正交设计法研究丹参红花注射液最佳精制工艺
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前卫药学杂志
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正交设计法研究丹参红花注射液最佳精制工艺
申庆亮 谢瑞金
(91医院 兖州272100)
摘要 目的：研究丹参红花注射液最佳精制工艺。方法：浓缩程度、含醇量、加醇次数及醇液的pH值4个因素，每个因素3个水平。选择L9(34)正交表，用高效液相色谱法测定原儿茶醛含量，比色法测定总黄酮含量作为综合评价指标。结果：影响因素的大小顺序为C>A>D>B，最佳方案为A1B2C1D2。结论：最佳精制工艺为：将经60%乙醇处理后的药液继续浓缩至1∶2，在100℃下边加边搅拌，加乙醇使含醇量达80%，调pH5，放置48h，过滤，回收乙醇，加水至全量。
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关键词 正交设计；丹参红花注射液；原儿茶醛；总黄酮；精制工艺
丹参红花注射液是由丹参、红花等中药组成。经提取、精制后制备成静脉注射剂，具有活血化瘀，通络止痛作用，用于治疗中风(缺血性脑血检形成)的治疗和预防。为了提高药品的质量，在用正交设计法研究其最佳提取工艺的基础上，进一步用正交设计法研究其最佳精制工艺。
1 实验材料
1.1 丹参、红花，符合中国药典2000年版一部有关规定，山东临沂地区产品。
1.2 芦丁化学对照品，中国药品生物制品检定所提供。
1.3 原儿茶醛化学对照品，中国药品生物制品检定所提供。
1.4 紫外分光光度计：HP8453，美国惠普公司。
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1.5 高效液相色谱仪：HP1100，美国惠普公司。
2 正交设计
2.1 因素—水平的确定：本项研究重点考察：提取液浓缩的程度、用乙醇的量，加醇次数，醇溶液pH值4个因素，每个因素选择3个水平。列因素水平如表1。
2.2 正交设计：本项研究选择L9(34)正交表，具体实施方案如表2。
3 实验方法
3.1 样品的制备：按处方1000ml量投料，加12倍量pH9的水煎煮3次，每次1h，过滤，合并滤液，常压浓缩至1000ml，等分为10份，每份100ml。分别按正交表中要求，分别深缩至规定的深度，加乙醇使含醇量达规定的深度，调节至规定的pH值，静置48h，过滤，回收乙醇，加水至100ml,pH7,静置48h以上，过滤，加0.5%活性炭及0.7g氯化钠，煮沸10min，滤过，备用。
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3.2 原儿茶醛含量的测定：高效液相色谱法测定原儿茶醛含量测定条件：流动相：1%乙酸—乙腈(388∶12)；检测波长λ=280nm；流速1.5ml/min。
标准溶液制备：取原儿茶醛对照品73mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密吸取2ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度。吸取20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
样品测定：精密吸取丹参红花注射液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。吸取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
3.3 总黄酮的测定
对照品溶液的配制：精密称取干燥至恒重的芦丁对照品10.45mg，加50%乙醇溶解并定容至50ml，每ml含无水芦丁0.209mg。
标准曲线的绘制精密吸取芦丁对照品溶液1、2、3、4、5、6ml，分别置25ml量瓶中，加水至6ml，加1ml5%亚硝酸钠溶液。放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，用水6ml同法作空白在500nm波长处测定吸收度。以浓度对吸收度绘制标准曲线。
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供试品溶液的制备：精密吸取样品1ml，置10ml容量瓶中。加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法：精密取供试品溶液1ml，自标准曲线项下“置25ml量瓶中……”起，依法测定。
4 结果
原儿茶醛含量及总黄酮含量测定结果见表2。
5 结果分析
根据极差R，各因素影响大小顺序为B>C>A>D。即含醇量B为主要因素，在精制工艺中应严格控制。其次分别为醇沉时的pH值，浓缩程度及加醇时的温度，加醇温度影响不大。结合K值，最佳方案应为B2C1AQID3。
6 结论
最佳工艺为：取上药二味，加10倍量水煎煮3次，每次1小时，过滤，浓缩至1：0.5，加乙醇使含醇量达80%，静置48小时，过滤，回收乙醇，加注射用水至全量，调pH7，115℃灭菌35分钟，静置10天，滤过，加0.7%氯化钠，加0.5%活性炭，煮沸15min，过滤，加注射用水至全量，分装115℃灭菌35分钟，即得。
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7 讨论
7.1 丹参红花注射液主要成分为丹参，质量标准中主要控制丹参中原儿茶醛的含量。因此，全部研究中重点保证原儿茶醛的存在。在评价指标中，以原儿茶醛为重点。
7.2 本新药含量测定方法为高效液相色谱法测定原儿茶醛含量，但是在研究制备工艺时，暂时应用薄层—紫外分光光度法测定原儿茶醛含量的方法。
7.3 丹参红花注射液主要作用为活血化瘀，消炎止痛。而多糖在本制剂中没有此样作用，为保证制剂的质量，应尽量减少多糖的存在。以提高其内在的外观的质量。但在实验过程中也发现，多糖与原儿茶醛含量有一定的关系，即多糖除尽或基本除尽时，原儿茶醛含量也相应较低，因此，不宜一味追求多糖的除尽。, 百拇医药