HPLC法测定华海乙肝泡腾颗粒剂中五味子乙素的含量
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前卫药学杂志
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HPLC法测定华海乙肝泡腾颗粒剂中五味子乙素的含量
王秀冬 张兆旺① 孙秀梅① 吕青涛① 管华诗② 徐家敏②
(106医院 济南250022)
(山东中医药大学 济南250014)
(青岛海洋大学 青岛266003)
摘要 目的：为控制华海乙肝泡腾颗粒剂的质量建立测定五味子乙素的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱条件为：ODS柱，以甲醇—水(79：22)为流动相，流速1.0 ml/min，检测波长254nm。结果：平均回收率99.19%，RDS=1.12%。结论：此法可作为控制华海乙肝泡腾颗粒剂质量的方法之一。
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关键词 华海乙肝泡腾颗粒剂；SBE法：五味子乙素；高效液相色谱法
华海乙肝胞腾颗粒剂由黄芪、柴胡、虎杖、五味子等组成。为控制华海乙肝泡腾颗粒剂的质量，本文采用高效液相色谱法测定华海乙肝泡腾颗粒剂中五味子乙素的含量。
1 仪器与药品
pHS—3C型精密pH计(上海雷磁仪器厂)，AE24OS型电子分析天平(瑞士METTLER)，高效液相系统(日本岛津)，LC-6A泵，SPD-6A检测器，CLCODS 6.0Ø×150色谱柱，CTO-6A恒温箱，SCL-6A控制器，CR4A积分仪。
实验用药材经张兆旺教授鉴定，黄芪为豆科植物膜荚黄氏Astragalus embranaceus(Fisch)Beg的干燥根；虎杖为蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Siebet Zucc的干燥根茎和根；柴胡为伞形科植物北柴胡Bupleurum chinenes DC.的根；五味子为木兰科植物五味子Schisandra chiensis(Turcz)Baill.的干燥成熟果实。质量符合《中国药典》1995版一部标准。
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辅料HPMC、小苏打、柠檬酸、甜菊甙质量符合《中国药典》1995版二部标准。
对照品五味子乙素(中国药品生物制品检定所，20mg,765-9202)。
甲醇色谱纯，水为自制高纯水，其余试剂均为分析纯。
样品：华海乙肝泡腾颗粒，以选定的药材组合方式提取[1]、干燥、制备。
2 方法与结果
2.1 对照液的制备取五味子乙素对照品适量，精密称定，以甲醇配成0.212mg·ml-1的溶液作为对照液。
2.2 样品液的制备取华海乙肝泡腾颗粒剂适量，研细，精密称取5g，加硅藻土3g拌匀，用无水乙醇150ml于索氏提取器中回流提取6h，挥干溶剂，加水10ml溶解，以乙醚萃取(20ml×3)，取水层，以正丁醇萃取(20ml×3)，合并正丁醇液，用5%碳酸氢钠溶液(10ml×2)和蒸馏水(10ml)洗涤，取正丁醇层，挥干，残渣以水5ml溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，依此以水100ml洗脱，弃去，30%乙醇30ml洗脱，弃去，70%乙醇50ml洗脱，收集，挥干，用甲醇溶解并定容至5ml，作为成品供试液。同法制得成品缺五味子阴性供试液、辅料供试液。
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称取10~20目的五味子粗粉，浸泡30min后，用“SBE法[2，3]”分别煎提3次(加水量为药材重量的9，6，6倍，煎煮2.0，1.0，0.5h，水的pH值为2.0，6.5，8.5)[4]，分别滤过，离心，上清液浓缩，合并浓缩液，定容于100 ml容量瓶中。吸取该样品液10.0mI，加入硅藻土3.0g，拌匀，蒸干，以无水乙醇150 mI索氏回流提取9h，蒸干，用甲醇溶解并定容于25ml容量瓶中，得五味子药材供试液。
2.3 薄层定性
2.3.1 层析条件 取硅胶GF254与0.3%CMC-Na溶液(1：3)研匀，用涂布器铺成20cm×20cm的薄层板，自然干燥，备用。展开剂：石油醚乙酸乙酯甲酸(15：3：1)。
2.3.2 薄层定性 将以上4种供试液及五味子乙素对照液点在同一块薄层板上，按2.3.1项下条件上行展开15cm，取出晾干，于254nm紫外灯下观察，结果见图1。在与五味子乙素对照品相应的位置上，成品、五味子药材呈紫色斑点。成品缺五味子阴性供试液及辅料无此斑点。2.4五味子乙素的含量测定
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2.4.1 色谱条件 流动相：甲醇—水(78：22)；流速1.0ml/min，检测波长254nm。进样量供试液、对照液均为20μl。
2.4.2 空白干扰试验 取五味子乙素对照液及成品供试液、成品缺五味子阴性供试液、五味子供试液，按2.4.1项下条件测定，结果见图2，在与五味子乙素对应的保留时间，成品供试液、五味子供试液有吸收峰，而成品缺五味子供试液无吸收峰。
2.4.3 线性关系考察 分别取五味子乙素对照液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于1ml容量瓶中，加甲醇定容，按2.4.1项下条件测定，以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，结果其回归方程为：
Y=1.687×103+6.385×104X r=0.9999 (n=5)
表明五味子乙素在0.848~4.240μg范围内线性关系良好。
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2.4.4 精密度考察 取五味子乙素对照液，按2.4.1项下的条件进样，共进样6次，测定五味子乙素的峰面积积分值，结果RSD为1.62%(n=6)，表明精密度良好。
2.4.5 稳定性试验取成品供试液，分别放置0、2、4、6、8、10小时，依法测定样品中五味子乙素峰面积积分值，结果RSD=1.75%，吸收度在10h内稳定。
2.4.6 重复性试验 取同一批成品5g，精密称定，平行称取6份，按成品供试液制备方法制备试液，依法测定各样品中五味子乙素的含量。结果RSD=169%。
2.4.7 五味子乙素的含量测定取成品供试液，依法测定成品中五味子乙素的含量，结果见表1，其95%置信区间为：0.03210~0.04170mg/g，规定含量不得小于0.003%。
2.4.8 回收率试验取已知含量的成品约2.5g，精密称定，共称5份，各加入五味子乙素对照液0.106mg，按成品供试液制备方法制备试液，依法测定各样品中五味子乙素的含量，计算回收率，结果见表2。
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3 小结与讨论
3.1 本文采用高效液相法测定华海乙肝泡腾颗粒剂中五味子乙素的含量，此法简便、重现性好，平均回收率为98.19%。
3.2 华海乙肝泡腾颗粒剂由黄芪、柴胡、虎杖、五味子等组成。诸药配伍，具有清热利湿，解毒祛邪，滋阴助阳，疏肝解郁之功效。用于乙型肝炎的治疗。从药理研究来看，黄芪对机体免疫功能有显著的促进和调节作用，有诱生干扰素作用，虎杖能抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性，柴胡具有保护肝细胞损伤和促进肝脏中脂质代谢作用。五味子具有抗肝脏损伤和诱导药物代谢酶的作用。五味子中五味子乙素可明显促进肝细胞滑面内质网增生，可作为控制华海乙肝泡腾颗粒剂质量的一个指标[5]。
参 考 文 献
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1 王秀冬，张兆旺，孙秀梅，等.华海乙肝方S B E法提取药材组合方式的优选.中国中药杂志.2000；25(10)：601
2 张兆旺，孙秀梅.试论“半仿生提取法”制备中药口服制剂，中国中药杂志.1995；20(11)：670
3 张瑞亭，张兆旺，孙秀梅.思维方式的转换与半仿生提取法.中国中药杂志.1997；22(9)：542
4 吕青涛，张兆旺，孙秀梅，等.乙肝颗粒剂4种提取方法提取液的成分比较.中成药.2000；22(11)：752
5 阴健，郭力弓.中药现代研究与临床应用北京第一版：学苑出版社，1995, http://www.100md.com