的内皮细胞释放PGI2。由于PGI2由环氧合酶-2(COX-2)催化合成，而COX-2基因启动子中含有NF-κB结合位点，故推测TLCK可能通过抑制NF-κB的活化而干扰COX-2基因的表达，实现其对内皮细胞合成PGI2的抑制。总之， 本结果表明，NF-κB参与了调控由IL-1刺激的内皮细胞释放PGI2，与NF-κB可调控LPS刺激巨噬细胞J774合成PGI2的报道相一致。从而提示，NF-κB调控炎症介质PGI2的分泌很可能是一种普遍的机制，并表明NF-κB活化的抑制剂具有潜在减轻炎症反应的作用。
作者简介：郭甫坤，男，27岁，博士
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广州市同和镇梅花园.Tel.(020)85148177
参考文献：
〔1〕 Muzio M, Ni J, Feng P, et al. IRAK( Pelle) family member IRA-K-2 and MyD88 as proximal mediators of IL-1 signaling〔J〕 . Science, 1997;278:1612-1615.
〔2〕 D'Acquisto F, Iuvone T, Rombola L, et al. Involvement of NF-κ B in the regulation of cyclooxygenase-2 protein expression in LPS-stimula-ted J774 macrophages〔J〕. FEBS Lett, 1997; 418:175- 178.
〔3〕 Minter AJ, Keoshkerian E, Chesterman CN,et al. Fibroblast growth factor and heparin protect endothelial cells from the effects of interleukin 1〔J〕 . J Cell Physiol, 1996; 167:229- 237.
收稿日期：1999-05-11
修回日期：1999-08-18, 百拇医药
单位：郭甫坤(第一军医大学药物研究所，广东广州510515)；李亦蕾(第一军医大学药物研究所，广东广州510515)；吴曙光(第一军医大学药物研究所，广东广州510515)
关键词：NF-κB；IL1；内皮细胞；PGI2
细胞与分子免疫学杂志000113
中图号：R392.11 文献标识码：A
文章编号:1007-8738(2000)01-0041-41
白细胞介素-1(IL-1)是在炎症反应中起重要作用的细胞因子。它能激活在炎症过程中调控相关基因表达的核因子-κB(NF-κB)及刺激内皮细胞分泌炎症介质PGI2。以往研究表明，NF-κB可调控LPS刺激的J774巨噬细胞分泌PG2〔1〕，但其是否可调节IL-1诱导内皮细胞分泌PGI2目前还不清楚。因此，我们研究了NF-κB活化的抑制剂N-α-tosyl-L-lysine chloromethyl ketone(TLCK)对人脐静脉内皮细胞合成PGI2的影响，讨论了NF-κB在IL-1刺激内皮细胞合成PGI2中的作用。
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1 材料和方法
1.1 材料 rhIL-1β购自北京邦定生物医学公司。TLCK从Boehringer Mannheim 公司购买。6-keto- PGF-1α检测试剂盒由R
D System提供。DMEM为Gibco BRL产品。胎牛血清由杭州四季青生物工程材料研究所生产。1.2 方法
1.2.1 人脐静脉内皮细胞的分离与培养〔2〕 脐静脉用PBS冲洗数次(尽可能洗去红细胞)，灌入2.5 g/L胰酶消化10 min分离细胞，以1000 r/min离心7 min后，用含20 mL/L胎牛血清的DMEM重悬并调整细胞密度至5×108/L。按每孔200 μL接种于96孔细胞培养板中，于37℃，50 mL/L CO2条件下培养1 d后，更换培养液，以后每2 d换液1次。至细胞长满皿底，更换培养基，加入105 U/L IL1β和实验浓度的TLCK，37℃孵育24 h。
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1.2.2 培养上清6-keto-PGF-1α的检测 采用竞争ELISA法检测。每份样品均做4个复孔。操作步骤参照6-keto-PGF-1α试剂盒中的说明进行。实验数据以
±s表示，并以t检验进行统计学分析。2 结 果
TLCK可抑制IL-1β诱导的PGI2合成(通过PGI2的稳定代谢产物6-keto-PGF-1α来反映)，且呈浓度依赖性。TLCK<1 μmol/L时，就能产生抑制作用，当其用量为100 μmol/L时，抑制作用相当显著(P<0.01，图1)。
图1 TLCK抑制IL-1β诱导的PGI2合成
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TLCK是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂能抑制IκB(NF-κB抑制蛋白)降解，从而阻止NF-κB从IκB解离，进入细胞核而调控基因的表达〔3〕。我们发现，TLCK可抑制内皮细胞产生PGI2，表明NF-κB可调控IL-1刺激的内皮细胞释放PGI2。由于PGI2由环氧合酶-2(COX-2)催化合成，而COX-2基因启动子中含有NF-κB结合位点，故推测TLCK可能通过抑制NF-κB的活化而干扰COX-2基因的表达，实现其对内皮细胞合成PGI2的抑制。总之， 本结果表明，NF-κB参与了调控由IL-1刺激的内皮细胞释放PGI2，与NF-κB可调控LPS刺激巨噬细胞J774合成PGI2的报道相一致。从而提示，NF-κB调控炎症介质PGI2的分泌很可能是一种普遍的机制，并表明NF-κB活化的抑制剂具有潜在减轻炎症反应的作用。
作者简介：郭甫坤，男，27岁，博士
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广州市同和镇梅花园.Tel.(020)85148177
参考文献：
〔1〕 Muzio M, Ni J, Feng P, et al. IRAK( Pelle) family member IRA-K-2 and MyD88 as proximal mediators of IL-1 signaling〔J〕 . Science, 1997;278:1612-1615.
〔2〕 D'Acquisto F, Iuvone T, Rombola L, et al. Involvement of NF-κ B in the regulation of cyclooxygenase-2 protein expression in LPS-stimula-ted J774 macrophages〔J〕. FEBS Lett, 1997; 418:175- 178.
〔3〕 Minter AJ, Keoshkerian E, Chesterman CN,et al. Fibroblast growth factor and heparin protect endothelial cells from the effects of interleukin 1〔J〕 . J Cell Physiol, 1996; 167:229- 237.
收稿日期：1999-05-11
修回日期：1999-08-18, 百拇医药