高效液相色谱法测定诺氟沙星含量
作者：叶鸣
单位：叶鸣(温州市药品检验所,浙江 温州 325000)
关键词：诺氟沙星；苯甲酸钠；色谱法，高效液相
温州医学院学报000242
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] B [文章编号] 1000-2138(2000)02-0101-01
诺氟沙星(Norfloxacin)系氟喹诺酮类抗菌药物, 其制剂有胶囊、软膏、眼膏、注射液等, 《中国药典》95年版规定非水滴定法和紫外分光光度法分别测定原料和胶囊的含量[1], 由于其方法局限性较大,1998年国家药品监督管理局修订了其质量标准,采用高效液相色谱(HPLC)法测定诺氟沙星胶囊含量(外标法)[2],笔者采用内标法测定诺氟沙星的含量, 较外标法更为准确, 获得了较满意的结果，报道如下。
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1 材料、方法和结果
1.1 仪器与试药 日本岛津LC-6A高效液相色谱仪、SPD-6AV紫外检测器、SCL-6B系统控制器、C-R6A数据处理机、LC-6A输液泵。 诺氟沙星标准品: 中国药品生物制品检定所,0240-9702;样品由温州人民制药厂提供。采用色谱条件检查为单一色谱峰;苯甲酸钠(内标)为分析纯,甲醇、乙腈均为色谱纯。
1.2 色谱条件 色谱柱:shim-pack CLC - ODS(6.0mm×150mm); 流动相:0.4mol/L柠檬酸-甲醇-乙腈(10:4:1);检测波长254nm;流速1ml/min,进样量20μl。
1.3 标准曲线制备 精密称取苯甲酸钠适量, 加水溶解并稀释成0.4mg/ml的溶液, 作为内标溶液。另取诺氟沙星适量,精密称定,加0.1mol/L盐酸适量溶解后,加水制成0.25mg/ml的溶液,作为标准对照品溶液。精密量取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0ml,分别置于10ml量瓶中,加入内标溶液2.0ml,用水稀释至刻度, 摇匀, 进样20μl。以标准对照品与内标的峰面积之比为纵坐标,相应的标准对照品浓度(mg/ml)为横坐标, 得回归方程:Y=4.38X+0.0178，r=0.9998。结果表明, 诺氟沙星溶液浓度在12.5～125μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。
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1.4 回收试验 配制50μg/ml浓度的样品溶液, 分别加入12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml的诺氟沙星对照品,进行回收试验, 回收率分别为99.91%、99.39%、100.10%;RSD分别为0.97、0.77、0.52( n=5)。
1.5 精密度试验 对同一诺氟沙星对照品溶液(含诺氟沙星50μg/ml、苯甲酸钠80μg/ml)连续进样5次,测得对照品与内标物峰面积比值的RSD为0.49%。
1.6 样品测定 精密称取诺氟沙星0.125g,置500ml量瓶中,加0.1mol/L
HCl 10ml使溶解,用水稀释至刻度,摇匀。精密吸取上述溶液及内标溶液各5ml置于25ml量瓶中;另再精密吸取上述溶液5ml,不加内标溶液, 置于25ml量瓶中; 分别用水稀释至刻度, 摇匀,分别作为1号溶液(内标)和2号溶液(外标),各进样20μl。测得1号溶液样品的含量为98.9%,n=5,RSD 为0.65%。2号溶液样品的含量为98.0%,n=5,RSD 为2.1%。
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2 讨论
2.1 通过实验发现, 当柠檬酸浓度为0.4～1.0mol/L与甲醇、乙腈按比例混合作流动相,均能使对照品与内标分离,为保护柱子,本文选择0.4mol/L浓度,在该浓度下,与甲醇、乙腈不同比例混合,发现以乙腈在流动相中7%左右峰形较好。故本文选择0.4mol/L柠檬酸-甲醇-乙腈(10:4:1)为流动相。若单独采用柠檬酸和乙腈两种混合作流动相, 亦能分离对照品和内标, 但效果以本文条件为佳。
2.2 经稳定性试验观察,样品溶液在室温下(约18℃)放置,每隔2h测定1次,测至6h,样品含量结果的RSD为0.85%,n=3,说明样品溶液较稳定。
作者简介：叶鸣(1965-)，男，浙江温州人，主管药师，主要从事药品检验(药物分析和仪器分析)工作。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中国药典*二部[S].北京：化学工业出版社，1995.779.
[2] 中华人民共和国药品监督管理局[S]. 国药管注[1998]42号文. 附件 .
收稿日期：1999-11-03
修回日期：2000-01-18, 百拇医药
单位：叶鸣(温州市药品检验所,浙江 温州 325000)
关键词：诺氟沙星；苯甲酸钠；色谱法，高效液相
温州医学院学报000242
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] B [文章编号] 1000-2138(2000)02-0101-01
诺氟沙星(Norfloxacin)系氟喹诺酮类抗菌药物, 其制剂有胶囊、软膏、眼膏、注射液等, 《中国药典》95年版规定非水滴定法和紫外分光光度法分别测定原料和胶囊的含量[1], 由于其方法局限性较大,1998年国家药品监督管理局修订了其质量标准,采用高效液相色谱(HPLC)法测定诺氟沙星胶囊含量(外标法)[2],笔者采用内标法测定诺氟沙星的含量, 较外标法更为准确, 获得了较满意的结果，报道如下。
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1 材料、方法和结果
1.1 仪器与试药 日本岛津LC-6A高效液相色谱仪、SPD-6AV紫外检测器、SCL-6B系统控制器、C-R6A数据处理机、LC-6A输液泵。 诺氟沙星标准品: 中国药品生物制品检定所,0240-9702;样品由温州人民制药厂提供。采用色谱条件检查为单一色谱峰;苯甲酸钠(内标)为分析纯,甲醇、乙腈均为色谱纯。
1.2 色谱条件 色谱柱:shim-pack CLC - ODS(6.0mm×150mm); 流动相:0.4mol/L柠檬酸-甲醇-乙腈(10:4:1);检测波长254nm;流速1ml/min,进样量20μl。
1.3 标准曲线制备 精密称取苯甲酸钠适量, 加水溶解并稀释成0.4mg/ml的溶液, 作为内标溶液。另取诺氟沙星适量,精密称定,加0.1mol/L盐酸适量溶解后,加水制成0.25mg/ml的溶液,作为标准对照品溶液。精密量取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0ml,分别置于10ml量瓶中,加入内标溶液2.0ml,用水稀释至刻度, 摇匀, 进样20μl。以标准对照品与内标的峰面积之比为纵坐标,相应的标准对照品浓度(mg/ml)为横坐标, 得回归方程:Y=4.38X+0.0178，r=0.9998。结果表明, 诺氟沙星溶液浓度在12.5～125μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。
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1.4 回收试验 配制50μg/ml浓度的样品溶液, 分别加入12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml的诺氟沙星对照品,进行回收试验, 回收率分别为99.91%、99.39%、100.10%;RSD分别为0.97、0.77、0.52( n=5)。
1.5 精密度试验 对同一诺氟沙星对照品溶液(含诺氟沙星50μg/ml、苯甲酸钠80μg/ml)连续进样5次,测得对照品与内标物峰面积比值的RSD为0.49%。
1.6 样品测定 精密称取诺氟沙星0.125g,置500ml量瓶中,加0.1mol/L
HCl 10ml使溶解,用水稀释至刻度,摇匀。精密吸取上述溶液及内标溶液各5ml置于25ml量瓶中;另再精密吸取上述溶液5ml,不加内标溶液, 置于25ml量瓶中; 分别用水稀释至刻度, 摇匀,分别作为1号溶液(内标)和2号溶液(外标),各进样20μl。测得1号溶液样品的含量为98.9%,n=5,RSD 为0.65%。2号溶液样品的含量为98.0%,n=5,RSD 为2.1%。
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2 讨论
2.1 通过实验发现, 当柠檬酸浓度为0.4～1.0mol/L与甲醇、乙腈按比例混合作流动相,均能使对照品与内标分离,为保护柱子,本文选择0.4mol/L浓度,在该浓度下,与甲醇、乙腈不同比例混合,发现以乙腈在流动相中7%左右峰形较好。故本文选择0.4mol/L柠檬酸-甲醇-乙腈(10:4:1)为流动相。若单独采用柠檬酸和乙腈两种混合作流动相, 亦能分离对照品和内标, 但效果以本文条件为佳。
2.2 经稳定性试验观察,样品溶液在室温下(约18℃)放置,每隔2h测定1次,测至6h,样品含量结果的RSD为0.85%,n=3,说明样品溶液较稳定。
作者简介：叶鸣(1965-)，男，浙江温州人，主管药师，主要从事药品检验(药物分析和仪器分析)工作。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中国药典*二部[S].北京：化学工业出版社，1995.779.
[2] 中华人民共和国药品监督管理局[S]. 国药管注[1998]42号文. 附件 .
收稿日期：1999-11-03
修回日期：2000-01-18, 百拇医药