鲨骨粉抗癌增效及调节免疫功能的研究
作者：王劲 杨锋 张建雄 沈翔 戴关海 周志平
单位：张建雄(浙江海力生制药公司)；王劲 杨锋 张建雄 沈翔 戴关海 周志平(浙江省中医药研究院基础所 杭州 310007)
关键词：鲨鱼软骨，抗癌增效，免疫功能
中国海洋药物000205
摘要 根据祖国医学对鲨鱼药用功效记载，结合现代对鲨鱼软骨的认识，本项研究探讨了鲨鱼软骨抗癌增效及调节免疫功能的作用。结果表明：鲨鱼软骨可明显提高荷瘤小鼠的NK细胞活性和Mψ细胞的吞噬功能。鲨鱼软骨粉与化疗药物(CTX、5Fu、ADM)合用，抗肿瘤(S180、Lewis肺癌)的增效率可达22.8%～47.9%；与放疗(50Co照射)合用，抗肿瘤增效率为15.20%～26.50%，证实鲨鱼软骨具有较好的扶正(提高免疫功能)作用和明显的抗癌增效作用。
, 百拇医药
THE RESEARCH ON ANTICARCINOGENOSIS AND IMMUNOLOGIC REGULATION OF SHARK CHONDRIC POWDER
Wang Jing,Yang Feng, Zhang Jinangxiong ,et al.
(Zhejing Academy of TCM,Hangzhou 310007)
ABSTRACT The experiment has been explored on anticarcinogenosis and immunologic regulation of shark ehondrie powder,according to TCM pharmaceutic records on shark and modern recognitions on shark chondric powder.Result:Shark chondric powder can obviously increase NK activity of bearing-tumor mice and Mψ endocytosis.The effective rate of anticarcinogenosis (S180 Lewis Lung cancer)is 22.8%-47.9%,administered shark chondric powder and chemical drugs (CTX,5-Fu,ADM).The effective rate of anticarcinogenosis is 15.20%-26.50%,administered shark chondric powder and radiation.It has proved better improving immunologic system and anticarcinogenosis.
, http://www.100md.com
KEY WORDS Shark chondric powder,Anticarcinogenosis,Immunologic regulation
国内外研究表明，鲨鱼软骨中含有新生血管生成抑制因子，以及丰富的粘多糖、蛋白质、氨基酸等，能直接产生生物反应调节效应的物质，不仅能抗肿瘤，且能减轻放疗、化疗的副作用[1～3]。其实我国是世界上最早的对鲨鱼开发应用的国家，依托传统中医中药，积累了丰富的药用经验，在历代本草专著中有不少记载。如明.《本草纲目》记载：“鲛鱼(唐本草)，释名沙鱼……肉：气味甘平，无毒。主治：作鱼 会，补五脏……甚益人”[4]。《本草纲目拾遗》记载沙刺片：“味甘性平，补五脏，消鱼积，解蛊毒。益气开膈，托毒，长腰力。消痰，开胃进食”[5]。沙刺片即鲨鱼翅，是鲨鱼软骨的一部分，一直作为名贵菜肴和高档滋补品。由此可见：鲨鱼软骨具有补五脏，益气，长腰力(肾主腰)，开胃进食等扶正作用；还具有托毒、消痰祛邪作用，即有“扶正不留邪，祛邪不伤正”功能特点，不仅适用于本虚标实的癌症，又恰好弥补肿瘤放、化疗“敌我不分”之弊端，而达到增效目的。我们临床观察30例中晚期癌症病人，也发现口服鲨骨粉能提高全身状况，改善生活质量，部分病例NK细胞活性增高；与化、放疗合用能减轻毒、副反应，增效作用较为明显。为了合理、充分地开发利用鲨鱼资源，进行鲨鱼软骨粉抗癌增效及调节免疫功能的研究，现报告如下：
, http://www.100md.com
1 实验材料
1.1 动物：ICR种小鼠，体重18～22g，雌性，由本院实验动物室提供。C57BL/6J纯种小鼠，体重18～22g，雌性，由中国科学院上海实验动物中心提供。S180、Lewis肺癌等瘤株均由中国科学院上海药物研究所引进。
1.2 药物：采用姥鲨科姥鲨Cotrhinus maximas(Gunner)、鲸鲨科鲸鲨Rhincodon typus (Smith)、鲭鲨科噬人鲨Carcharodon carcharias(Linnaeus)、大型鲨鱼的内骨骼，经冷冻、粉碎、干燥，60Co灭菌，由浙江海力生制药公司提供。环磷酰胺(CTX)，上海华联制药公司产，批号960309；氟尿嘧啶(5-Fu)，南通制药总厂产，批号960524；盐酸阿霉素(ADM)，浙江海门制药厂产，批号970503。
2 方法与结果
, 百拇医药
2.1 抗癌增效作用研究
2.1.1 与环磷酰胺合用的增效作用
2.1.1.1 对S180肉瘤生长的影响
取ICR种小鼠，雌性，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重。除水对照组外，其余动物均在接种肿瘤第2、6d腹腔注射CTX 30mg/kg。接种瘤种次日灌胃鲨骨粉，剂量分别为1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药10d。停药次日称体重，处死小鼠，并剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。
结果见表1。
表1 鲨骨粉对CTX抗S180肿瘤的增效作用(±s) 组 别
, http://www.100md.com
例数
(只)
瘤
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉1.125g/kg+CTX 30mg/kg×2
鲨骨粉2.25g/kg+CTX 30mg/kg×2
CTX 30mg/kg×2+水
水对照
, 百拇医药
10
10
10
10
1.56±0.67
1.45±0.41**
2.02±0.58
2.99±0.81**
47.80
51.50
32.40
-
, 百拇医药
22.78
28.22
-
-
**表示与CTX+水组比较P<0.01。
由表1可见，鲨骨粉1.125g/kg和2.25g/kg剂量可使CTX抗S180肿瘤的作用，分别增效22.8%、28.22%(P<0.01)。
2.1.1.2 对Lewis肺癌生长的影响
取C57BL/6J纯种小鼠，雌性，均皮下接种Lewis肺癌悬液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重，除水对照组外，其余动物均在接种种瘤第2、6、10d腹腔注射CTX30mg/kg。接种肿瘤次日灌胃鲨骨粉，剂量为1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药15d，停药次日称体重，处死小鼠，并剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。结果见表2。
, 百拇医药
表2 鲨骨粉对CTX抗Lewis肺癌的增效作用(±s) 组 别
例数
(只)
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉1.25g/kg+CTX 30mg/kg ×3
鲨骨粉2.25g/kg+CTX 30mg/kg×3
, http://www.100md.com CTX 30mg/kg×3+水
水对照
10
10
10
10
0.96±0.67
1.02±0.54
1.38±0.42
2.12±0.54**
54.48
51.70
, http://www.100md.com
34.91
-
30.12
25.85
-
-
**表示与CTX+水组比较P<0.01。
由表2可见，鲨骨粉各剂量组可使CTX抗Lewis肺癌作用增效25.85%～30.12%。
2.1.2 与5-氟尿嘧啶合用的增效作用。
2.1.2.1 对S180肉瘤生长的影响
取ICR种小鼠，雌性，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重。除水对照组外，其余各组动物均在第2d腹腔注射5-Fu 60mg/kg。接种肿瘤次日灌骨鲨骨粉，剂量为1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药10d，停药次日称体重，处死小鼠，并剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。结果见表3。
, 百拇医药
表3 鲨骨粉对5-Fu抗S180肿瘤的增效作用(±s) 组 别
例数
(只)
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉1.125g/kg+5Fu 60mg/kg
鲨鱼粉2.25g/kg+5Fu 60mg/kg
, 百拇医药
5-Fu 60mg/kg+水
水对照
10
10
10
10
0.60±0.25
0.59±0.30
0.99±0.34
1.90±0.73
68.42
68.47
, 百拇医药
47.63
-
39.70
39.80
-
-
*、**表示与5-Fu+水组比较P<0.05、P<0.01
由表3可见鲨骨粉各剂量组具有增效5Fu抗S180肿瘤的作用，其增效率分别提高39.7%和39.8%，与5-Fu+水组比较有显著性差异(P<0.05)
2.1.2.2 对Lewis肺癌生长的影响
取C57BL/6J纯种小鼠，雌性，均皮下接种Lewis肺癌悬液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重。除水对照组外，其余各组动物均在接种肿瘤第2d腹腔注射5Fu 60mg/kg。接种肿瘤次日灌胃鲨骨粉，剂量为1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药14d，停药次日称体重，处死小鼠，并剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。结果见表4。
, 百拇医药
表4 鲨骨粉对5Fu抗Lewis肺癌的增效作用(±s) 组 别
例数
(只)
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉1.125g/kg+5Fu 60mg/kg
鲨骨粉2.25g/kg+5Fu 60mg/kg
5-Fu 60mg/kg+水
, http://www.100md.com
水对照
10
10
10
10
0.66±0.37
0.74±0.47
1.04±0.52
2.12±0.54**
67.30
63.40
49.00
, http://www.100md.com
-
35.59
28.16
-
-
**表示与5-Fu+水组比较P<0.01。
由表4可见，鲨骨粉各剂量均可提高5Fu抗Lewis肺癌的作用，增效率分别提高35.59%和28.16%。
2.1.3 与阿霉素(adriamycin)合用的增效作用。
取ICR种小鼠，雌性，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重。除水对照组外，其余各组动物均在第2d腹腔注射ADM 8mg/kg。接种肿瘤次日灌胃鲨骨粉，剂量为1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药10d，停药次日称体重，处死动物，剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。结果见表5。
, http://www.100md.com
表5 鲨骨粉对阿霉素抗S180肿瘤的增效作用(±s) 组 别
例数
(只)
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉1.125g/kg+ADM 8mg/kg
鲨骨粉2.25g/kg+ADM 8mg/kg
, 百拇医药 ADM 8mg/kg+水
水对照
10
10
10
10
1.12±0.56
0.98±0.38
1.88±0.97
2.46±0.77
54.50
60.20
, http://www.100md.com
23.50
-
40.40
47.90
-
-
注：*表示与ADM+水组比较P<0.05。
由表5可见，鲨骨粉各剂量均可提高ADM抗S180肿瘤的作用，增效率分别提高40.40%和47.90%(P<0.05)。
2.1.4 对放疗的增效作用
取ICR小鼠，雌性，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重。除水对照组外，其余各组动物均在接种第3、6d用60Co全身照射，照射剂量为0.05Gy(剂量率0.5Gy.min-1)。接种瘤种次日灌胃鲨骨粉，剂量为0.55g/kg、1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药10d，停药次日称体重，处死动物，剥皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。结果见表6。
, 百拇医药
表6 鲨骨粉对放疗的增效作用(±s) 组 别
例数
(只)
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉0.55g/kg+60Co×2
鲨骨粉1.125g/kg+60Co×2
鲨骨粉2.25g/kg+60Co×2
, http://www.100md.com
60 Co++水
水对照
12
12
12
12
12
2.28±0.62
2.35±0.71
2.03±0.55
2.77±0.46
2.94±0.10
, 百拇医药
22.30
20.10
30.70
5.80
-
17.50
15.20
26.50
-
-
*、**表示与60Co+水组比较P<0.05、P<0.01。
由表6可见，鲨骨粉对60Co放疗抗肿瘤有明显的增效作用(P<0.05、0.01)。
, 百拇医药
2.2 调节免疫功能的研究
2.2.1 对体液免疫的影响
取ICR小鼠60只，其中48只皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分四组，并称重，每组12只，第1～2组分别灌胃鲨骨粉1.125g/kg和2.25g/kg，第3组灌胃蒸馏水并在实验第3、6天腹腔注射CTX 0.1g/kg,第4组灌胃蒸馏水，第5组为正常对照组。连续给药10d，在给药第6d，第1～5组动物均腹腔注射羊红细胞悬液0.2ml致敏，致敏后第4日，摘眼球取血，取同组各鼠血清于同一试管内，用生理盐水做对倍稀释，成为1∶25、1∶50、1∶100、1∶400和1∶800稀释血清。然后在各稀释血清中加10%绵羊红细胞悬液0.5ml和1∶10稀释的豚鼠血清1ml。另设不加补体而以生理盐水代替的空白管，各管37℃ 30分钟后进行血红蛋白测定，结果以HC50表示。结果见表7。
, http://www.100md.com
表7 鲨骨粉对荷瘤小鼠血清溶血素的影响 组 别
例数
平均HC50(±s)
P值
鲨骨粉1.125g/kg
鲨骨粉2.25g/kg
CTX 100mg/kg×2
水对照组
正常对照组
12
12
12
, 百拇医药
12
12
22.10±2.26
22.01±2.39
12.30±2.11
19.01±2.53
23.96±3.70
>0.05
>0.05
<0.01
-
<0.05
, http://www.100md.com
*P值为各组与水对照组比较。
由表7可见，鲨骨粉各剂量对荷瘤小鼠的HC50有所提高，但作用不显著(P>0.05)。
2.2.2 对细胞免疫的影响
动物瘤株接种、分组、给药均同前，连续给药10d，终止给药后次日，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾脏，制成细胞悬液，进行淋巴细胞转化功能测定，测定方法采用ConA诱导的3H-TdR掺入法，结果见表8。
表8 鲨骨粉对S180实体瘤小鼠淋巴细胞转化功能的影响 组 别
例数
平均CPM(±s)
P值
, http://www.100md.com
鲨骨粉1.125g/kg
鲨骨粉2.25g/kg
CTX 100mg/kg×2
水对照组
正常对照组
12
12
12
12
12
39957±13952
36234±18806
, http://www.100md.com
27922±19974
35022±18925
57049±22529
>0.05
>0.05
>0.05
-
<0.01
*P值为各组与水对照组比较。
由表8可见，鲨骨粉各剂量组的CPM值与水对照组比较有所上升，但作用不显著(P>0.05)。
2.2.3 对NK细胞活性的影响。
, 百拇医药
动物肿瘤接种、分线、给药均同前，给药终止后次日，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾脏，制成细胞悬液，进行NK细胞活性测定，测定方法采用YAC-1为靶细胞的3H-TdR前标法。结果见表9。
表9 鲨骨粉对S180实体瘤小鼠NK细胞活性的影响(±s) 组 别
例数
平均HC50(±s)
P值
鲨骨粉1.125g/kg
鲨骨粉2.25g/kg
CTX 100mg/kg×2
水对照组
, 百拇医药
正常对照组
12
12
12
12
12
25.55±7.55
22.01±10.73
8.00±4.45
11.50±4.80
26.00±5.08
<0.01
, http://www.100md.com <0.01
>0.05
-
<0.01
*P值为各组与水对照组比较。
由表9可见，鲨骨粉各剂量组的CI%值均明显高于水对照组(P<0.01)。
2.2.4 对非特异性免疫功能—吞噬功能的影响。
动物肿瘤接种、分组、给药均同前，末次给药后1h，每鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.5ml，间隔8h，处死动物，腹腔注入生理盐水2ml，轻揉1min后吸出洗液1ml，分滴于载玻片上，固定、染色后进行吞噬百分率计数。结果见表10。
表10 鲨骨粉对S180实体瘤小鼠腹腔Mψ吞噬功能的影响(±s) 组 别
, 百拇医药
例数
吞噬百分率(%)
P值
鲨骨粉1.125g/kg
鲨骨粉2.25g/kg
CTX 100mg/kg×2
水对照组
正常对照组
12
12
12
12
12
, 百拇医药
9.18±2.00
7.05±1.95
6.40±1.35
6.10±1.10
13.09±2.88
<0.01
>0.05
>0.05
-
<0.01
*P值为各组与水对照组比较。
由表10可见，鲨骨粉各剂量组的吞噬百分率均有所有升，其中1.125g/kg剂量与水对照组比较差异显著(P<0.01)。
, 百拇医药
小 结
本项研究表明，鲨骨粉具有一定的扶正作用，对荷瘤小鼠的体液免疫和细胞免疫作用不明显，但可明显提高荷 瘤小鼠的NK细胞活性和Mψ细胞的吞噬功能。增效作用实验表明，鲨骨粉与化疗药(CTX、5-Fu、ADM)合用可增加抗肿瘤(S180、Lewis肺癌)作用，其增效率可提高22.78%～47.90%。鲨骨粉与放疗合用(60Co照射)可增加抗肿瘤(S180)作用，其增效率可提高15.20%～26.50%。初步证实鲨骨粉具有较好的扶正作用和明显的抗肿瘤增效作用。这与我们临床观察结果相一致,与祖国医学的记载也完全吻合，因此作为肿瘤辅助治疗剂具有开发应用前景。
参考文献
[1]于志洁.沙克一号研究汇编.南京：江苏科学技术出版社，1990：9.
[2]蔡平，于志洁.鲨鱼软骨血管形成抑制因子研究与开发现状.中国海洋药物杂志，1996，15(3)：37.
[3]沈光荣等.鲨鱼软骨制剂对肿瘤生长的抑制用途.中国生化药物杂志，1995，16(4)：157.
[4]明.李时珍.本草纲目(第四册).北京：人民卫生出版社，1982：2468.
[5]清.赵学敏.本草纲目拾遗.北京：人民卫生出版社，1963：422.
收稿时间：99-03-20, http://www.100md.com
单位：张建雄(浙江海力生制药公司)；王劲 杨锋 张建雄 沈翔 戴关海 周志平(浙江省中医药研究院基础所 杭州 310007)
关键词：鲨鱼软骨，抗癌增效，免疫功能
中国海洋药物000205
摘要 根据祖国医学对鲨鱼药用功效记载，结合现代对鲨鱼软骨的认识，本项研究探讨了鲨鱼软骨抗癌增效及调节免疫功能的作用。结果表明：鲨鱼软骨可明显提高荷瘤小鼠的NK细胞活性和Mψ细胞的吞噬功能。鲨鱼软骨粉与化疗药物(CTX、5Fu、ADM)合用，抗肿瘤(S180、Lewis肺癌)的增效率可达22.8%～47.9%；与放疗(50Co照射)合用，抗肿瘤增效率为15.20%～26.50%，证实鲨鱼软骨具有较好的扶正(提高免疫功能)作用和明显的抗癌增效作用。
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THE RESEARCH ON ANTICARCINOGENOSIS AND IMMUNOLOGIC REGULATION OF SHARK CHONDRIC POWDER
Wang Jing,Yang Feng, Zhang Jinangxiong ,et al.
(Zhejing Academy of TCM,Hangzhou 310007)
ABSTRACT The experiment has been explored on anticarcinogenosis and immunologic regulation of shark ehondrie powder,according to TCM pharmaceutic records on shark and modern recognitions on shark chondric powder.Result:Shark chondric powder can obviously increase NK activity of bearing-tumor mice and Mψ endocytosis.The effective rate of anticarcinogenosis (S180 Lewis Lung cancer)is 22.8%-47.9%,administered shark chondric powder and chemical drugs (CTX,5-Fu,ADM).The effective rate of anticarcinogenosis is 15.20%-26.50%,administered shark chondric powder and radiation.It has proved better improving immunologic system and anticarcinogenosis.
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KEY WORDS Shark chondric powder,Anticarcinogenosis,Immunologic regulation
国内外研究表明，鲨鱼软骨中含有新生血管生成抑制因子，以及丰富的粘多糖、蛋白质、氨基酸等，能直接产生生物反应调节效应的物质，不仅能抗肿瘤，且能减轻放疗、化疗的副作用[1～3]。其实我国是世界上最早的对鲨鱼开发应用的国家，依托传统中医中药，积累了丰富的药用经验，在历代本草专著中有不少记载。如明.《本草纲目》记载：“鲛鱼(唐本草)，释名沙鱼……肉：气味甘平，无毒。主治：作鱼 会，补五脏……甚益人”[4]。《本草纲目拾遗》记载沙刺片：“味甘性平，补五脏，消鱼积，解蛊毒。益气开膈，托毒，长腰力。消痰，开胃进食”[5]。沙刺片即鲨鱼翅，是鲨鱼软骨的一部分，一直作为名贵菜肴和高档滋补品。由此可见：鲨鱼软骨具有补五脏，益气，长腰力(肾主腰)，开胃进食等扶正作用；还具有托毒、消痰祛邪作用，即有“扶正不留邪，祛邪不伤正”功能特点，不仅适用于本虚标实的癌症，又恰好弥补肿瘤放、化疗“敌我不分”之弊端，而达到增效目的。我们临床观察30例中晚期癌症病人，也发现口服鲨骨粉能提高全身状况，改善生活质量，部分病例NK细胞活性增高；与化、放疗合用能减轻毒、副反应，增效作用较为明显。为了合理、充分地开发利用鲨鱼资源，进行鲨鱼软骨粉抗癌增效及调节免疫功能的研究，现报告如下：
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1 实验材料
1.1 动物：ICR种小鼠，体重18～22g，雌性，由本院实验动物室提供。C57BL/6J纯种小鼠，体重18～22g，雌性，由中国科学院上海实验动物中心提供。S180、Lewis肺癌等瘤株均由中国科学院上海药物研究所引进。
1.2 药物：采用姥鲨科姥鲨Cotrhinus maximas(Gunner)、鲸鲨科鲸鲨Rhincodon typus (Smith)、鲭鲨科噬人鲨Carcharodon carcharias(Linnaeus)、大型鲨鱼的内骨骼，经冷冻、粉碎、干燥，60Co灭菌，由浙江海力生制药公司提供。环磷酰胺(CTX)，上海华联制药公司产，批号960309；氟尿嘧啶(5-Fu)，南通制药总厂产，批号960524；盐酸阿霉素(ADM)，浙江海门制药厂产，批号970503。
2 方法与结果
, 百拇医药
2.1 抗癌增效作用研究
2.1.1 与环磷酰胺合用的增效作用
2.1.1.1 对S180肉瘤生长的影响
取ICR种小鼠，雌性，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重。除水对照组外，其余动物均在接种肿瘤第2、6d腹腔注射CTX 30mg/kg。接种瘤种次日灌胃鲨骨粉，剂量分别为1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药10d。停药次日称体重，处死小鼠，并剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。
结果见表1。
表1 鲨骨粉对CTX抗S180肿瘤的增效作用(±s) 组 别
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例数
(只)
瘤
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉1.125g/kg+CTX 30mg/kg×2
鲨骨粉2.25g/kg+CTX 30mg/kg×2
CTX 30mg/kg×2+水
水对照
, 百拇医药
10
10
10
10
1.56±0.67
1.45±0.41**
2.02±0.58
2.99±0.81**
47.80
51.50
32.40
-
, 百拇医药
22.78
28.22
-
-
**表示与CTX+水组比较P<0.01。
由表1可见，鲨骨粉1.125g/kg和2.25g/kg剂量可使CTX抗S180肿瘤的作用，分别增效22.8%、28.22%(P<0.01)。
2.1.1.2 对Lewis肺癌生长的影响
取C57BL/6J纯种小鼠，雌性，均皮下接种Lewis肺癌悬液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重，除水对照组外，其余动物均在接种种瘤第2、6、10d腹腔注射CTX30mg/kg。接种肿瘤次日灌胃鲨骨粉，剂量为1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药15d，停药次日称体重，处死小鼠，并剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。结果见表2。
, 百拇医药
表2 鲨骨粉对CTX抗Lewis肺癌的增效作用(±s) 组 别
例数
(只)
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉1.25g/kg+CTX 30mg/kg ×3
鲨骨粉2.25g/kg+CTX 30mg/kg×3
, http://www.100md.com CTX 30mg/kg×3+水
水对照
10
10
10
10
0.96±0.67
1.02±0.54
1.38±0.42
2.12±0.54**
54.48
51.70
, http://www.100md.com
34.91
-
30.12
25.85
-
-
**表示与CTX+水组比较P<0.01。
由表2可见，鲨骨粉各剂量组可使CTX抗Lewis肺癌作用增效25.85%～30.12%。
2.1.2 与5-氟尿嘧啶合用的增效作用。
2.1.2.1 对S180肉瘤生长的影响
取ICR种小鼠，雌性，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重。除水对照组外，其余各组动物均在第2d腹腔注射5-Fu 60mg/kg。接种肿瘤次日灌骨鲨骨粉，剂量为1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药10d，停药次日称体重，处死小鼠，并剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。结果见表3。
, 百拇医药
表3 鲨骨粉对5-Fu抗S180肿瘤的增效作用(±s) 组 别
例数
(只)
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉1.125g/kg+5Fu 60mg/kg
鲨鱼粉2.25g/kg+5Fu 60mg/kg
, 百拇医药
5-Fu 60mg/kg+水
水对照
10
10
10
10
0.60±0.25
0.59±0.30
0.99±0.34
1.90±0.73
68.42
68.47
, 百拇医药
47.63
-
39.70
39.80
-
-
*、**表示与5-Fu+水组比较P<0.05、P<0.01
由表3可见鲨骨粉各剂量组具有增效5Fu抗S180肿瘤的作用，其增效率分别提高39.7%和39.8%，与5-Fu+水组比较有显著性差异(P<0.05)
2.1.2.2 对Lewis肺癌生长的影响
取C57BL/6J纯种小鼠，雌性，均皮下接种Lewis肺癌悬液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重。除水对照组外，其余各组动物均在接种肿瘤第2d腹腔注射5Fu 60mg/kg。接种肿瘤次日灌胃鲨骨粉，剂量为1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药14d，停药次日称体重，处死小鼠，并剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。结果见表4。
, 百拇医药
表4 鲨骨粉对5Fu抗Lewis肺癌的增效作用(±s) 组 别
例数
(只)
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉1.125g/kg+5Fu 60mg/kg
鲨骨粉2.25g/kg+5Fu 60mg/kg
5-Fu 60mg/kg+水
, http://www.100md.com
水对照
10
10
10
10
0.66±0.37
0.74±0.47
1.04±0.52
2.12±0.54**
67.30
63.40
49.00
, http://www.100md.com
-
35.59
28.16
-
-
**表示与5-Fu+水组比较P<0.01。
由表4可见，鲨骨粉各剂量均可提高5Fu抗Lewis肺癌的作用，增效率分别提高35.59%和28.16%。
2.1.3 与阿霉素(adriamycin)合用的增效作用。
取ICR种小鼠，雌性，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重。除水对照组外，其余各组动物均在第2d腹腔注射ADM 8mg/kg。接种肿瘤次日灌胃鲨骨粉，剂量为1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药10d，停药次日称体重，处死动物，剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。结果见表5。
, http://www.100md.com
表5 鲨骨粉对阿霉素抗S180肿瘤的增效作用(±s) 组 别
例数
(只)
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉1.125g/kg+ADM 8mg/kg
鲨骨粉2.25g/kg+ADM 8mg/kg
, 百拇医药 ADM 8mg/kg+水
水对照
10
10
10
10
1.12±0.56
0.98±0.38
1.88±0.97
2.46±0.77
54.50
60.20
, http://www.100md.com
23.50
-
40.40
47.90
-
-
注：*表示与ADM+水组比较P<0.05。
由表5可见，鲨骨粉各剂量均可提高ADM抗S180肿瘤的作用，增效率分别提高40.40%和47.90%(P<0.05)。
2.1.4 对放疗的增效作用
取ICR小鼠，雌性，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分组，称体重。除水对照组外，其余各组动物均在接种第3、6d用60Co全身照射，照射剂量为0.05Gy(剂量率0.5Gy.min-1)。接种瘤种次日灌胃鲨骨粉，剂量为0.55g/kg、1.125g/kg、2.25g/kg，连续给药10d，停药次日称体重，处死动物，剥皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。结果见表6。
, 百拇医药
表6 鲨骨粉对放疗的增效作用(±s) 组 别
例数
(只)
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
增效率
(%)
鲨骨粉0.55g/kg+60Co×2
鲨骨粉1.125g/kg+60Co×2
鲨骨粉2.25g/kg+60Co×2
, http://www.100md.com
60 Co++水
水对照
12
12
12
12
12
2.28±0.62
2.35±0.71
2.03±0.55
2.77±0.46
2.94±0.10
, 百拇医药
22.30
20.10
30.70
5.80
-
17.50
15.20
26.50
-
-
*、**表示与60Co+水组比较P<0.05、P<0.01。
由表6可见，鲨骨粉对60Co放疗抗肿瘤有明显的增效作用(P<0.05、0.01)。
, 百拇医药
2.2 调节免疫功能的研究
2.2.1 对体液免疫的影响
取ICR小鼠60只，其中48只皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日随机分四组，并称重，每组12只，第1～2组分别灌胃鲨骨粉1.125g/kg和2.25g/kg，第3组灌胃蒸馏水并在实验第3、6天腹腔注射CTX 0.1g/kg,第4组灌胃蒸馏水，第5组为正常对照组。连续给药10d，在给药第6d，第1～5组动物均腹腔注射羊红细胞悬液0.2ml致敏，致敏后第4日，摘眼球取血，取同组各鼠血清于同一试管内，用生理盐水做对倍稀释，成为1∶25、1∶50、1∶100、1∶400和1∶800稀释血清。然后在各稀释血清中加10%绵羊红细胞悬液0.5ml和1∶10稀释的豚鼠血清1ml。另设不加补体而以生理盐水代替的空白管，各管37℃ 30分钟后进行血红蛋白测定，结果以HC50表示。结果见表7。
, http://www.100md.com
表7 鲨骨粉对荷瘤小鼠血清溶血素的影响 组 别
例数
平均HC50(±s)
P值
鲨骨粉1.125g/kg
鲨骨粉2.25g/kg
CTX 100mg/kg×2
水对照组
正常对照组
12
12
12
, 百拇医药
12
12
22.10±2.26
22.01±2.39
12.30±2.11
19.01±2.53
23.96±3.70
>0.05
>0.05
<0.01
-
<0.05
, http://www.100md.com
*P值为各组与水对照组比较。
由表7可见，鲨骨粉各剂量对荷瘤小鼠的HC50有所提高，但作用不显著(P>0.05)。
2.2.2 对细胞免疫的影响
动物瘤株接种、分组、给药均同前，连续给药10d，终止给药后次日，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾脏，制成细胞悬液，进行淋巴细胞转化功能测定，测定方法采用ConA诱导的3H-TdR掺入法，结果见表8。
表8 鲨骨粉对S180实体瘤小鼠淋巴细胞转化功能的影响 组 别
例数
平均CPM(±s)
P值
, http://www.100md.com
鲨骨粉1.125g/kg
鲨骨粉2.25g/kg
CTX 100mg/kg×2
水对照组
正常对照组
12
12
12
12
12
39957±13952
36234±18806
, http://www.100md.com
27922±19974
35022±18925
57049±22529
>0.05
>0.05
>0.05
-
<0.01
*P值为各组与水对照组比较。
由表8可见，鲨骨粉各剂量组的CPM值与水对照组比较有所上升，但作用不显著(P>0.05)。
2.2.3 对NK细胞活性的影响。
, 百拇医药
动物肿瘤接种、分线、给药均同前，给药终止后次日，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾脏，制成细胞悬液，进行NK细胞活性测定，测定方法采用YAC-1为靶细胞的3H-TdR前标法。结果见表9。
表9 鲨骨粉对S180实体瘤小鼠NK细胞活性的影响(±s) 组 别
例数
平均HC50(±s)
P值
鲨骨粉1.125g/kg
鲨骨粉2.25g/kg
CTX 100mg/kg×2
水对照组
, 百拇医药
正常对照组
12
12
12
12
12
25.55±7.55
22.01±10.73
8.00±4.45
11.50±4.80
26.00±5.08
<0.01
, http://www.100md.com <0.01
>0.05
-
<0.01
*P值为各组与水对照组比较。
由表9可见，鲨骨粉各剂量组的CI%值均明显高于水对照组(P<0.01)。
2.2.4 对非特异性免疫功能—吞噬功能的影响。
动物肿瘤接种、分组、给药均同前，末次给药后1h，每鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.5ml，间隔8h，处死动物，腹腔注入生理盐水2ml，轻揉1min后吸出洗液1ml，分滴于载玻片上，固定、染色后进行吞噬百分率计数。结果见表10。
表10 鲨骨粉对S180实体瘤小鼠腹腔Mψ吞噬功能的影响(±s) 组 别
, 百拇医药
例数
吞噬百分率(%)
P值
鲨骨粉1.125g/kg
鲨骨粉2.25g/kg
CTX 100mg/kg×2
水对照组
正常对照组
12
12
12
12
12
, 百拇医药
9.18±2.00
7.05±1.95
6.40±1.35
6.10±1.10
13.09±2.88
<0.01
>0.05
>0.05
-
<0.01
*P值为各组与水对照组比较。
由表10可见，鲨骨粉各剂量组的吞噬百分率均有所有升，其中1.125g/kg剂量与水对照组比较差异显著(P<0.01)。
, 百拇医药
小 结
本项研究表明，鲨骨粉具有一定的扶正作用，对荷瘤小鼠的体液免疫和细胞免疫作用不明显，但可明显提高荷 瘤小鼠的NK细胞活性和Mψ细胞的吞噬功能。增效作用实验表明，鲨骨粉与化疗药(CTX、5-Fu、ADM)合用可增加抗肿瘤(S180、Lewis肺癌)作用，其增效率可提高22.78%～47.90%。鲨骨粉与放疗合用(60Co照射)可增加抗肿瘤(S180)作用，其增效率可提高15.20%～26.50%。初步证实鲨骨粉具有较好的扶正作用和明显的抗肿瘤增效作用。这与我们临床观察结果相一致,与祖国医学的记载也完全吻合，因此作为肿瘤辅助治疗剂具有开发应用前景。
参考文献
[1]于志洁.沙克一号研究汇编.南京：江苏科学技术出版社，1990：9.
[2]蔡平，于志洁.鲨鱼软骨血管形成抑制因子研究与开发现状.中国海洋药物杂志，1996，15(3)：37.
[3]沈光荣等.鲨鱼软骨制剂对肿瘤生长的抑制用途.中国生化药物杂志，1995，16(4)：157.
[4]明.李时珍.本草纲目(第四册).北京：人民卫生出版社，1982：2468.
[5]清.赵学敏.本草纲目拾遗.北京：人民卫生出版社，1963：422.
收稿时间：99-03-20, http://www.100md.com