早孕妇女血清及蜕膜组织液对自然杀伤细胞活性及淋巴细胞增殖的影响
作者：周龙书 黄立萍 杨斌
单位：周龙书(广州军区广州总医院妇产科 510010)；黄立萍(广州军区广州总医院妇产科 510010)；杨斌(中山医科大学免疫教研室)
关键词：妊娠初期；蜕膜；杀伤细胞；天然；淋巴细胞转化
中华妇产科杂志000112 摘 要：目的 探讨早孕妇女血清及蜕膜组织液对自然杀伤(NK)细胞及淋巴细胞功能的影响。方法 采用同位素掺入法，检测32例正常早孕妇女血清(早孕血清组)及蜕膜组织液(蜕膜组织液组)对正常妇女外周血中NK细胞活性(%)及淋巴细胞增殖功能的影响，并采用25例正常未孕妇女的血清作对照(对照组)。结果 早孕血清组、蜕膜组织液组及对照组的NK细胞活性分别为(35.8±3.0)%、(19.1±2.9)%及(46.1±3.2)%，淋巴细胞增殖功能[每分钟同位素放射次数(CPM)]分别为(3 689±456 )CPM、(2 059±288)CPM及(4 883±643)CPM，3者间差异均有极显著性(P<0.01)，且蜕膜组织液组均显著低于早孕血清组(P<0.005)。结论 正常早孕妇女血清及蜕膜组织液具有免疫抑制作用，而蜕膜组织液可能是调节早期妊娠子宫局部免疫功能的重要因素之一。
, 百拇医药
Effects of Serum and Decidual Tissue Fluid in Early Pregnant Women on Natural Killer Cells Activity and Lymphocyte Proliferation
ZHOU Longshu
(Department of Obstetrics and Gynecology, General Hospital of Guangzhou Command, Guangzhou 510010，China)
HUANG Liping
(Department of Obstetrics and Gynecology, General Hospital of Guangzhou Command, Guangzhou 510010，China)
, 百拇医药
YANG Bin
Abstract：Objective To study the effects of serum and decidual tissue fluid in early pregnant women on natural killer cells (NK cells) activity and lymphocyte proliferation. Method The effects of the serum and decidual tissue fluid obtained from 32 normal early pregnant women on NK cells activity and lymphocyte proliferation were tested by isotope incorporation methods. Sera of 25 nonpregnant women were chosen as controls. Results The NK cells activity and lymphocyte proliferation of sera and decidual tissue fluids from early pregnant women were lower than those of sera from nonpregnant women (P<0.01). So were those of decidual tissue fluid as compared with sera during early pregnancy (P<0.005). Conclusions Serum and decidual tissue fluid from early pregnant women expressed immunosuppressive effects.It is possible that these effects of decidual tissue fluid play an important role in regulating local immune status of pregnant uterus.
, 百拇医药
Key words：Pregnancy trime ster, first；Decidual；Killer cells, natural； Lymphocyte transformation▲
母体免疫系统对胚胎生长、发育起着很关键的作用。许多文献报道，在正常胚胎蜕膜中发现大量淋巴细胞，特别是自然杀伤(NK)细胞[1,2]。但对早孕妇女全身及子宫蜕膜局部对免疫细胞的调节作用的报道较少。本研究采用放射性同位素掺入法，检测正常早孕妇女血清及蜕膜组织液对NK细胞活性及淋巴细胞增殖功能的影响，并采用正常未孕妇女血清作对照，了解早孕妇女全身及子宫局部对免疫细胞功能的影响。
资料与方法
一、研究对象
32例早孕妇女均来自1998年10月在我院行人工流产术的正常孕妇，年龄19～35岁，妊娠周数6～8周，孕期无腹痛及阴道流血，以往无急、慢性病史及流产史，无感染及自身免疫性疾病史， B超检查显示胚胎发育正常。同时选择25例正常未孕妇女作为对照组，年龄23～37岁，无感染及自身免疫性疾病史。
, 百拇医药
二、方法
1.标本收集：分别收集早孕妇女与正常未孕妇女的外周血血清、早孕妇女人工流产术中的蜕膜组织，将蜕膜组织分别置匀浆机中制成匀浆，离心后取上清液(约4～5 g蜕膜组织可获取1 ml蜕膜组织液)。另选择5名18～24岁健康未孕妇女(自愿者)，取其外周血，获取正常NK细胞及淋巴细胞供实验用。
2.淋巴细胞的制备：将健康未孕妇女的外周血，经磷酸盐缓冲液稀释并加入淋巴细胞分离液后离心，收集淋巴细胞，调至细胞含量为5×105个/ml。
3.NK细胞活性测定：将已制备的淋巴细胞 (含NK细胞)与经放射性同位素3H-胸腺嘧啶标记的K562细胞 (NK细胞特异性靶细胞)混合，分别加入非早孕、早孕妇女血清及蜕膜组织液作为实验孔(分别为对照组、早孕血清组、蜕膜组织液组)，另设自然释放孔(无淋巴细胞及血清、蜕膜组织液)。分别加入小牛血清0.1 ml，置5%二氧化碳孵育箱内，37℃、48 h后分别收集各孔内细胞，冲洗后经液闪计数器测定未被杀灭的K562细胞内3H-胸腺嘧啶的每分钟放射次数(counts per minete,CPM)，以此观察NK细胞活性的变化。观察结果按下列公式计算。
, 百拇医药
4.淋巴细胞增殖功能测定(淋巴细胞增殖刺激试验)：将已制备的淋巴细胞与植物凝结素、放射性同位素3H-胸腺嘧啶 (中国科学院上海核研究所提供)及10%小牛血清0.1 ml混合，分别加入等量非孕、早孕妇女血清及蜕膜组织液(分别为对照组、早孕血清组和蜕膜组织液组)。置5%二氧化碳孵箱，37℃、72 h后，分别收集各孔淋巴细胞，经液闪计数器测定淋巴细胞增殖时摄入细胞内的3H-胸腺嘧啶的CPM，以此观察淋巴细胞增殖功能的变化。
三、统计学方法
结果以±s表示，采用方差分析法处理。
结果
一、正常未孕、早孕妇女血清及蜕膜组织液对NK细胞活性的作用
早孕血清组及蜕膜组织液组NK细胞活性显著低于对照组(P<0.01)，且蜕膜组织液组显著低于早孕血清组(P<0.01)。见表1。
, 百拇医药
表1 3组妇女NK细胞活性及淋巴细胞增殖功能的比较(±s) 组别
总例数
NK细胞活性
(%)
淋巴细胞增殖功能
(CPM)
对照组
25
46.1±3.2
4883±643
早孕血清组
32
, 百拇医药
35.8±3.0
3689±456
蜕膜组织液组
32
19.1±2.9
2059±288
二、非孕、早孕妇女血清及蜕膜组织液对淋巴细胞增殖功能的作用
早孕血清组及蜕膜组织液组淋巴细胞增殖功能显著低于对照组(P<0.01)，且蜕膜组织液组显著低于早孕血清组(P<0.005)。见表1。
讨论
一、早孕妇女血清及蜕膜组织液的免疫抑制作用
, 百拇医药
Xiao等[3]研究表明，孕妇外周血的血浆对NK细胞活性具有明显的抑制作用。但对蜕膜组织液的研究尚未见报道。本研究结果表明，早孕妇女血清及蜕膜组织液对NK细胞活性及淋巴细胞增殖均具有抑制作用，证明在早孕妇女血清及蜕膜组织中存在一种具有抑制免疫功能的物质——免疫抑制因子。但对此免疫抑制因子的来源和性质尚不清楚。本研究结果表明，蜕膜组织液对免疫细胞的抑制作用显著强于血清，提示孕妇血清内的免疫抑制因子可能来源于子宫局部的蜕膜组织。
二、NK细胞、淋巴细胞与妊娠的关系
早在80年代，人们就发现早孕时子宫蜕膜内出现大量的NK细胞及淋巴细胞。Duclos等[4]报道，NK细胞的细胞数目和杀伤毒性与流产有关。Ho等[5]研究发现，在妊娠失败的蜕膜内NK细胞活性明显增强。林其德[6]报道，在非孕期子宫内膜淋巴细胞中，T淋巴细胞占 46%～50%。在孕期，其数量减少至20%，并认为T淋巴细胞主要通过辅助性T细胞-1(Th1)免疫及其有关细胞因子，影响生殖功能，使胚胎受到损害。因此，早孕妇女蜕膜组织液及血清对NK细胞活性及淋巴细胞增殖功能的免疫抑制作用，对维持胚胎正常的免疫环境、保护胚胎生长、发育，有重要意义。
, 百拇医药
三、蜕膜组织液免疫抑制作用在子宫局部免疫调节中的意义
蜕膜是最直接与胚胎接触的母体组织，而且早孕期子宫蜕膜部位出现大量免疫细胞，故局部的免疫因素更直接地影响胚胎的着床、发育。本研究结果提示，蜕膜组织液的免疫抑制作用显著高于血清，说明局部蜕膜组织对保护胚胎发挥着更重要的作用。因此我们认为，蜕膜组织液中的免疫抑制因子可能是调节早孕子宫局部免疫的重要因素之一。
参考文献：
[1]Ferry BL,Sargent IL,Starkey PM,et al.Cytotoxic activity against trophoblast and choriocarcinoma cells of large granular lymphocytes from human early pregnency decidua. Cell Immunol,1991,132:140-145.
, http://www.100md.com
[2]Ferry BL,Starkey PM,Sargent IL,et al.Cell populations in the human early pregnency decidua:natural killer activity and response to IL-2 of CD56-positive large granular lymphocytes.Immunology,1990,70:446-450.
[3]Xiao L,Norman AM,Eneroth PHE.Immunosuppressive properties of plasma and lymphocytes from the human retroplacental blood.Scand J Immunol,1996,44:299-304.
[4]Duclos AJ,Pomerantz DK, Baines MG,et al.Relationship between decidual leukocyte infiltration and spontataneous abortion in murine model of early fetal resorption.Cell Immunol, 1994, 159:184-190.
[5]Ho HN,Chao KH,Chen CK,et al.Activation status of T and NK cells in the endometrium throughout menstrual cycle and normal and abnormal early pregnancy. Human Immunol,1996,49:130-136.
[6]林其德.生殖免疫学进展.中华妇产科杂志,1998,33:4-6.
收稿日期：1998-12-22, 百拇医药
单位：周龙书(广州军区广州总医院妇产科 510010)；黄立萍(广州军区广州总医院妇产科 510010)；杨斌(中山医科大学免疫教研室)
关键词：妊娠初期；蜕膜；杀伤细胞；天然；淋巴细胞转化
中华妇产科杂志000112 摘 要：目的 探讨早孕妇女血清及蜕膜组织液对自然杀伤(NK)细胞及淋巴细胞功能的影响。方法 采用同位素掺入法，检测32例正常早孕妇女血清(早孕血清组)及蜕膜组织液(蜕膜组织液组)对正常妇女外周血中NK细胞活性(%)及淋巴细胞增殖功能的影响，并采用25例正常未孕妇女的血清作对照(对照组)。结果 早孕血清组、蜕膜组织液组及对照组的NK细胞活性分别为(35.8±3.0)%、(19.1±2.9)%及(46.1±3.2)%，淋巴细胞增殖功能[每分钟同位素放射次数(CPM)]分别为(3 689±456 )CPM、(2 059±288)CPM及(4 883±643)CPM，3者间差异均有极显著性(P<0.01)，且蜕膜组织液组均显著低于早孕血清组(P<0.005)。结论 正常早孕妇女血清及蜕膜组织液具有免疫抑制作用，而蜕膜组织液可能是调节早期妊娠子宫局部免疫功能的重要因素之一。
, 百拇医药
Effects of Serum and Decidual Tissue Fluid in Early Pregnant Women on Natural Killer Cells Activity and Lymphocyte Proliferation
ZHOU Longshu
(Department of Obstetrics and Gynecology, General Hospital of Guangzhou Command, Guangzhou 510010，China)
HUANG Liping
(Department of Obstetrics and Gynecology, General Hospital of Guangzhou Command, Guangzhou 510010，China)
, 百拇医药
YANG Bin
Abstract：Objective To study the effects of serum and decidual tissue fluid in early pregnant women on natural killer cells (NK cells) activity and lymphocyte proliferation. Method The effects of the serum and decidual tissue fluid obtained from 32 normal early pregnant women on NK cells activity and lymphocyte proliferation were tested by isotope incorporation methods. Sera of 25 nonpregnant women were chosen as controls. Results The NK cells activity and lymphocyte proliferation of sera and decidual tissue fluids from early pregnant women were lower than those of sera from nonpregnant women (P<0.01). So were those of decidual tissue fluid as compared with sera during early pregnancy (P<0.005). Conclusions Serum and decidual tissue fluid from early pregnant women expressed immunosuppressive effects.It is possible that these effects of decidual tissue fluid play an important role in regulating local immune status of pregnant uterus.
, 百拇医药
Key words：Pregnancy trime ster, first；Decidual；Killer cells, natural； Lymphocyte transformation▲
母体免疫系统对胚胎生长、发育起着很关键的作用。许多文献报道，在正常胚胎蜕膜中发现大量淋巴细胞，特别是自然杀伤(NK)细胞[1,2]。但对早孕妇女全身及子宫蜕膜局部对免疫细胞的调节作用的报道较少。本研究采用放射性同位素掺入法，检测正常早孕妇女血清及蜕膜组织液对NK细胞活性及淋巴细胞增殖功能的影响，并采用正常未孕妇女血清作对照，了解早孕妇女全身及子宫局部对免疫细胞功能的影响。
资料与方法
一、研究对象
32例早孕妇女均来自1998年10月在我院行人工流产术的正常孕妇，年龄19～35岁，妊娠周数6～8周，孕期无腹痛及阴道流血，以往无急、慢性病史及流产史，无感染及自身免疫性疾病史， B超检查显示胚胎发育正常。同时选择25例正常未孕妇女作为对照组，年龄23～37岁，无感染及自身免疫性疾病史。
, 百拇医药
二、方法
1.标本收集：分别收集早孕妇女与正常未孕妇女的外周血血清、早孕妇女人工流产术中的蜕膜组织，将蜕膜组织分别置匀浆机中制成匀浆，离心后取上清液(约4～5 g蜕膜组织可获取1 ml蜕膜组织液)。另选择5名18～24岁健康未孕妇女(自愿者)，取其外周血，获取正常NK细胞及淋巴细胞供实验用。
2.淋巴细胞的制备：将健康未孕妇女的外周血，经磷酸盐缓冲液稀释并加入淋巴细胞分离液后离心，收集淋巴细胞，调至细胞含量为5×105个/ml。
3.NK细胞活性测定：将已制备的淋巴细胞 (含NK细胞)与经放射性同位素3H-胸腺嘧啶标记的K562细胞 (NK细胞特异性靶细胞)混合，分别加入非早孕、早孕妇女血清及蜕膜组织液作为实验孔(分别为对照组、早孕血清组、蜕膜组织液组)，另设自然释放孔(无淋巴细胞及血清、蜕膜组织液)。分别加入小牛血清0.1 ml，置5%二氧化碳孵育箱内，37℃、48 h后分别收集各孔内细胞，冲洗后经液闪计数器测定未被杀灭的K562细胞内3H-胸腺嘧啶的每分钟放射次数(counts per minete,CPM)，以此观察NK细胞活性的变化。观察结果按下列公式计算。
, 百拇医药
4.淋巴细胞增殖功能测定(淋巴细胞增殖刺激试验)：将已制备的淋巴细胞与植物凝结素、放射性同位素3H-胸腺嘧啶 (中国科学院上海核研究所提供)及10%小牛血清0.1 ml混合，分别加入等量非孕、早孕妇女血清及蜕膜组织液(分别为对照组、早孕血清组和蜕膜组织液组)。置5%二氧化碳孵箱，37℃、72 h后，分别收集各孔淋巴细胞，经液闪计数器测定淋巴细胞增殖时摄入细胞内的3H-胸腺嘧啶的CPM，以此观察淋巴细胞增殖功能的变化。
三、统计学方法
结果以±s表示，采用方差分析法处理。
结果
一、正常未孕、早孕妇女血清及蜕膜组织液对NK细胞活性的作用
早孕血清组及蜕膜组织液组NK细胞活性显著低于对照组(P<0.01)，且蜕膜组织液组显著低于早孕血清组(P<0.01)。见表1。
, 百拇医药
表1 3组妇女NK细胞活性及淋巴细胞增殖功能的比较(±s) 组别
总例数
NK细胞活性
(%)
淋巴细胞增殖功能
(CPM)
对照组
25
46.1±3.2
4883±643
早孕血清组
32
, 百拇医药
35.8±3.0
3689±456
蜕膜组织液组
32
19.1±2.9
2059±288
二、非孕、早孕妇女血清及蜕膜组织液对淋巴细胞增殖功能的作用
早孕血清组及蜕膜组织液组淋巴细胞增殖功能显著低于对照组(P<0.01)，且蜕膜组织液组显著低于早孕血清组(P<0.005)。见表1。
讨论
一、早孕妇女血清及蜕膜组织液的免疫抑制作用
, 百拇医药
Xiao等[3]研究表明，孕妇外周血的血浆对NK细胞活性具有明显的抑制作用。但对蜕膜组织液的研究尚未见报道。本研究结果表明，早孕妇女血清及蜕膜组织液对NK细胞活性及淋巴细胞增殖均具有抑制作用，证明在早孕妇女血清及蜕膜组织中存在一种具有抑制免疫功能的物质——免疫抑制因子。但对此免疫抑制因子的来源和性质尚不清楚。本研究结果表明，蜕膜组织液对免疫细胞的抑制作用显著强于血清，提示孕妇血清内的免疫抑制因子可能来源于子宫局部的蜕膜组织。
二、NK细胞、淋巴细胞与妊娠的关系
早在80年代，人们就发现早孕时子宫蜕膜内出现大量的NK细胞及淋巴细胞。Duclos等[4]报道，NK细胞的细胞数目和杀伤毒性与流产有关。Ho等[5]研究发现，在妊娠失败的蜕膜内NK细胞活性明显增强。林其德[6]报道，在非孕期子宫内膜淋巴细胞中，T淋巴细胞占 46%～50%。在孕期，其数量减少至20%，并认为T淋巴细胞主要通过辅助性T细胞-1(Th1)免疫及其有关细胞因子，影响生殖功能，使胚胎受到损害。因此，早孕妇女蜕膜组织液及血清对NK细胞活性及淋巴细胞增殖功能的免疫抑制作用，对维持胚胎正常的免疫环境、保护胚胎生长、发育，有重要意义。
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三、蜕膜组织液免疫抑制作用在子宫局部免疫调节中的意义
蜕膜是最直接与胚胎接触的母体组织，而且早孕期子宫蜕膜部位出现大量免疫细胞，故局部的免疫因素更直接地影响胚胎的着床、发育。本研究结果提示，蜕膜组织液的免疫抑制作用显著高于血清，说明局部蜕膜组织对保护胚胎发挥着更重要的作用。因此我们认为，蜕膜组织液中的免疫抑制因子可能是调节早孕子宫局部免疫的重要因素之一。
参考文献：
[1]Ferry BL,Sargent IL,Starkey PM,et al.Cytotoxic activity against trophoblast and choriocarcinoma cells of large granular lymphocytes from human early pregnency decidua. Cell Immunol,1991,132:140-145.
, http://www.100md.com
[2]Ferry BL,Starkey PM,Sargent IL,et al.Cell populations in the human early pregnency decidua:natural killer activity and response to IL-2 of CD56-positive large granular lymphocytes.Immunology,1990,70:446-450.
[3]Xiao L,Norman AM,Eneroth PHE.Immunosuppressive properties of plasma and lymphocytes from the human retroplacental blood.Scand J Immunol,1996,44:299-304.
[4]Duclos AJ,Pomerantz DK, Baines MG,et al.Relationship between decidual leukocyte infiltration and spontataneous abortion in murine model of early fetal resorption.Cell Immunol, 1994, 159:184-190.
[5]Ho HN,Chao KH,Chen CK,et al.Activation status of T and NK cells in the endometrium throughout menstrual cycle and normal and abnormal early pregnancy. Human Immunol,1996,49:130-136.
[6]林其德.生殖免疫学进展.中华妇产科杂志,1998,33:4-6.
收稿日期：1998-12-22, 百拇医药