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编号:10496763
替硝唑洗液的抗厌氧菌活性及对人阴道滴虫的杀灭作用
http://www.100md.com 《中国现代应用药学》 2000年第2期
     作者:周国林 姚全胜 许晖

    单位:江苏省药物研究所 南京 210009

    关键词:替硝唑;厌氧菌;抗菌活性

    中国现代应用药学000227 摘要 目的:观察替硝唑洗液的抗厌氧菌活性及对人阴道滴虫的杀灭作 用。方法:采用肉汤试管稀释法测定抗厌氧菌的MIC及MBC;采用家兔阴 道感染人阴道滴虫的模型,观察其抗阴道毛滴虫的作用。结果:替硝唑 洗液对200株厌氧菌(除乳杆菌、直杆菌外)均有较好的抗菌活性,其MIC50均在2mg/L 以下,MIC90略高(16mg/L),MBC约为MIC的4~16倍。替硝唑洗液阴道内直接给药和阴 道内冲洗,5mg/kg以上对阴道毛滴虫具有明显的杀灭作用,20mg/kg达痊愈。结 论:替硝唑洗液具有明显的抗厌氧菌活性,且对人阴道毛滴虫具有很好的杀灭作用 ,其杀灭滴虫的作用强度优于碧洁洗液。
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    Antibacterial activity of tinidazole lotion and its effect on trichomon as vaginalis in vitro and in vivo

    Zhou Guolin(Zhou GL),Yao Quansheng(Yao QS),Xu Hui(Xu H)

    ( Jiangsu Institute of Materia Medica,Nanjing 210009)

    ABSTRACT OBJECTIVE:To study the inhibitory activity ag ainst anaerobic bacteria in vitro and the effect of tinidazole lotion on trichom onas vaginalis in vivo.METHODS:The minimum inhibitory concentration( MIC) and the minimum bactericidal concentration(MBC) of tinidazole lotion were m easured using tube culture test in vitro.In vivo effect of tinidazole lotion on trichomonas vaginalis were studied with the model of trichomonas vaginalis in ra bbits.RESULTS:Tinidazole lotion was active against 200 clinical isol ates of anaerobic bacteria in vitro.The MIC50 of tinidazole lotion was les s than 2mg/L,the MIC90 was 16mg/L,and MBC value was 4~16 folds of the MIC .Administration of tinidazole lotion(20mg/kg) to vaginalis directly was shown to be 100% effective for the treatment of trichomonas vaginalis in rabbits.C ONCLUSION:Tinidazole lotion is active in vitro against most of the anaerob ic bacteria and the effect of tinidazole lotion on trichomonas vaginalis in vivo is superior than Bijie lotion.
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    KEY WORDS tinidazole lotion,anaerobic bacteria,antibacterial activi ty

    替硝唑是一种较强的抗厌氧菌和抗原虫感染药,临床上口服治疗厌氧 菌感染及原虫感染的疾病。替硝唑洗液为我所研制的一种用于腔道冲洗和外生殖器炎症等疾 病的外用药物。本实验主要观察其体外抗厌氧菌活性及对滴虫的杀灭作用,并与市售药品碧 洁洗液相比较。

    1 实验材料

    1.1 药物

    替硝唑洗 液(江苏省药物研究所,含量为1%,批号:960409);甲硝唑(江苏省药物研究所制剂室,含 量为1%);甲硝唑注射液(南京小营制药厂,批号:950115-2)。以上药物均在无菌条件下, 以无菌生理盐水稀释成一定浓度,待用。碧洁洗液(复方洗必泰洗液,含洗必泰1.2‰,甲硝 唑0.2‰,深圳南粤药业有限公司,批号:951104)。
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    1.2 动物

    新西兰白兔,雌性,体重(2.2±0.3)kg(江苏省药物研究所动物室,合格证号:苏动质95038 )。

    1.3 实验虫种

    由药科大学微生物教研室从临床滴虫性阴道炎患者 的阴道分泌物中分离提供。

    1.4 实验菌株

    菌株均由临床标本分离, 并严格按文献[1,2]进行种属鉴定。

    菌液准备:以接种环在纯培养GAM平皿上挑取 一定量具有相同形态的待检菌菌落种入GAM肉汤中,35℃厌氧培养至轻度混浊,以无菌生理盐 水(预除氧)调节其浊度,使之相当于0.5号MC Farland比浊管,再以肉汤1∶200稀释后备用 。
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    2 实验方法

    2.1 体外抗厌氧菌实验

    MIC和MBC 测定均采用肉汤试管稀释法。

    以GAM肉汤在试管中分别将替硝唑和甲硝唑药液倍比稀释成 不同浓度,溶媒1∶8稀释,均加入等体积1∶200稀释之菌液,35℃厌氧培养72h后读取MIC值 。自未见生长的各管中各取0.1ml接种于GAM平皿上厌氧培养,以菌落数小于5的药浓度为MBC 值。每一菌在测定MIC时,均设无菌肉汤对照,并划一平皿,以观察无药时实验菌的生长情 况及是否被污染。

    2.2 体内抗滴虫实验[3]

    2.2.1 兔滴虫感染 接种滴虫前,用pH 6.5的PBS液冲洗家兔阴道,每日 1次,连续3d。将分离后的滴虫稀释至105/ml浓度,内含小牛血清10%,以0.1ml/只接种到 兔阴道后穹窿部,每日1次,连续3d。于接种第4天作阴道涂片检查,阳性兔备用。
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    2.2.2 分组与实验方法 按阴道内直接给药和阴道内冲洗2种方法分 组,阴道内直接给药按2ml/kg药液挤入阴道,药液几乎不流出阴道。阴道内冲洗按10ml/k g药液注入阴道,部分药液流出阴道。将感染滴虫后的阳性兔随机分为阴道内直接给药和 阴道内冲洗二部分,阴道内直接给药分为替硝唑洗液组、甲硝唑组和空白对照组(溶媒)。阴 道内冲洗分为替硝唑洗液组、碧洁洗液组和空白对照组(溶媒),每组6只。每天阴道给药或 冲洗1次,连续7d。于给药后3、7d和停药后3d分别作阴道涂片检查,判定疗效。

    2.2.3 阴道涂片检查评分标准:以镜下(6.3×40倍)视野中的虫数为评分 依据。0:无虫体(痊愈);1:1~20个虫体;2:21~40个虫体;3:41~80个虫体;4:81个 虫体以上。按各组的积分,经统计学处理,判定疗效。

    3 实验结果

    3.1 体外抗厌氧菌的作用
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    3.1.1 200株实验菌的MIC值见表1。

    表1 替硝唑洗液对200株实验菌的MIC结果

    实验菌

    株数

    药物

    MIC/mg.L-1

    MIC50

    MIC90

    范围

    消化链球菌

    40
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    T

    0.5

    2.0

    0.25~4.0

    M

    1.0

    4.0

    0.5~4.0

    囊荣氏球菌

    20

    T

    1.0

    2.0
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    0.12~2.0

    M

    2.0

    4.0

    0.25~4.0

    消化球菌

    20

    T

    0.5

    2.0

    0.12~2.0

    M

    1.0
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    4.0

    0.5~4.0

    真杆菌

    40

    T

    2.0

    16.0

    0.25~32.0

    M

    4.0

    32.0

    0.5~64.0

    拟杆菌
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    30

    T

    0.5

    1.0

    0.12~2.0

    M

    1.0

    4.0

    0.25~4.0

    梭杆菌

    30

    T

    0.5
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    1.0

    0.12~2.0

    M

    1.0

    4.0

    0.25~4.0

    乳杆菌

    20

    T

    128

    >128

    32~>128

    M
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    128

    >128

    64~>128

    注:T-替硝唑洗液;M-甲硝唑注射液

    表1结果表明,替硝唑洗液对所选实验菌(乳杆菌、真杆菌除外)均有较好的抗菌活性,其MIC 50皆在2mg/L以下。对于真杆菌,替硝唑的抗菌活性变化较大,MIC变动于0.25~32mg/ L之间,MIC50较低(2mg/L,MIC90略高(16mg/L)。替硝唑对乳杆菌的抗菌活性较 差。

    3.1.2 100株实验菌的MIC和MBC值见表2。

    表2 替硝唑洗液对100株实验菌的MIC与MBC结果
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    实验菌

    株数

    MIC/mg.L-1

    MBC/mg.L-1

    MIC50

    MIV90

    范围

    MIC50

    MIC90

    范围

    消化链球菌
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    22

    0.5

    1.0

    0.25~1.0

    4.0

    8.0

    2.0~8.0

    囊荣氏球菌

    16

    1.0

    1.0

    0.12~1.0

    4.0
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    8.0

    2.0~8.0

    消化球菌

    11

    0.5

    0.5

    0.12~0.5

    4.0

    8.0

    2.0~8.0

    真杆菌

    16

    1.0
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    1.0

    0.25~1.0

    8.0

    16.0

    2.0~16.0

    拟杆菌

    18

    0.5

    0.5

    0.12~0.5

    4.0

    8.0

    1.0~8.0
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    梭杆菌

    17

    0.5

    0.5

    0.12~0.5

    4.0

    8.0

    2.0~8.0

    表2结果表明,替硝唑的MBC约为MIC的4~16倍。

    3.2 体内抗阴道毛滴虫的作用

    实验期间,家兔毛色光滑,进食正常, 各组动物体重增加0.2~0.5kg,给药前后无异常变化。实验结果见表3,4。
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    表3 替硝唑洗液阴道内直接给药对阴道滴虫的灭杀 作用/±s,n=6 组 别

    剂量/

    mg.kg-1

    积 分

    给药后3d

    给药后7d

    停药后3d

    替硝唑洗液

    20

    1.00±0.63

    0 .33±0.52*1
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    0*1

    10

    1.33±0.52

    1.17±0.75*2

    0.67±0.82*1

    5

    1.50±0.55

    1.50±0.55*2

    1.67±0.82*2

    甲硝唑

    20
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    1.33±0.52

    0.83±0.75*2

    0.67±0.82*2

    对照组

    -

    1.83±0.75

    2.50±0.84

    3.17±0.75

    注:与对照组比较,*1P<0.01,*2P<0.05;替硝唑洗液 与甲硝唑比较,P>0.05

    表4 替硝唑洗液阴道内冲洗对阴道滴虫的杀灭作用/±s,n=6 组 别
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    剂 量/

    mg.kg-1

    积 分

    给药后3d

    给药后7d

    停药后3d

    替硝唑洗液

    10.0

    1.17±0.75

    0.50 ±0.55*1

    0.33±0.52*1,*2
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    5.0

    1.33±0.52

    0.83±0.75*1

    0.67±0.82*1,*2

    2.5

    1.50±0.55

    1.17±0.75*3

    1.50±0.55*3

    碧洁洗液

    A2+B12

    1.50±0.50
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    1.50±0.55*3

    1.33±0.52 *3

    对照组

    1.75±0.50

    2.50±1.05

    3.00±0.89

    注:A2为甲硝唑2mg/kg;B12为洗必泰12mg/kg;与对照组比较,*1P<0.01,*3P<0.05;替硝唑洗液与碧洁组比较,*2P<0.05

    表3结果表明,各用药组阴道给药3d后即出现明显疗效。采用阴道直接给药,替硝唑洗液(20 mg/kg)组,阴道给药后7d和停药后3d,阴道涂片结果达痊愈,积分与对照组相比,经统计学 处理,差异非常显著(P<0.01)。替硝唑洗液(10mg/kg)组和替硝唑洗液(5 mg/kg)组也具有较好的治疗效果,经统计学处理,差异显著(P<0.05)。甲硝 唑与替硝唑洗液结果相似,替硝唑稍优于甲硝唑。
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    表4结果表明,将原液稀释冲洗,替硝唑洗液(10和5mg/kg)组具有较好的杀滴虫效果( P<0.01),替硝唑洗液(2.5mg/kg)组的杀滴虫效果与碧洁洗液相似。替硝唑洗液5mg/ kg以上浓度的杀滴虫效果优于碧洁洗液。

    4 讨 论

    本实验采用肉汤试管稀释法测定了200株厌氧菌的MIC和100株厌氧菌的MIC和MBC。结果表明 ,替硝唑洗液对所选实验菌(乳杆菌、真杆菌除外)均有较好的抗菌活性,研究所选实验菌均 来自临床标本,为临床常见的致病菌,有一定代表性。替硝唑对乳杆菌的抗菌活性较差,这 正好符合临床要求,因为乳杆菌是阴道中的主要正常菌,在阴道中非但不致病,并有抑制其 他致病菌生长的作用。替硝唑的MIC较甲硝唑低1~2个滴度,说明替硝唑对厌氧菌的抗菌活 性高于甲硝唑。

    采用人阴道毛滴虫感染家兔的实验方法,观察了替硝唑洗液的治疗效果。 实验结果表明,替硝唑洗液对阴道毛滴虫具有明显的治疗效果。碧洁洗液也具有一定杀滴虫 效果,但替硝唑洗液的杀滴虫效果优于碧洁洗液,这可能与碧洁洗液中甲硝唑含量较低有关 。
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    替硝唑是继甲硝唑后研制的硝基咪唑类抗厌氧菌及抗原虫药物,为甲硝唑的同系物,其 药理作用与甲硝唑类似,但替硝唑具有疗效更高,疗程更短,耐受性更好,体内分布更广, 副作用少而轻等特点。替硝唑洗液为水溶液制剂,并加入适量增稠剂使溶液具有一定的粘稠 性,容易粘附和分散在阴道粘膜表面,直接与病灶的病原体接触,从而发挥杀灭作用,适用 于妇女滴虫性及厌氧菌感染引起的阴道炎。

    替硝唑洗液的抗厌氧菌效果优于甲硝唑,其抗 阴道滴虫的效果优于碧洁洗液,对临床应用具有很好的推广价值。

    参考文献

    1,李仲兴,郑家齐,李家宏,等.诊断细菌学.香港:黄河 文化出版社,1992∶472.

    2,Balows A.Manual of clinical microbiology sth ed,a merican society formicrobiology.Washington D.C.,1991∶488.

    3,徐叔云,卞如濂,陈修主编.药理实验方法学.第2版.北 京:人民出版社,1994∶1326.

    收稿日期:1999-04-08, 百拇医药