单甘酯对血小板粘附聚集功能的影响
作者：焦波 朱媛媛 张世玲
单位：焦波 张世玲(山东医科大学药学院药理教研室，济南 250012)；朱媛媛(山东医科大学附属医院血液病研究室，济南，250012)
关键词：单甘酯，血小板聚集，血小板粘附，出血时间
中国海洋药物000307 摘要 观察了单甘酯(Glycol Mannate Sulfate,GMS)对血小板聚集、粘附功能及小鼠尾出血时间的影响。结果表明单甘酯25，50mg.kg-1剂量组对血小板粘附有显著抑制作用，P<0.01;25，50，100mg.kg-1能明显抑制胶原和花生四烯酸诱导的血小板聚集，对ADP诱导的血小板聚集无抑制作用。单甘酯40，80mg.kg-1可明显延长小鼠尾出血时间。结果证明单甘酯有明显的抗血小板作用。
, http://www.100md.com
EFFECTS OF CLYCOL MANNATE SULFATE ON THE PLATELET AGGREGATION AND ADHESION
Jiao bo
(Dept.of pharmacology,college of Pharmacy,Shandong Medical University,Ji Nan 250012)
Zhu Yuanyuan
(Dept.of pharmacology,college of Pharmacy,Shandong Medical University,Ji Nan 250012)
Zhang Shiling
(Dept.of pharmacology,college of Pharmacy,Shandong Medical University,Ji Nan 250012)
, http://www.100md.com
ABSTRUCT The effects of glycol mannate sulfate(GMS) on platelet aggregation, adhesion and bleeding time were observed.The Results showed that the GMS dosages of 25,50 mg.kg-1 could inhibit the rat platelet adhesion significantly (P<0.01) compared with the vehicle group and 25,50,100 mg.kg-1 could inhibit platelet aggregation induced by collagen and AA,but had no effect on the aggregation induced by ADP.GMS dosages of 40,80 mg.kg-1 could significantly prolong the tail bleeding time of mice.The results suggest that GMS has antiplatelet effect.
, http://www.100md.com
KEY WORDS Glycol mannate sulfate,platelet aggregation platelet adhesion,bleeding time
心血管系统疾病是严重危害人类健康并导致死亡的主要原因之一[1～3]。血栓形成是缺血性心脑血管疾病及血栓栓塞性疾病的主要病理过程[4]，血小板粘附、聚集是止血和血栓形成的初始步骤，而出血和血栓形成涉及到许多疾病的临床表现和发病机制。因此抗栓抗血小板药的研究有重要的临床意义。单甘酯(glycol mannate sulfate,GMS)由褐藻中提取分离并经化学修饰，为一种硫酸多糖类物质。我们的实验已观察到其对体外血栓、电刺激颈动脉血栓形成、动静脉旁路血栓形成均有明显抑制作用。本实验观察了GMS对血小板粘附、聚集功能及对小鼠尾出血时间的影响。
1 材料
1.1药品和试剂 单甘酯，青岛海洋大学提供，980801，使用前以生理盐水配成所需浓度；胶原(自制)；ADP和花生四烯酸(AA)，Sigma USA;阿司匹林(ASP)，山东新华制药厂，9608353；血小板稀释液(草酸铵1g,EDTA-Na2 0.012g,福尔马林0.1mL,加水至100mL)，加美蓝数滴过滤后4℃保存备用。
, 百拇医药
1.2仪器 NKK-PAT4型半自动血小板聚集仪(日本产)，XSN-RⅡ型体外血栓形成血小板粘附两用仪(无锡县电子仪器二厂，北京中医研究院西苑医院监制)。
1.3动物 新西兰兔，体重2.0～2.5kg,鲁动质字960101；Wistar大鼠,体重200～250g,鲁动质字970102；昆明种小鼠，体重18～22g，鲁动质字970102。以上动物皆用雄性，由山东医科大学实验动物中心提供。
2 方法及结果
2.1 GMS对血小板聚集的影响[5]
取大鼠50只，随机分为生理盐水组、GMS25、50、100mg.kg-1组及ASP30mg.kg-1。将大鼠用戊巴比妥纳麻醉(40mg.kg-1，ip)，股静脉给药，暴露腹主动脉，于药后30min由腹主动脉取血，3.8%枸橼酸钠抗凝，制备贫血小板血浆(platelet poor plasma,PPP)和富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)，以胶原、ADP和花生四烯酸为诱导剂，诱导血小板聚集，观察聚集率。
, 百拇医药
结果显示GMS能明显抑制胶原和花生四烯酸诱导的血小板聚集，具有显著的统计学意义，但对ADP诱导的血小板聚集无抑制作用，结果见表1。
表1 GMS对ADP、胶原和AA诱导血小板聚集的影响(x±s，n=10) 组别
剂量
(mg.kg-1)
聚集率(%)
ADP
胶原
AA
生理盐水
GMS
, 百拇医药
ASP
等容量
25
50
100
30
61.8±10.5
63.5±9.7
60.5±11.0
68.0±9.2
54.1±9.6
57.2±19.1
37.0±8.1**
, 百拇医药
35.9±16.0*
29.3±21.6**
14.6±13.8***
65.9±13.5
45.2±18.8*
41.8±14.3**
47.8±20.2
1.9±2.9***
与生理盐水比较：*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
, 百拇医药
2.2 GMS对血小板粘附功能的影响[6]
取家兔24只，随机分为生理盐水组、GMS 12.5、25mg.kg-1组及ASP 20mg.kg-1组。家兔用戊巴比妥钠麻醉(30mg.kg-1，iv)，暴露颈总动脉，静脉给药，分别于药前、药后5、30和60min，由颈总动脉取血1.8mL,分别放入加有3.8%枸橼酸钠的塑料试管中，然后从中取抗凝血1ml,加入容量为8mL的玻璃瓶中，置于体外血栓及血小板粘附两用仪的转盘上，以3.7r.min-1,转15min,从试管及玻璃球瓶中分别取血20μL,各加到盛有0.38mL血小板稀释液的试管中并进行血小板计数，计算血小板粘附率。
结果表明，GMS 25、50mg.kg-1剂量组和ASP均可明显抑制血小板粘附。见表2。表2 GMS对家兔血小板粘附功能的影响(x±s，n=6) 组别
, 百拇医药
剂量
mg.kg-1
粘附率(%)
药前
药后5min
30min
60min
生理盐水
GMS
ASP
等容量
12.5
, 百拇医药
25
20
20.4±1.8
21.3±4.1
21.6±3.4
23.5±7.2
21.1±3.7
22.4±4.7
4.7±3.9***
7.9±3.9***
21.1±3.5
24.2±3.9
, 百拇医药
6.5±2.5***
7.5±3.4**
21.5±3.4
20.1±1.3
7.1±4.1***
5.4±3.7***
与生理盐水组比较：***P<0.001
2.3 GMS对小鼠尾出血时间的影响[7]
取小鼠50只随机分为生理盐水组、GMS 20、40、80mg.kg-1组及ASP20mg.kg-1组。小鼠腹腔注射药物30min后，剪去尾尖约1.5mm,立即浸入37℃生理盐水中，以血流停止时间为指标，观察小鼠尾尖出血时间。结果显示GMS 40、80mg.kg-1组可明显延长小鼠尾出血时间。见表3。表3 GMS对小鼠出血时间的影响(x±s，n=10) 组别
, 百拇医药
剂量(mg.kg-1)
出血时间(min)
生理盐水GMS
ASP
等容量
20
40
80
20
0.67±0.27
0.85±0.25
2.37±2.03*
, 百拇医药
9.71±6.09***
2.13±0.79***
与生理盐水组比较：*P<0.05,***P<0.001
3 讨 论
参与止血和血栓形成是血小板的重要生理功能。血小板作用的发挥与粘附、聚集和释放等活性密切相关。当血管受到损伤时，内皮细胞的完整性被破坏，暴露出内皮下成分(如胶原)，胶原上有血小板粘附于聚集的活性中心，胶原可通过vWF(von Willebrand Factor)与血小板膜糖蛋白GP I b-Ⅸ、GPⅡb/Ⅲa结合[8]，使血小板粘附于破损的血管壁上，进而使血小板活化，在钙离子参与下，活化血小板膜GPⅡb/Ⅲa暴露出纤维蛋白原受体，血小板可通过各自表面的GPⅡb/Ⅲa与纤维蛋白原结合而聚集成团[9]，进而形成白色血栓，产生止血作用。实验发现，GMS可明显抑制血小板粘附，抑制胶原和花生四烯酸诱导的血小板聚集，并使小鼠尾出血时间延长，具有明显的抗血小板的作用。其详细机理尚待深入研究。
, http://www.100md.com
血栓栓塞性疾病是心血管系统疾病中的常见病，GMS经实验证明具有明显的抗血小板功能作用，这对血栓形成性疾病的治疗有重要意义，有较大的新药开发价值。
参考文献
1，Chrobak L,Dulicek P.Resistance to activated protein C as pathogenic factor of venous thromboenbolisn.Acta medica Hradec Kralove，1996,39(2):55
2，Cina G;Marra T;Ci Stasi C;et al.Epidemiology,pathophysiology and natural history of venous thromboenbolisn.Rays，1996,21(3):315
3，Tomas DP.Venous thrombosis revisited [editorial].Blood Coagul Fibrinolysis，1996,7(6):583
, 百拇医药
4，Dewoed MA.Prevalence of total coronary occlusion during the early hours of transmural myocardial infarction.New Eng J Med,1980,303:897
5，Born GVR.Aggregation of blood platelet by adenosine diphosphate and its reservbal Nature，1962,194:927
6，朱忠勇，陈之航主编.临床医学检验.上海：上海科技出版社，1997：168
7，顾云，黄娟如.介绍一种简易的抗血栓药物体内筛选法.中国药理学通报，1991，7(4)：317
8，Mann KG.Thrombosis:theoretical considerations.Am J Clin Nutr,1997,65(suppl):1657s
9，Colman RW,Hirsh J,Marder VJ et al.Hemostasis and thrombosis:basic principles and clinical practice.Philadelphia:Lippincott，1994,489
收稿日期：1999-09-24, 百拇医药
单位：焦波 张世玲(山东医科大学药学院药理教研室，济南 250012)；朱媛媛(山东医科大学附属医院血液病研究室，济南，250012)
关键词：单甘酯，血小板聚集，血小板粘附，出血时间
中国海洋药物000307 摘要 观察了单甘酯(Glycol Mannate Sulfate,GMS)对血小板聚集、粘附功能及小鼠尾出血时间的影响。结果表明单甘酯25，50mg.kg-1剂量组对血小板粘附有显著抑制作用，P<0.01;25，50，100mg.kg-1能明显抑制胶原和花生四烯酸诱导的血小板聚集，对ADP诱导的血小板聚集无抑制作用。单甘酯40，80mg.kg-1可明显延长小鼠尾出血时间。结果证明单甘酯有明显的抗血小板作用。
, http://www.100md.com
EFFECTS OF CLYCOL MANNATE SULFATE ON THE PLATELET AGGREGATION AND ADHESION
Jiao bo
(Dept.of pharmacology,college of Pharmacy,Shandong Medical University,Ji Nan 250012)
Zhu Yuanyuan
(Dept.of pharmacology,college of Pharmacy,Shandong Medical University,Ji Nan 250012)
Zhang Shiling
(Dept.of pharmacology,college of Pharmacy,Shandong Medical University,Ji Nan 250012)
, http://www.100md.com
ABSTRUCT The effects of glycol mannate sulfate(GMS) on platelet aggregation, adhesion and bleeding time were observed.The Results showed that the GMS dosages of 25,50 mg.kg-1 could inhibit the rat platelet adhesion significantly (P<0.01) compared with the vehicle group and 25,50,100 mg.kg-1 could inhibit platelet aggregation induced by collagen and AA,but had no effect on the aggregation induced by ADP.GMS dosages of 40,80 mg.kg-1 could significantly prolong the tail bleeding time of mice.The results suggest that GMS has antiplatelet effect.
, http://www.100md.com
KEY WORDS Glycol mannate sulfate,platelet aggregation platelet adhesion,bleeding time
心血管系统疾病是严重危害人类健康并导致死亡的主要原因之一[1～3]。血栓形成是缺血性心脑血管疾病及血栓栓塞性疾病的主要病理过程[4]，血小板粘附、聚集是止血和血栓形成的初始步骤，而出血和血栓形成涉及到许多疾病的临床表现和发病机制。因此抗栓抗血小板药的研究有重要的临床意义。单甘酯(glycol mannate sulfate,GMS)由褐藻中提取分离并经化学修饰，为一种硫酸多糖类物质。我们的实验已观察到其对体外血栓、电刺激颈动脉血栓形成、动静脉旁路血栓形成均有明显抑制作用。本实验观察了GMS对血小板粘附、聚集功能及对小鼠尾出血时间的影响。
1 材料
1.1药品和试剂 单甘酯，青岛海洋大学提供，980801，使用前以生理盐水配成所需浓度；胶原(自制)；ADP和花生四烯酸(AA)，Sigma USA;阿司匹林(ASP)，山东新华制药厂，9608353；血小板稀释液(草酸铵1g,EDTA-Na2 0.012g,福尔马林0.1mL,加水至100mL)，加美蓝数滴过滤后4℃保存备用。
, 百拇医药
1.2仪器 NKK-PAT4型半自动血小板聚集仪(日本产)，XSN-RⅡ型体外血栓形成血小板粘附两用仪(无锡县电子仪器二厂，北京中医研究院西苑医院监制)。
1.3动物 新西兰兔，体重2.0～2.5kg,鲁动质字960101；Wistar大鼠,体重200～250g,鲁动质字970102；昆明种小鼠，体重18～22g，鲁动质字970102。以上动物皆用雄性，由山东医科大学实验动物中心提供。
2 方法及结果
2.1 GMS对血小板聚集的影响[5]
取大鼠50只，随机分为生理盐水组、GMS25、50、100mg.kg-1组及ASP30mg.kg-1。将大鼠用戊巴比妥纳麻醉(40mg.kg-1，ip)，股静脉给药，暴露腹主动脉，于药后30min由腹主动脉取血，3.8%枸橼酸钠抗凝，制备贫血小板血浆(platelet poor plasma,PPP)和富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)，以胶原、ADP和花生四烯酸为诱导剂，诱导血小板聚集，观察聚集率。
, 百拇医药
结果显示GMS能明显抑制胶原和花生四烯酸诱导的血小板聚集，具有显著的统计学意义，但对ADP诱导的血小板聚集无抑制作用，结果见表1。
表1 GMS对ADP、胶原和AA诱导血小板聚集的影响(x±s，n=10) 组别
剂量
(mg.kg-1)
聚集率(%)
ADP
胶原
AA
生理盐水
GMS
, 百拇医药
ASP
等容量
25
50
100
30
61.8±10.5
63.5±9.7
60.5±11.0
68.0±9.2
54.1±9.6
57.2±19.1
37.0±8.1**
, 百拇医药
35.9±16.0*
29.3±21.6**
14.6±13.8***
65.9±13.5
45.2±18.8*
41.8±14.3**
47.8±20.2
1.9±2.9***
与生理盐水比较：*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
, 百拇医药
2.2 GMS对血小板粘附功能的影响[6]
取家兔24只，随机分为生理盐水组、GMS 12.5、25mg.kg-1组及ASP 20mg.kg-1组。家兔用戊巴比妥钠麻醉(30mg.kg-1，iv)，暴露颈总动脉，静脉给药，分别于药前、药后5、30和60min，由颈总动脉取血1.8mL,分别放入加有3.8%枸橼酸钠的塑料试管中，然后从中取抗凝血1ml,加入容量为8mL的玻璃瓶中，置于体外血栓及血小板粘附两用仪的转盘上，以3.7r.min-1,转15min,从试管及玻璃球瓶中分别取血20μL,各加到盛有0.38mL血小板稀释液的试管中并进行血小板计数，计算血小板粘附率。
结果表明，GMS 25、50mg.kg-1剂量组和ASP均可明显抑制血小板粘附。见表2。表2 GMS对家兔血小板粘附功能的影响(x±s，n=6) 组别
, 百拇医药
剂量
mg.kg-1
粘附率(%)
药前
药后5min
30min
60min
生理盐水
GMS
ASP
等容量
12.5
, 百拇医药
25
20
20.4±1.8
21.3±4.1
21.6±3.4
23.5±7.2
21.1±3.7
22.4±4.7
4.7±3.9***
7.9±3.9***
21.1±3.5
24.2±3.9
, 百拇医药
6.5±2.5***
7.5±3.4**
21.5±3.4
20.1±1.3
7.1±4.1***
5.4±3.7***
与生理盐水组比较：***P<0.001
2.3 GMS对小鼠尾出血时间的影响[7]
取小鼠50只随机分为生理盐水组、GMS 20、40、80mg.kg-1组及ASP20mg.kg-1组。小鼠腹腔注射药物30min后，剪去尾尖约1.5mm,立即浸入37℃生理盐水中，以血流停止时间为指标，观察小鼠尾尖出血时间。结果显示GMS 40、80mg.kg-1组可明显延长小鼠尾出血时间。见表3。表3 GMS对小鼠出血时间的影响(x±s，n=10) 组别
, 百拇医药
剂量(mg.kg-1)
出血时间(min)
生理盐水GMS
ASP
等容量
20
40
80
20
0.67±0.27
0.85±0.25
2.37±2.03*
, 百拇医药
9.71±6.09***
2.13±0.79***
与生理盐水组比较：*P<0.05,***P<0.001
3 讨 论
参与止血和血栓形成是血小板的重要生理功能。血小板作用的发挥与粘附、聚集和释放等活性密切相关。当血管受到损伤时，内皮细胞的完整性被破坏，暴露出内皮下成分(如胶原)，胶原上有血小板粘附于聚集的活性中心，胶原可通过vWF(von Willebrand Factor)与血小板膜糖蛋白GP I b-Ⅸ、GPⅡb/Ⅲa结合[8]，使血小板粘附于破损的血管壁上，进而使血小板活化，在钙离子参与下，活化血小板膜GPⅡb/Ⅲa暴露出纤维蛋白原受体，血小板可通过各自表面的GPⅡb/Ⅲa与纤维蛋白原结合而聚集成团[9]，进而形成白色血栓，产生止血作用。实验发现，GMS可明显抑制血小板粘附，抑制胶原和花生四烯酸诱导的血小板聚集，并使小鼠尾出血时间延长，具有明显的抗血小板的作用。其详细机理尚待深入研究。
, http://www.100md.com
血栓栓塞性疾病是心血管系统疾病中的常见病，GMS经实验证明具有明显的抗血小板功能作用，这对血栓形成性疾病的治疗有重要意义，有较大的新药开发价值。
参考文献
1，Chrobak L,Dulicek P.Resistance to activated protein C as pathogenic factor of venous thromboenbolisn.Acta medica Hradec Kralove，1996,39(2):55
2，Cina G;Marra T;Ci Stasi C;et al.Epidemiology,pathophysiology and natural history of venous thromboenbolisn.Rays，1996,21(3):315
3，Tomas DP.Venous thrombosis revisited [editorial].Blood Coagul Fibrinolysis，1996,7(6):583
, 百拇医药
4，Dewoed MA.Prevalence of total coronary occlusion during the early hours of transmural myocardial infarction.New Eng J Med,1980,303:897
5，Born GVR.Aggregation of blood platelet by adenosine diphosphate and its reservbal Nature，1962,194:927
6，朱忠勇，陈之航主编.临床医学检验.上海：上海科技出版社，1997：168
7，顾云，黄娟如.介绍一种简易的抗血栓药物体内筛选法.中国药理学通报，1991，7(4)：317
8，Mann KG.Thrombosis:theoretical considerations.Am J Clin Nutr,1997,65(suppl):1657s
9，Colman RW,Hirsh J,Marder VJ et al.Hemostasis and thrombosis:basic principles and clinical practice.Philadelphia:Lippincott，1994,489
收稿日期：1999-09-24, 百拇医药