涎腺多形性腺瘤中纤维成份的电镜组化观察
作者：王洁 赵玉珍 唐全勇 李向印 焦建平
单位：王洁 赵玉珍 李向印 焦建平(河北医科大学口腔医学院电镜室 050017 石家庄)；唐全勇(河北医科大学第二临床医学院口腔颌面外科)
关键词：涎腺肿瘤；腺瘤；多形性；免疫组织化学
中华口腔医学杂志000116 摘 要：目的 探讨多形性腺瘤粘液软骨样组织中纤维的种类及形成机理。方法 采用组织学及电镜组织化学技术观察8例多形性腺瘤。结果 在多形性腺瘤粘液软骨样区域中，散在胶原纤维及弹性纤维构成了该区域的支架结构。电镜组化研究表明，在多形性腺瘤软骨样组织中，含有直径约50 nm的胶原原纤维和弹性纤维团块。在粘液软骨样细胞浆内可见两种分泌囊泡：一种含着色深黑、电子密度均匀、致密的前弹性蛋白分子；另一种含着色灰淡、电子密度不均匀，囊泡中充满微粒状结构的前胶原蛋白分子。细胞通过胞吐作用将这些物质释放到细胞外，形成胶原原纤维和弹性纤维。结论 肿瘤性肌上皮细胞具有合成和分泌前胶原蛋白及前弹性蛋白的能力，从而构成粘液样区域中的胶原纤维及弹性纤维。
, 百拇医药
An electron microscopic histochemical study on the fibrous formation in pleomorphic adenoma of the salivary gland
WANG Jie
(Department of Pathology,School of Stomatology,Hebei Medical University,Shijiazhuang 050017,China)
ZHAO Yuzhen
TANG Quanyong
Abstract：Objective To study the kinds of fibers and mechanism of fibrous formation in myxochondroid tissue of pleomorphic adenoma.Methods Eight cases of pleomorphic adenomas of salivary gland were studied by histological and electron microscopic histochemical techniques.Results The histological study showed that collagenous fibers and elastic fibers which constituted the trestle were distributed in myxochondroid areas of plomorphic adenoma.The electron microscopic histochemical study showed that the myxochondroid tissue contained slender collagen fibrils measuring 50 nm in diameter and heavily stained elastic fibers.In cytoplasm of the myxochondroid cells two types of the Golgi-derived vesicles were seen:one was small round vesicles with a uniform electron dense core of amorphous material and heavily stained; another type was small round vesicles with a non-uniform electron dense core of filamentous material and stained grey.These materials were released into the extracellular space by cytoplasmic exocytosis.Conclusions：Neoplastic myoepithelial cells have the ability to synthesize and secrete procollagen and precursor of elastin,thus forming collagenous fibers and elastic fibers in myxochondroid areas.
, 百拇医药
Key words：Salivary gland neoplasms;Adenoma,pleomorphic; Immunohistochemistry▲
涎腺多形性腺瘤粘液软骨样组织中纤维的性质及来源，目前国内研究较少。我们采用电镜组化技术，揭示这一组织中纤维的种类及形成机理。
材料与方法
1.材料：留取河北医科大学口腔医学院颌面外科手术切除的原发性腮腺多形性腺瘤8例标本，分别固定于3%戊二醛及10%甲醛中。
2.组织学特殊染色：间苯二酚品红法染色。切片脱蜡后至于95%酒精中，间苯二酚品红液染2 h，95%酒精洗去多余染液，1%盐酸分化，自来水冲洗，Van Gieson's液复染1 min， 95%酒精分化后，无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
, 百拇医药
3.电镜组化染色：新鲜标本经3%戊二醛固定后，再用含4%鞣酸的3%戊二醛固定2 h，二甲胂酸钠缓冲液冲洗标本至液体完全透明，2%饿酸后固定1 h，梯度乙醇脱水，Epon 812包埋。半薄切片定位，超薄切片后常规电镜染色，H-500透射电镜下观察。
结果
1.组织学特殊染色结果：间苯二酚品红法染色显示胶原纤维呈红色，弹性纤维呈深蓝黑色，肿瘤细胞呈黄色。在8例多形性腺瘤中，肿瘤外周被膜中的胶原纤维呈红色，束状排列。肿瘤中双层导管结构外部分区域环绕着红染的胶原纤维。在粘液软骨样组织内，胶原纤维细长、均匀，弥散分布，构成该区域的网状支架(图1)。在肿瘤被膜中未见弹性纤维分布，在肿瘤双层导管结构外和粘液软骨样区域内弹性纤维数量不等，分布不均，其平行或交错排列，有的卷曲，形成大小不等的蓝黑色小球(图2)。
, 百拇医药
图1 多形性腺瘤粘液软骨样区域中，红染的胶原纤维交错排列，构成网状支架(间苯二酚品红染色 ×200) 图2 多形性腺瘤中呈深蓝染的弹性纤维平行排列，部分纤维卷曲形成蓝黑色的小球(间苯二酚品红染色 ×400)
2.电镜组化研究结果：8例多形性腺瘤粘液软骨样区域中散在着胶原原纤维、弹性纤维和一些不定形物质。在圆形或三角形的粘液软骨样细胞周围有基板围绕。基板的分布多呈不连续状或灶状，部分区域可见复层基板。在基板外或细胞膜外分布着数量不定的胶原原纤维、微原纤维和弹性纤维。弹性纤维呈电子致密的团块，大小不等，形状不规则，着色深黑，团块间相互吻合。胶原原纤维排列成束，横断面呈高电子密度的小圆颗粒，直径约50 nm，原胶原蛋白分子的微原纤维，直径约25 nm，呈团状或小束状分布，位于细胞膜周围。这些纤维成份混杂在一起(图3，4)。在粘液软骨样细胞浆内有丰富的线粒体、粗面内质网、糖原颗粒、肌微丝及中间丝。胞浆内分泌囊泡有两种类型：一种电子密度均匀、致密，内含着色深黑的前弹性蛋白分子；另一种电子密度不均匀，内含着色灰淡的前胶原蛋白分子，囊泡中充满了微细的丝状结构。两种分泌囊泡可同时出现在同一细胞的胞浆内。细胞通过胞吐作用将前胶原蛋白分子和前弹性蛋白分子分泌到细胞外(图5)。刚分泌出来的前胶原蛋白分子呈杂乱的微丝状结构，排列无序。其旁可见呈小束状或团块状的原胶原蛋白的微原纤维。双层导管结构外周分布着不连续的基板、胶原原纤维和一些不定形的电子致密物，导管的管腔内未见胶原原纤维和弹性纤维。
, http://www.100md.com
图3 多形性腺瘤中粘液软骨样细胞外有基板(1)及胶原原纤维(2)分布。细胞胞浆内含有前胶原蛋白分泌囊泡(3)和前弹性蛋白分泌囊泡(4)(SEM×12 000) 图4 多形性腺瘤中粘液软骨样细胞外有基板(1)，胶原原纤维(2)及弹性纤维(3)分布。细胞浆内含有前胶原蛋白分泌囊泡(4)和前弹性蛋白分泌囊泡(5)(SEM×12 000) 图5 多形性腺瘤中粘液软骨样细胞通过胞吐作用分泌前胶原蛋白(1)。细胞外分布有前胶原蛋白微原纤维(2)和胶原原纤维(SEM×12 000)
讨论
以往研究表明，涎腺多形性腺瘤中的肿瘤性肌上皮细胞是粘液软骨样区域中的主要细胞成份，可产生蛋白多糖，形成结缔组织粘液[1，2]。粘液软骨样区域中还有一些纤维成份，肿瘤性肌上皮细胞有合成分泌前胶原蛋白和前弹性蛋白的功能，从而构成了粘液软骨样区域中的胶原纤维和弹性纤维。
胶原纤维和弹性纤维是由起源于间充质的细胞分泌产生的。肿瘤性肌上皮细胞具有同时形成胶原纤维和弹性纤维的能力，表现出平滑肌细胞的又一特征。胶原纤维是细胞在粗面内质网的核糖体上按基因控制合成前α-多肽链，经羟化酶羟化后，3条前α-多肽链缠绕形成绳索状的前胶原蛋白分子，经高尔基复合体加工后以单体形式分泌到细胞外。前胶原蛋白分子在细胞外经肽内切酶作用后切去分子两端球状构形，形成原胶原蛋白分子。原胶原蛋白分子平行排列聚合成胶原原纤维[3]。用鞣酸电镜组织化学技术示踪，可见细胞内含有前胶原蛋白囊泡分泌过程及前胶原蛋白在细胞外转变成原胶原蛋白，继而聚合成胶原原纤维过程中的形态变化。细胞内前胶原蛋白分子是以一条条3股螺旋结构存在于高尔基复合体的分泌囊泡中，电镜下含有前胶原蛋白分子的分泌囊泡电子密度不均匀，充满了微细的丝状结构。这一特征区别于前弹性蛋白分泌囊泡。含有前弹性蛋白的分泌囊泡着色深黑，电子密度均匀、致密。这一点与其他文献一致[4]。细胞在胞浆内合成了可溶性的前弹性蛋白后，分泌到细胞外转化成不溶性的弹性蛋白和微原纤维。这些微原纤维彼此联合，与弹性蛋白构成弹性纤维。弹性蛋白分子能任意卷曲，分子间籍共价键交联成网。电镜下，弹性纤维呈不规则的、着色深黑的团块；在光镜下可呈卷曲的蓝黑色小球。电镜观察发现，多形性腺瘤的双层导管结构外和粘液软骨样细胞周围分布有基板物质。其他作者研究发现，这些基板物质含有Ⅳ型胶原、层粘蛋白和硫酸肝素糖蛋白等物质[5]。多形性腺瘤的基板多呈不连续状或灶状分布。有些区域可见复层基板[6]。分泌活跃细胞的基板较明显；分泌不活跃的细胞反之。
, http://www.100md.com
基金项目：河北省科委专项科研基金资助项目(97276162D)
参考文献：
[1]王洁，吴奇光，孙开华，等.涎腺多形性腺瘤中肌上皮细胞的免疫电镜研究.中华口腔医学杂志，1994，29：82-83.
[2]王洁，吴奇光，孙开华，等.涎腺多形性腺瘤组织发生的探讨.中华口腔医学杂志，1995，30：70-71.
[3]李肇春.结缔组织.见：成令忠，主编.组织学与胚胎学.第4版.北京：人民卫生出版社，1995.34-35.
[4]David R,Buchenr A.Tannic acid-glutaral dehyde fixative and pleomorphic adennomas of the salivary gland: an ultrastructural study.J Oral Pathol,1982,11:26-38.
, http://www.100md.com
[5]Saku T,Cheng J,Okabe H,et al.Immunolocalization of basement membrane molecules in thestoma of salivary gland pleomorphic adenoma.J Oral Pathol Med,1990,19:208-214.
[6]Dardick I,Nostrand PV,Jeans D,et al.Pleomorphic adenoma,II:Ultrastructural Organization of “Stromal” regions.Hum Pathol,1983,14:798-809.
收稿日期：1999-02-22, 百拇医药
单位：王洁 赵玉珍 李向印 焦建平(河北医科大学口腔医学院电镜室 050017 石家庄)；唐全勇(河北医科大学第二临床医学院口腔颌面外科)
关键词：涎腺肿瘤；腺瘤；多形性；免疫组织化学
中华口腔医学杂志000116 摘 要：目的 探讨多形性腺瘤粘液软骨样组织中纤维的种类及形成机理。方法 采用组织学及电镜组织化学技术观察8例多形性腺瘤。结果 在多形性腺瘤粘液软骨样区域中，散在胶原纤维及弹性纤维构成了该区域的支架结构。电镜组化研究表明，在多形性腺瘤软骨样组织中，含有直径约50 nm的胶原原纤维和弹性纤维团块。在粘液软骨样细胞浆内可见两种分泌囊泡：一种含着色深黑、电子密度均匀、致密的前弹性蛋白分子；另一种含着色灰淡、电子密度不均匀，囊泡中充满微粒状结构的前胶原蛋白分子。细胞通过胞吐作用将这些物质释放到细胞外，形成胶原原纤维和弹性纤维。结论 肿瘤性肌上皮细胞具有合成和分泌前胶原蛋白及前弹性蛋白的能力，从而构成粘液样区域中的胶原纤维及弹性纤维。
, 百拇医药
An electron microscopic histochemical study on the fibrous formation in pleomorphic adenoma of the salivary gland
WANG Jie
(Department of Pathology,School of Stomatology,Hebei Medical University,Shijiazhuang 050017,China)
ZHAO Yuzhen
TANG Quanyong
Abstract：Objective To study the kinds of fibers and mechanism of fibrous formation in myxochondroid tissue of pleomorphic adenoma.Methods Eight cases of pleomorphic adenomas of salivary gland were studied by histological and electron microscopic histochemical techniques.Results The histological study showed that collagenous fibers and elastic fibers which constituted the trestle were distributed in myxochondroid areas of plomorphic adenoma.The electron microscopic histochemical study showed that the myxochondroid tissue contained slender collagen fibrils measuring 50 nm in diameter and heavily stained elastic fibers.In cytoplasm of the myxochondroid cells two types of the Golgi-derived vesicles were seen:one was small round vesicles with a uniform electron dense core of amorphous material and heavily stained; another type was small round vesicles with a non-uniform electron dense core of filamentous material and stained grey.These materials were released into the extracellular space by cytoplasmic exocytosis.Conclusions：Neoplastic myoepithelial cells have the ability to synthesize and secrete procollagen and precursor of elastin,thus forming collagenous fibers and elastic fibers in myxochondroid areas.
, 百拇医药
Key words：Salivary gland neoplasms;Adenoma,pleomorphic; Immunohistochemistry▲
涎腺多形性腺瘤粘液软骨样组织中纤维的性质及来源，目前国内研究较少。我们采用电镜组化技术，揭示这一组织中纤维的种类及形成机理。
材料与方法
1.材料：留取河北医科大学口腔医学院颌面外科手术切除的原发性腮腺多形性腺瘤8例标本，分别固定于3%戊二醛及10%甲醛中。
2.组织学特殊染色：间苯二酚品红法染色。切片脱蜡后至于95%酒精中，间苯二酚品红液染2 h，95%酒精洗去多余染液，1%盐酸分化，自来水冲洗，Van Gieson's液复染1 min， 95%酒精分化后，无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
, 百拇医药
3.电镜组化染色：新鲜标本经3%戊二醛固定后，再用含4%鞣酸的3%戊二醛固定2 h，二甲胂酸钠缓冲液冲洗标本至液体完全透明，2%饿酸后固定1 h，梯度乙醇脱水，Epon 812包埋。半薄切片定位，超薄切片后常规电镜染色，H-500透射电镜下观察。
结果
1.组织学特殊染色结果：间苯二酚品红法染色显示胶原纤维呈红色，弹性纤维呈深蓝黑色，肿瘤细胞呈黄色。在8例多形性腺瘤中，肿瘤外周被膜中的胶原纤维呈红色，束状排列。肿瘤中双层导管结构外部分区域环绕着红染的胶原纤维。在粘液软骨样组织内，胶原纤维细长、均匀，弥散分布，构成该区域的网状支架(图1)。在肿瘤被膜中未见弹性纤维分布，在肿瘤双层导管结构外和粘液软骨样区域内弹性纤维数量不等，分布不均，其平行或交错排列，有的卷曲，形成大小不等的蓝黑色小球(图2)。
, 百拇医药
图1 多形性腺瘤粘液软骨样区域中，红染的胶原纤维交错排列，构成网状支架(间苯二酚品红染色 ×200) 图2 多形性腺瘤中呈深蓝染的弹性纤维平行排列，部分纤维卷曲形成蓝黑色的小球(间苯二酚品红染色 ×400)
2.电镜组化研究结果：8例多形性腺瘤粘液软骨样区域中散在着胶原原纤维、弹性纤维和一些不定形物质。在圆形或三角形的粘液软骨样细胞周围有基板围绕。基板的分布多呈不连续状或灶状，部分区域可见复层基板。在基板外或细胞膜外分布着数量不定的胶原原纤维、微原纤维和弹性纤维。弹性纤维呈电子致密的团块，大小不等，形状不规则，着色深黑，团块间相互吻合。胶原原纤维排列成束，横断面呈高电子密度的小圆颗粒，直径约50 nm，原胶原蛋白分子的微原纤维，直径约25 nm，呈团状或小束状分布，位于细胞膜周围。这些纤维成份混杂在一起(图3，4)。在粘液软骨样细胞浆内有丰富的线粒体、粗面内质网、糖原颗粒、肌微丝及中间丝。胞浆内分泌囊泡有两种类型：一种电子密度均匀、致密，内含着色深黑的前弹性蛋白分子；另一种电子密度不均匀，内含着色灰淡的前胶原蛋白分子，囊泡中充满了微细的丝状结构。两种分泌囊泡可同时出现在同一细胞的胞浆内。细胞通过胞吐作用将前胶原蛋白分子和前弹性蛋白分子分泌到细胞外(图5)。刚分泌出来的前胶原蛋白分子呈杂乱的微丝状结构，排列无序。其旁可见呈小束状或团块状的原胶原蛋白的微原纤维。双层导管结构外周分布着不连续的基板、胶原原纤维和一些不定形的电子致密物，导管的管腔内未见胶原原纤维和弹性纤维。
, http://www.100md.com
图3 多形性腺瘤中粘液软骨样细胞外有基板(1)及胶原原纤维(2)分布。细胞胞浆内含有前胶原蛋白分泌囊泡(3)和前弹性蛋白分泌囊泡(4)(SEM×12 000) 图4 多形性腺瘤中粘液软骨样细胞外有基板(1)，胶原原纤维(2)及弹性纤维(3)分布。细胞浆内含有前胶原蛋白分泌囊泡(4)和前弹性蛋白分泌囊泡(5)(SEM×12 000) 图5 多形性腺瘤中粘液软骨样细胞通过胞吐作用分泌前胶原蛋白(1)。细胞外分布有前胶原蛋白微原纤维(2)和胶原原纤维(SEM×12 000)
讨论
以往研究表明，涎腺多形性腺瘤中的肿瘤性肌上皮细胞是粘液软骨样区域中的主要细胞成份，可产生蛋白多糖，形成结缔组织粘液[1，2]。粘液软骨样区域中还有一些纤维成份，肿瘤性肌上皮细胞有合成分泌前胶原蛋白和前弹性蛋白的功能，从而构成了粘液软骨样区域中的胶原纤维和弹性纤维。
胶原纤维和弹性纤维是由起源于间充质的细胞分泌产生的。肿瘤性肌上皮细胞具有同时形成胶原纤维和弹性纤维的能力，表现出平滑肌细胞的又一特征。胶原纤维是细胞在粗面内质网的核糖体上按基因控制合成前α-多肽链，经羟化酶羟化后，3条前α-多肽链缠绕形成绳索状的前胶原蛋白分子，经高尔基复合体加工后以单体形式分泌到细胞外。前胶原蛋白分子在细胞外经肽内切酶作用后切去分子两端球状构形，形成原胶原蛋白分子。原胶原蛋白分子平行排列聚合成胶原原纤维[3]。用鞣酸电镜组织化学技术示踪，可见细胞内含有前胶原蛋白囊泡分泌过程及前胶原蛋白在细胞外转变成原胶原蛋白，继而聚合成胶原原纤维过程中的形态变化。细胞内前胶原蛋白分子是以一条条3股螺旋结构存在于高尔基复合体的分泌囊泡中，电镜下含有前胶原蛋白分子的分泌囊泡电子密度不均匀，充满了微细的丝状结构。这一特征区别于前弹性蛋白分泌囊泡。含有前弹性蛋白的分泌囊泡着色深黑，电子密度均匀、致密。这一点与其他文献一致[4]。细胞在胞浆内合成了可溶性的前弹性蛋白后，分泌到细胞外转化成不溶性的弹性蛋白和微原纤维。这些微原纤维彼此联合，与弹性蛋白构成弹性纤维。弹性蛋白分子能任意卷曲，分子间籍共价键交联成网。电镜下，弹性纤维呈不规则的、着色深黑的团块；在光镜下可呈卷曲的蓝黑色小球。电镜观察发现，多形性腺瘤的双层导管结构外和粘液软骨样细胞周围分布有基板物质。其他作者研究发现，这些基板物质含有Ⅳ型胶原、层粘蛋白和硫酸肝素糖蛋白等物质[5]。多形性腺瘤的基板多呈不连续状或灶状分布。有些区域可见复层基板[6]。分泌活跃细胞的基板较明显；分泌不活跃的细胞反之。
, http://www.100md.com
基金项目：河北省科委专项科研基金资助项目(97276162D)
参考文献：
[1]王洁，吴奇光，孙开华，等.涎腺多形性腺瘤中肌上皮细胞的免疫电镜研究.中华口腔医学杂志，1994，29：82-83.
[2]王洁，吴奇光，孙开华，等.涎腺多形性腺瘤组织发生的探讨.中华口腔医学杂志，1995，30：70-71.
[3]李肇春.结缔组织.见：成令忠，主编.组织学与胚胎学.第4版.北京：人民卫生出版社，1995.34-35.
[4]David R,Buchenr A.Tannic acid-glutaral dehyde fixative and pleomorphic adennomas of the salivary gland: an ultrastructural study.J Oral Pathol,1982,11:26-38.
, http://www.100md.com
[5]Saku T,Cheng J,Okabe H,et al.Immunolocalization of basement membrane molecules in thestoma of salivary gland pleomorphic adenoma.J Oral Pathol Med,1990,19:208-214.
[6]Dardick I,Nostrand PV,Jeans D,et al.Pleomorphic adenoma,II:Ultrastructural Organization of “Stromal” regions.Hum Pathol,1983,14:798-809.
收稿日期：1999-02-22, 百拇医药