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编号:10497195
薄层扫描法测定益气通脉口服液中黄芪甲苷含量的研究
http://www.100md.com 《中国药房》 2000年第2期
     作者:刘友平 张家明

    单位:刘友平(成都中医药大学药学院,成都市 610075);张家明(成都中医药大学附属医院药剂科,成都市 610075)

    关键词:薄层扫描法;益气通脉口服液;黄芪甲苷

    中国药房000207

    摘要:目的:测定益气通脉口服液中黄芪甲苷的含量。方法:采用薄层扫描法。结果:黄芪甲苷的点样量在1μg~5μg范围内,与吸收度积分值呈良好的线性关系,平均回收率为99.33%,RSD为1.03%。结论:该方法可靠,数据准确,操作简便、易行。

    中图分类号:R927.2 文献标识码:B 文章编号:1001-0408(2000)02-0061-02

    Determination of Astragalus IV in Yiqi Tongmai Oral Liquid by TLC Scanning
, 百拇医药
    LIU Youping(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075)

    ZHANG Jiaming(Dept.of Pharmacy,The Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075)

    ABSTRACT:OBJECTIVE:To determine the content of astragalus IV in Yiqi Tongmai oral liquid.METHODS:Using the dualwavelength thin layer scanning method.RESULTS:The content of astragalus IV between 1μg~5μg showed a good linearity with absorption integration.The average recovery was 97.33%.RSD was 1.03%.CONCLUSION:This method is dependable,simple,and easy to operate with accurate data.
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    KEY WORDS:thin layer scanning;astragalus IV;Yiqi Tongmai oral liquid

    益气通脉口服液系由黄芪、川芎、丹参、延胡索等药味制成的复方制剂[1],具有化瘀通脉、温通止痛之功。临床用于治疗冠心病、心绞痛等疾病,疗效确切。为了控制制剂质量,笔者对君药黄芪所含有效成分黄芪甲苷的含量进行了测定。黄芪甲苷的含量测定方法据文献报道,主要有薄层扫描法[2]、高效液相色谱法[3]、反相高效液相色谱法[4]等。本文采用薄层扫描法测定制剂中黄芪甲苷含量,结果满意。

    1 仪器、试药与样品

    CS-930双波长薄层扫描仪(日本岛津);定量点样毛细管(美国Drummond公司);黄芪甲苷对照品(含量测定用,中国药品生物制品检定所提供);薄层层析硅胶G60型(青岛海洋化工集团公司);益气通脉口服液(成都中医药大学附属医院药剂科提供);所用试剂均为分析纯。
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    2 方法与结果

    2.1 对照品溶液的制备:精密称取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。

    2.2 供试品溶液的制备:精密量取益气通脉口服液20ml,用水饱和的正丁醇提取5次,每次20ml,合并正丁醇液,用5%NaHCO3溶液洗涤4次,每次30ml,弃去NaHCO3液,正丁醇液蒸干,残渣加水5ml使溶解,放冷,通过D101型大孔吸附树脂柱(1.5cm×12cm),用水100ml洗脱,弃去水液;再用30%乙醇60ml洗脱,弃去洗脱液;继用70%乙醇60ml洗脱,收集70%乙醇洗脱液,蒸干,残渣以甲醇溶解并转移至2ml量瓶内,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

    2.3 薄层色谱条件:照薄层色谱法(《中国药典》1995年版(一部)附录Ⅵ B)试验,吸取对照品溶液3μl,供试品溶液6μl,阴性对照液(按处方比例配制的除去黄芪的其它药物制备的阴性样品,按供试品溶液的方法制备)6μl,分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃烘约5min。供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同的棕褐色斑点;置紫外灯(365nm)下检视,显相同的橙黄色荧光斑点。阴性样品对照液色谱中在相应位置无斑点出现。薄层色谱图见图1。
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    图1 样品薄层色谱图

    2.4 薄层扫描条件:采用双波长反射法锯齿扫描,λs=530nm,λR=700nm;背景补偿;线性参数Sx=3;扫描步距ΔY=0.2mm;狭缝宽度1.2mm×1.2mm,薄层扫描图见图2。

    图2 样品薄层扫描图

    2.5 标准曲线的制备:精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5μl,分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,按2.3项下条件进行薄层层析,显色后,取同样大小的玻璃板覆盖于薄层板上,周围用胶布固定,按2.4项下条件扫描,得吸收度积分值。以对照品总样量为横坐标,吸收度积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得一不通过原点的直线。经回归处理,得回归方程:Y=3 372.6 879+2 508.2 677,相关系数γ=0.9 954。黄芪甲苷的点样量在1μg~5μg范围内,与吸收度积分值呈良好的线性关系。
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    2.6 稳定性试验:对同一斑点,每隔30min扫描,测定其吸收度积分值,结果在2h内稳定,RSD=1.5%(n=5)。

    2.7 精密度试验:(1)同板精密度:取同一供试品溶液,在同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,点5个6μl斑点,依法展开显色后,扫描测定,结果吸收度积分值RSD=2.56%(n=5)。(2)异板精密度:对同一供试品溶液,测定其中黄芪甲苷含量,共测定5次,结果含量的RSD=4.26%(n=5)。(3)仪器精密度:对同一斑点连续扫描测定5次,结果吸收度积分值的RSD=0.89%(n=5)。

    2.8 重现性试验:取同一批号益气通脉口服液,分别制备5份供试品溶液,依法测定黄芪甲苷含量,结果RSD=2.57%(n=5)。

    2.9 回收率试验:精密吸取已知含量的益气通脉口服液10ml,分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(浓度为0.095mg/ml)3ml,依法测定,计算回收率,结果见表1。
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    表1 加样回收率试验结果 已知量mg

    加入量mg

    测得量mg

    回收率%

    平均回收率%

    RSD%

    0.28

    0.285

    0.5573

    97.19

    0.28

    0.285

, http://www.100md.com     0.5554

    96.63

    0.28

    0.285

    0.5599

    98.21

    0.28

    0.285

    0.5607

    98.49

    0.28

    0.285

    0.5540
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    94.14

    97.33

    1.03

    2.10 样品含量测定:精密吸取供试品溶液6μl,对照品溶液1μl、3μl,分别交叉点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,依法展开,测定,并以外标两点法计算黄芪甲苷含量(因标准曲线未过原点)。3批样品黄芪甲苷的含量分别为0.0 283mg/ml(批号980101)、0.0 354mg/ml(批号980102)、0.0 338mg/ml(批号980103)。

    3 讨论

    3.1 益气通脉口服液为中药复方制剂,成分较为复杂,采用5%NaHCO3溶液除杂,较《中国药典》1995年版(一部)黄芪项下使用氨试液除杂[6],刺激性小,易操作,且薄层色谱斑点清晰,无色带干扰。
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    3.2 首次将展开系统醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)用于黄芪甲苷含量测定,结果满意。该系统能使黄芪甲苷得到较好的分离,且斑点圆整,Rf值适中,且临配即用,不需低温放置过夜,较《中国药典》1995年版(一部)黄芪含量测定项下所载系统[6]为优。

    参考文献:

    [1] 刘友平,李胜涛,李祖伦,等.益气通脉口服液制备工艺研究[J].成都中医药大学学报,1999,22(1):54.

    [2] 李 玲,苏 健,王宝黄芪及复方制剂中黄芪甲苷的薄层扫描法测定[J].中成药,1993,15(6):10.

    [3] 付铁军,李伯刚,及元乔,等.高效液相色谱法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量[J].天然产物研究与开发,1997,9(4):53.

    [4] 肖 娟,王秀兰,马 鹏,等.RP-HPLC法测定益气活血注射液中黄芪甲苷的含量[J].华西药学杂志,1999,14(1):43.

    [5] 苏 健,王宝,王广才.归芪合剂及其主药黄芪的检验方法研究[J]中国中药杂志,1994,19(3):158.

    [6] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典(一部)[S].1995年版.广州:广东科技出版社、化学工业出版社,1995:272

    (收稿日期:1999-10-30 修回日期:2000-01-10), 百拇医药