肝癌患者双弹头导向药物治疗对NK细胞活性和T细胞亚群的影响
作者：李志革 吴英德 周德南 贺海平 甘友全 黄秉琰 胡晓桦
单位：李志革 吴英德 周德南 贺海平 甘友全 黄秉琰 胡晓(广西医科大学附属肿瘤医院化疗科，广西南宁530021)
关键词：抗甲胎蛋白抗体；导向治疗；原发性肝癌；T细胞亚群；NK细胞；丝裂霉素
细胞与分子免疫学杂志000122
摘要:目的探讨中晚期肝癌(HCC)患者接受抗甲胎蛋白抗体介导的双弹头导向药物治疗对细胞免疫功能的影响。方法采用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶法和51Cr释放试验，分别测定了HCC患者T细胞亚群数和NK细胞的活性。结果导向组患者用导向药物治疗后，其NK细胞和CD3+T细胞、CD4+T细胞数，CD4+/CD8+T细胞比值均无显著降低，CD8+T细胞数无明显升高(P均>0.05)；而化疗组患者做化疗后，其NK细胞的活性和CD3+T细胞、CD4+T细胞数，以及CD4+/CD8+T细胞的比值均显著降低，CD8+T细胞数显著升高(P均<0.05)。结论该双弹头导向药物对HCC患者的细胞免疫功能无影响，而化疗患者的细胞免疫功能则明显下降。
, 百拇医药
中图号：R730.58 文献标识码：A
文章编号:1007-8738(2000)01-0067-68
Changes of T cell subsets and NK cell activity in patients with hepatocellular cancer in the medium and late stages before and after dual warhead drug therapy
LI Zhi-ge,WU Ying-de, ZHOU Den-an, HE Hai-ping,GAN You-quang, Huang Bing-yian, HU Xiao-hua
Department of chemotherapy, Cancer Hosptial, Guangxi Medical University, Nanning 530021 Guangxi Province, China
, 百拇医药
Abstract:Aim To explore the changes of cellular immune function of patients with hepatocellular cancer(HCC)in the medium and late stages before and after dual warhead drug(131I-anti AFP pAb-MMC or 131I-anti mAb -MMC) therapy. Methods The peripheral blood T cell subsets and NK cell activity were detected by APAAP staining and 51Cr release assay. Results T cell subsets(CD3+, CD4+),NK cell activity and ratio of CD4+ /CD8+ T cells had no significant changes in directed therapy group, but above immunological-indexes declined significantly, the number of CD8+T cells increased markedly(P<0.05)in the chemo-therapy group. Conclusion Dual warhead drug therapy has no effect on cellular immune function of HCC.
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Keywords:anti-AFP antibody;directed therapy; T cell subset hepatocellular;cancer;NK cell; MMC
随着免疫学的发展，人们对肿瘤患外周血T细胞亚群和NK细胞活性变化的研究报道甚多，但对应用抗体介导双弹头导向药物治疗中晚期肝细胞性肝癌(HCC)患者前后，T细胞亚群和NK细胞活性的变化的研究尚未见报道。我们采用碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶法(APAAP法)和 51Cr释放试验，分别测定31例HCC患者导向治疗前后，T细胞亚群数和NK细胞的活性，以探讨HCC患者接受导向治疗前后细胞免疫功能的变化，为肿瘤的防治提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 材料 不能进行手术切除的中晚期HCC患者(根据1977年，全国肝癌防治协作组拟定的标准而确诊)51例，均为男性，年龄30～69岁。按治疗方法的不同，将患者分为导向组(31例)和化疗组(20例)。另选年龄25～69岁的男性健康献血者20例作为正常对照组。导向治疗药物：131I-大鼠抗人AFP mAb-MMC和131I-马抗人AFP pAb- MMC的制备、标记率、比放射性和MMC的含量见文献〔1，2〕。
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1.2 方法 参照文献〔3〕的方法，31例导向治疗组又分为两组：导向I组(12例)通过外周静脉滴注131 I-抗AFP mAb-MMC，131I的剂量为126.17 ～33.633 MBq；导向II组(19例)滴注 131 I抗AFP PAb-MMC，131I的剂量为122.84～617.92 MBq。化疗组(20例)静脉滴注顺铂10 mg(1～10 d)；5-FU 0.5 g(1～5 d)。健康献血者采血4 mL两份。患者则在导向药物治疗或化疗前及后2 wk，各取新鲜末梢静脉血2 mL两份。采用APAAP法测定NK细胞的活性(检测试剂盒由军事医学科学院提供)。疗效判定标准，近期疗效：按1979年WHO制订的实体瘤近期疗效分级标准判断。血清AFP的浓度经治疗后下降25%以上并持续1 mo以上者，为AFP下降。生存率采用卡—迈法计算〔3〕。
2 结 果
2.1 导向治疗的临床疗效 导向药物治疗组肿瘤的缩小率、AFP的下降率及患者的一年生存率，分别为50.0%，66.7%和50.0%〔2〕，均显著高于同期治疗的化疗组(分别为15.0%，25.0%和10.0%，P均<0.01)。
, 百拇医药
2.2 细胞免疫功能比较 治疗前HCC患者NK细胞的活性，CD3+，CD4+T细胞数及CD4+/CD8+T细胞值均明显下降，CD8+T细胞数升高，与对照组比较差异显著(P<0.05)；而导向治疗组和化疗组患者治疗前无显著差异(P<0.05， 表1)；治疗后肝癌患者NK细胞的活性， CD3+，CD4+T细胞数及CD4+/CD8+T细胞比值均有所下降，CD8+T细胞数有所升高，但无显著性差异(P>0.05，表2)。化疗后肝癌患者NK的细胞活性，CD3+，CD4+T细胞数及CD4+/CD8+T细胞的比值均明显下降，但CD8+T细胞数显著升高，化疗前、后差异显著(P均>0.05，表3)。
表1 治疗前原发性肝癌患者与对照组免疫指标的比较
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Tab 1 Comparison of immunological indexes between HCC patients
before directed therapy and control group (n=31,±s)
Immunologic
indexes
RIT
Chemotherapy
Control
CD3+(%)
61.2±9.9
, http://www.100md.com 62.1±6.8
66.0±9.9
CD4+(%)
32.1±4.8
31.8±7.3
43.8±9.0
CD8+(%)
37.8±6.4
36.9±4.6
31.3±7.0
CD4+/CD8+
, http://www.100md.com
0.9± 0.4
0.9±0.3
1.5±0.5
NK activity
30.4±7.5
31.6±6.7
42.4±12.4
P<0.05,column 1 vs column2; P<0.05,column 1 and 2 vs column 3;
表2 导向治疗组肝癌患者治疗前后免疫学指标的变化
Tab 2 Changes of immunological indexes of HCC patients be
, 百拇医药
fore and after directed therapy (n=31,±s)
Immunologic
indexes
Before
treatment
After
treatment
CD3+(%)
61.2±7.6
57.6±7.3b
CD4+(%)
, http://www.100md.com
32.1±4.8
30.6±6.8a
CD8+(%)
37.8±6.4
40.3±7.9b
CD4+/CD8+
0.9±0.4
0.8±0.6b
NK activity
30.4±7.5
, http://www.100md.com
29.8±6.1a
aP<0.05, bP<0.10, vs before treatment.
表3 化疗组肝癌患者治疗前后免疫学指标的变化
Tab 3 Changes in immunological indexes of HCC patients
before and after chemotherapy (n=31,±s)
Immunologic
indexes
Before
, http://www.100md.com
treatment
After
treatment
CD3+(%)
61.1±6.8
50.3±8.4b
CD4+(%)
31.8±47.3
26.1±6.9a
CD8+(%)
36.9±4.6
, 百拇医药
43.8±7.3a
CD4+/CD8+
0.9±0.3
0.6±0.2b
NK activity
31.6±6.7
23.7±7.5b
aP<0.05, bP<0.01, vs before treatment.
3 讨 论
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导向治疗是80年代HCC研究的热点之一。国内外学者尝试用各种抗体标记核素对HCC进行导向治疗。虽然取得了一定的疗效，但距离最初的设想相差甚远，其原因除缺乏真正抗肿瘤的特异性抗体及弹头的杀伤力不足外，可能还与肿瘤宿主自身的因素有关。诸多研究表明，肿瘤患者的细胞免疫功能常呈低下状态〔4〕。本结果也证实了此点，即与健康人相比较，HCC患者的NK细胞活性，CD3+,CD4+T细胞数及CD4+/CD8+T细胞的比值均明显降低，而CD8+T细胞则显著升高，表明HCC患者的T细胞亚群间的平衡失调，总体细胞免疫功能低下，这可能是中晚期HCC患者预后差的原因之一。
HCC患者的细胞免疫功能在治疗前常呈低下状态，常规化疗或放疗后更是雪上加霜，使患者的免疫功能进一步下降，从而影响其预后。为此，我们研制了双弹头导向药物 131I-抗AFP mAb-MMC和 131I-抗AFP-PAb-MMC，使之特异性地与分泌AFP的HCC细胞结合，通过内照射和化疗的协同作用，较多地杀伤肿瘤细胞而较少地损害机体。研究结果显示，双弹头药物导向治疗后，患者的NK细胞活性，CD3+，CD4+T细胞数及CD4+/CD8+T细胞的比值均无显著降低，CD8+T细胞亦无明显升高，提示此种导向治疗对患者的细胞免疫功能影响不大。原因可能与其携带的药物剂量较小、放射性降低，以及导向药物能选择性有效地聚集在肿瘤部位，从而减少了对正常组织的损伤有关。我们考虑，如能合理地配合应用其它具有抗肿瘤作用的细胞因子(如IFN-γ，TNF-α和IL-2等)可能更有利于调节，并增强T细胞和NK细胞的免疫功能、提高机体的免疫力。
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基金项目：国家“八五”科技攻关资助，No.85-914-02-05
作者简介：李志革，男，33岁，主治医师，硕士
南宁市滨湖路6号.Tel.(0771)5313022-3051
参考文献:
〔1〕贺海平，田春林，周德南，等.大鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备和鉴定〔J〕.单克隆抗体通讯，1993；9：5456.
〔2〕吴英德，周德南，甘友全，等.131I抗AFP抗体MMC双弹头导向治疗肝癌31例〔J〕.新消化病学杂志，1997；5(7)：415416.
〔3〕李志革，吴英德，周德南，等.131I抗AFPmAbMMC“双弹头”免疫导向治疗原发性肝癌的临床观察〔J〕.中华肿瘤杂志，1996；(5)：368370.
〔4〕黄文献，林为澄，许慎，等.原发性肝癌病人外周血T淋巴细胞亚群变化的检测意义〔J〕.实用癌症杂志，1995；(2)：114115.
收稿日期：1999-04-07
修回日期：1999-08-05, 百拇医药
单位：李志革 吴英德 周德南 贺海平 甘友全 黄秉琰 胡晓(广西医科大学附属肿瘤医院化疗科，广西南宁530021)
关键词：抗甲胎蛋白抗体；导向治疗；原发性肝癌；T细胞亚群；NK细胞；丝裂霉素
细胞与分子免疫学杂志000122
摘要:目的探讨中晚期肝癌(HCC)患者接受抗甲胎蛋白抗体介导的双弹头导向药物治疗对细胞免疫功能的影响。方法采用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶法和51Cr释放试验，分别测定了HCC患者T细胞亚群数和NK细胞的活性。结果导向组患者用导向药物治疗后，其NK细胞和CD3+T细胞、CD4+T细胞数，CD4+/CD8+T细胞比值均无显著降低，CD8+T细胞数无明显升高(P均>0.05)；而化疗组患者做化疗后，其NK细胞的活性和CD3+T细胞、CD4+T细胞数，以及CD4+/CD8+T细胞的比值均显著降低，CD8+T细胞数显著升高(P均<0.05)。结论该双弹头导向药物对HCC患者的细胞免疫功能无影响，而化疗患者的细胞免疫功能则明显下降。
, 百拇医药
中图号：R730.58 文献标识码：A
文章编号:1007-8738(2000)01-0067-68
Changes of T cell subsets and NK cell activity in patients with hepatocellular cancer in the medium and late stages before and after dual warhead drug therapy
LI Zhi-ge,WU Ying-de, ZHOU Den-an, HE Hai-ping,GAN You-quang, Huang Bing-yian, HU Xiao-hua
Department of chemotherapy, Cancer Hosptial, Guangxi Medical University, Nanning 530021 Guangxi Province, China
, 百拇医药
Abstract:Aim To explore the changes of cellular immune function of patients with hepatocellular cancer(HCC)in the medium and late stages before and after dual warhead drug(131I-anti AFP pAb-MMC or 131I-anti mAb -MMC) therapy. Methods The peripheral blood T cell subsets and NK cell activity were detected by APAAP staining and 51Cr release assay. Results T cell subsets(CD3+, CD4+),NK cell activity and ratio of CD4+ /CD8+ T cells had no significant changes in directed therapy group, but above immunological-indexes declined significantly, the number of CD8+T cells increased markedly(P<0.05)in the chemo-therapy group. Conclusion Dual warhead drug therapy has no effect on cellular immune function of HCC.
, http://www.100md.com
Keywords:anti-AFP antibody;directed therapy; T cell subset hepatocellular;cancer;NK cell; MMC
随着免疫学的发展，人们对肿瘤患外周血T细胞亚群和NK细胞活性变化的研究报道甚多，但对应用抗体介导双弹头导向药物治疗中晚期肝细胞性肝癌(HCC)患者前后，T细胞亚群和NK细胞活性的变化的研究尚未见报道。我们采用碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶法(APAAP法)和 51Cr释放试验，分别测定31例HCC患者导向治疗前后，T细胞亚群数和NK细胞的活性，以探讨HCC患者接受导向治疗前后细胞免疫功能的变化，为肿瘤的防治提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 材料 不能进行手术切除的中晚期HCC患者(根据1977年，全国肝癌防治协作组拟定的标准而确诊)51例，均为男性，年龄30～69岁。按治疗方法的不同，将患者分为导向组(31例)和化疗组(20例)。另选年龄25～69岁的男性健康献血者20例作为正常对照组。导向治疗药物：131I-大鼠抗人AFP mAb-MMC和131I-马抗人AFP pAb- MMC的制备、标记率、比放射性和MMC的含量见文献〔1，2〕。
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1.2 方法 参照文献〔3〕的方法，31例导向治疗组又分为两组：导向I组(12例)通过外周静脉滴注131 I-抗AFP mAb-MMC，131I的剂量为126.17 ～33.633 MBq；导向II组(19例)滴注 131 I抗AFP PAb-MMC，131I的剂量为122.84～617.92 MBq。化疗组(20例)静脉滴注顺铂10 mg(1～10 d)；5-FU 0.5 g(1～5 d)。健康献血者采血4 mL两份。患者则在导向药物治疗或化疗前及后2 wk，各取新鲜末梢静脉血2 mL两份。采用APAAP法测定NK细胞的活性(检测试剂盒由军事医学科学院提供)。疗效判定标准，近期疗效：按1979年WHO制订的实体瘤近期疗效分级标准判断。血清AFP的浓度经治疗后下降25%以上并持续1 mo以上者，为AFP下降。生存率采用卡—迈法计算〔3〕。
2 结 果
2.1 导向治疗的临床疗效 导向药物治疗组肿瘤的缩小率、AFP的下降率及患者的一年生存率，分别为50.0%，66.7%和50.0%〔2〕，均显著高于同期治疗的化疗组(分别为15.0%，25.0%和10.0%，P均<0.01)。
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2.2 细胞免疫功能比较 治疗前HCC患者NK细胞的活性，CD3+，CD4+T细胞数及CD4+/CD8+T细胞值均明显下降，CD8+T细胞数升高，与对照组比较差异显著(P<0.05)；而导向治疗组和化疗组患者治疗前无显著差异(P<0.05， 表1)；治疗后肝癌患者NK细胞的活性， CD3+，CD4+T细胞数及CD4+/CD8+T细胞比值均有所下降，CD8+T细胞数有所升高，但无显著性差异(P>0.05，表2)。化疗后肝癌患者NK的细胞活性，CD3+，CD4+T细胞数及CD4+/CD8+T细胞的比值均明显下降，但CD8+T细胞数显著升高，化疗前、后差异显著(P均>0.05，表3)。
表1 治疗前原发性肝癌患者与对照组免疫指标的比较
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Tab 1 Comparison of immunological indexes between HCC patients
before directed therapy and control group (n=31,±s)
Immunologic
indexes
RIT
Chemotherapy
Control
CD3+(%)
61.2±9.9
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66.0±9.9
CD4+(%)
32.1±4.8
31.8±7.3
43.8±9.0
CD8+(%)
37.8±6.4
36.9±4.6
31.3±7.0
CD4+/CD8+
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0.9± 0.4
0.9±0.3
1.5±0.5
NK activity
30.4±7.5
31.6±6.7
42.4±12.4
P<0.05,column 1 vs column2; P<0.05,column 1 and 2 vs column 3;
表2 导向治疗组肝癌患者治疗前后免疫学指标的变化
Tab 2 Changes of immunological indexes of HCC patients be
, 百拇医药
fore and after directed therapy (n=31,±s)
Immunologic
indexes
Before
treatment
After
treatment
CD3+(%)
61.2±7.6
57.6±7.3b
CD4+(%)
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32.1±4.8
30.6±6.8a
CD8+(%)
37.8±6.4
40.3±7.9b
CD4+/CD8+
0.9±0.4
0.8±0.6b
NK activity
30.4±7.5
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aP<0.05, bP<0.10, vs before treatment.
表3 化疗组肝癌患者治疗前后免疫学指标的变化
Tab 3 Changes in immunological indexes of HCC patients
before and after chemotherapy (n=31,±s)
Immunologic
indexes
Before
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treatment
After
treatment
CD3+(%)
61.1±6.8
50.3±8.4b
CD4+(%)
31.8±47.3
26.1±6.9a
CD8+(%)
36.9±4.6
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43.8±7.3a
CD4+/CD8+
0.9±0.3
0.6±0.2b
NK activity
31.6±6.7
23.7±7.5b
aP<0.05, bP<0.01, vs before treatment.
3 讨 论
, http://www.100md.com
导向治疗是80年代HCC研究的热点之一。国内外学者尝试用各种抗体标记核素对HCC进行导向治疗。虽然取得了一定的疗效，但距离最初的设想相差甚远，其原因除缺乏真正抗肿瘤的特异性抗体及弹头的杀伤力不足外，可能还与肿瘤宿主自身的因素有关。诸多研究表明，肿瘤患者的细胞免疫功能常呈低下状态〔4〕。本结果也证实了此点，即与健康人相比较，HCC患者的NK细胞活性，CD3+,CD4+T细胞数及CD4+/CD8+T细胞的比值均明显降低，而CD8+T细胞则显著升高，表明HCC患者的T细胞亚群间的平衡失调，总体细胞免疫功能低下，这可能是中晚期HCC患者预后差的原因之一。
HCC患者的细胞免疫功能在治疗前常呈低下状态，常规化疗或放疗后更是雪上加霜，使患者的免疫功能进一步下降，从而影响其预后。为此，我们研制了双弹头导向药物 131I-抗AFP mAb-MMC和 131I-抗AFP-PAb-MMC，使之特异性地与分泌AFP的HCC细胞结合，通过内照射和化疗的协同作用，较多地杀伤肿瘤细胞而较少地损害机体。研究结果显示，双弹头药物导向治疗后，患者的NK细胞活性，CD3+，CD4+T细胞数及CD4+/CD8+T细胞的比值均无显著降低，CD8+T细胞亦无明显升高，提示此种导向治疗对患者的细胞免疫功能影响不大。原因可能与其携带的药物剂量较小、放射性降低，以及导向药物能选择性有效地聚集在肿瘤部位，从而减少了对正常组织的损伤有关。我们考虑，如能合理地配合应用其它具有抗肿瘤作用的细胞因子(如IFN-γ，TNF-α和IL-2等)可能更有利于调节，并增强T细胞和NK细胞的免疫功能、提高机体的免疫力。
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基金项目：国家“八五”科技攻关资助，No.85-914-02-05
作者简介：李志革，男，33岁，主治医师，硕士
南宁市滨湖路6号.Tel.(0771)5313022-3051
参考文献:
〔1〕贺海平，田春林，周德南，等.大鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备和鉴定〔J〕.单克隆抗体通讯，1993；9：5456.
〔2〕吴英德，周德南，甘友全，等.131I抗AFP抗体MMC双弹头导向治疗肝癌31例〔J〕.新消化病学杂志，1997；5(7)：415416.
〔3〕李志革，吴英德，周德南，等.131I抗AFPmAbMMC“双弹头”免疫导向治疗原发性肝癌的临床观察〔J〕.中华肿瘤杂志，1996；(5)：368370.
〔4〕黄文献，林为澄，许慎，等.原发性肝癌病人外周血T淋巴细胞亚群变化的检测意义〔J〕.实用癌症杂志，1995；(2)：114115.
收稿日期：1999-04-07
修回日期：1999-08-05, 百拇医药