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编号:10373794
清咽合剂的质量标准研究
http://www.100md.com 前卫药学杂志
清咽合剂的质量标准研究/摘要//目的:/方法:/结果:/结论:/
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     清咽合剂的质量标准研究

    宋 茹 王媛媛

    (军区药品检验所 济南250022)

    摘要 目的:建立清咽合剂的质量控制标准。方法:采用TLC法对该制剂中的山豆根、玄参、牛蒡子、甘草进行定性鉴别;用HPLC法测定该制剂中苦参碱的含量。结果:TLC色谱中斑点清晰,易于识别;苦参碱在15.3~91.9ug·ml-1范围内呈良好的线性关系,r= 0.9995,平均回收率为99.4%,RDS=0.99%(n=5)。结论:本法简便、重复性好,可用于清咽合剂的质量控制。

    关键词 清咽合剂;苦参碱;TLC;HPLC
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    清咽合剂系由山豆根、玄参、牛蒡子和甘草复方而成的纯中药制剂,具有清咽利喉、消肿止痛之功效,临床用于治疗急慢性咽炎已20余年,疗效确切,毒副作用小。山豆根系方中君药,苦参碱为山豆根中的主要有效成分之一[1]。据文献报道苦参碱的含量测定方法有薄层扫描法[2]、高效液相色谱法[3]、高效毛细管电泳法[4]、气相色谱法[5]等。为了有效地控制清咽合剂的质量,本文采用薄层色谱法对其中的山豆根、玄参、牛蒡子、甘草进行了定性鉴别,并且应用HPLC法建立了该制剂中苦参碱的含量测定方法,为清咽合剂制定了质量控制标准。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器岛津LC-6A高效液相色谱仪;岛津SPD—6AV紫外检测器;岛津C—R4A数据处理机;硅胶G预制薄层板(军事科学院)。
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    1.2 试药苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所);清咽合剂及缺被测药村的阴性对照样品(自制);乙腈为色谱纯;其它试剂均为分析纯。

    2 薄层鉴别

    2.1 山豆根取本品20ml,加氨水2ml振摇混匀,用氯仿萃取三次(40,40,20ml),分取氯仿液蒸干,用lml甲醇溶解,作为供试品溶液。同法制备阴性样品溶液。另取苦参碱对照品,用甲醇制成每lml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各10ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯一丙酮一甲醇(9:3:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干。喷以改良碘化铋钾试液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的橙红色斑点,而阴性对照液色谱中则无相应斑点。如图1。

    2.2 玄参取本品10ml,加水饱和正丁醇20ml,超声提取30min,离心,分取正丁醇层,蒸干,残渣加l ml甲醇使溶解,作为供试品溶液。另取玄参对照药村l g及阴性样品10ml,同法制成对照药村溶液及阴性对照溶液。吸取上述3种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇—冰醋酸—水(7:1:2)为展开剂,展开,取出,晾干。喷以香草醛硫酸试液,10℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的两个红色主斑点,而阴性对照液色谱中则无相应斑点。如图2。
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    2.3 牛蒡子取阴性样品20ml,照山豆根鉴别项下,同法制成阴性样品溶液。另取牛蒡子甙对照品约10mg,用甲醇溶于10ml量瓶中并稀释至刻度,制成每1ml含1mg的溶液。作为对照品溶液。将未点样的硅胶GF254薄层板用氯仿—甲醇—甲酸(10:1:0.2)展开至前沿,取出挥去溶剂后,吸取上述2种溶液及山豆根鉴别项下的供试品溶液各10ul,分别点于薄层板上,以氯仿—甲醇(10:1)为展开剂,展开约9cm,取出后挥去溶剂,置紫外灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的斑点,而阴性对照液色谱中则无相应斑点。如图3。

    2.4 甘草取甘草对照药村0.5g及阴性样品10ml,照玄参鉴别项下,同法制成对照药材溶液及阴性对照溶液。吸取上述2种溶液及玄参鉴别项下的供试品溶液各10ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯—甲酸—冰醋酸—水(15:1:1.5:2)为展开剂,展开,取出后挥去溶剂,喷10%硫酸乙醇溶液显色,置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,而阴性对照液色谱中则无相应的荧光斑点。如图4。
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    3 含量测定

    3.1 色谱条件

    色谱柱:Shim-pack CLC-ODS(60mm×150mm );流动相:乙腈—0.02mol·L-1磷酸二氢钠(60:40);检测波长:210nm;流速:1.0ml·min-1;柱温:35℃。色谱分离结果见图5。阴性对照液在相同色谱条件下未见干扰色谱峰。

    3.2 溶液的制备

    3.2.1 对照品溶液精密称取苦参碱对照品适量,用流动相溶解并制成每lml含0.153mg的溶液备用。

    3.2.2 供试品溶液精密量取本品10ml,加氨水2ml,振摇混匀,用氯仿萃取4次(20,20,20,10ml),分取氯仿液,水浴蒸干,残渣用甲醇溶解并定容至10ml,备用。
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    3.2.3 阴性对照品溶液取缺山豆根的样品,按供试品溶液的制备方法,制成阴性对照溶液。

    3.3 线性关系的考察

    精密吸取苦参碱对照品溶液(0.153mg·ml-1)1,2,3,4,5,6ml,分别置10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。取10μl进样,按上述色谱条件测定,以峰面积对浓度(μg·ml-1)进行回归,得回归方程为:

    Y = 781185X-467421 r=0.999

    可知苦参碱在15.3~91.9μg·ml-1范围内呈良好的线性关系。

    3.4 精密度试验 取61.2μg·ml-1的标准溶液10ul连续进样6次,测定峰面积,RDS=0.8%。
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    3.5 稳定性试验 按样品测定项下进行操作,每隔lh测定一次,结果表明供试液至少在10h内稳定,RDS为129%,n=11。

    3.6 回收率试验 采用加样回收法,精密吸取已知苦参碱含量的清咽合剂10ml,精密加入一定量苦参碱对照品溶液,按上述色谱条件测定,测得平均回收率为99.4%,RDS=0.99%(n=5)。

    3.7 样品测定 取供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测得苦参碱的峰面积,以外标法计算其含量。三个批号的清咽合剂的含量测定结果见表1。

    4 讨论

    4.1 本制剂组方中4味药材通过反复实验,确定了薄层鉴别方法。该方法灵敏度高,专属性强,斑点显色明显,结果易于观察判断。

    4.2 山豆根为方中君药,山豆根中的主要有效成分为苦参碱,选用HPLC法控制其含量不得少于45.0μg·ml-1。曾采用甲醇、水等不同比例的溶剂系统,进行分离测定,结果均不佳,改用文中所述条件,制剂中的有效成分苦参碱得到良好的分离。本方法操作简便,检测结果可靠,可作为该制剂的质量控制靠方法。
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    参 考 文 献

    1 季宇彬.中药有效成分药理与应用.黑龙江科学技术出版社,1995;294

    2 王兆华,张大军,张艳秋.喘咳平气雾剂中苦参碱的含量测定.中成药,1991;13(5):14

    3 金莉霞,崔燕岩,章观德.苦参生物碱的高效液相色谱法测定.药学学报,1993;29(2):136

    4 罗明,贺平,吴孟超,等.高效毛细管电泳法测定苦参碱和氧化苦参碱.中草药,1999;30(4):261

    5 刘从盛,刘文英,盛龙生毛细管气相色谱法测定苦参及其制剂中苦参碱的含量.中草药,1993;24(9):405, http://www.100md.com