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编号:10497751
LBP-D 与降糖药对糖尿病小鼠模型血糖和细胞免疫功能的影响
http://www.100md.com 《昆明医学院学报》 2000年第3期
     作者:王玲 曾卫玲 张才军 蒋绿芝 谢蒲伶 李维波

    单位:(昆明医学院微生物学与免疫学教研室,昆明 650031)

    关键词:LBP-D;四氧嘧啶;糖尿病;降糖药;DTH;T淋巴细胞亚群

    昆明医学院学报000308 摘要:利用四氧嘧啶静脉注射(100 mg/kg)诱导的糖尿病小鼠模型,观察LBP-D单独及与降糖药联合应用对小鼠血糖和细胞免疫功能的影响.研究表明:小鼠在注射四氧嘧啶后72 h,ig给药,连续10 d,可使糖尿病小鼠血糖明显降低,而且LBP-D与降糖药(优降糖和二甲双胍)有联合降血糖作用;此外,LBP-D可明显提高DTH反应及调节T淋巴细胞亚群的功能,使四氧嘧啶糖尿病小鼠免疫功能接近正常.研究结果显示:LBP-D对糖尿病小鼠的胰岛β细胞可能有保护作用,并对糖尿病小鼠有免疫调节治疗效应

    中图分类号:R 587;R 392 文献标识码:A 文章编号:1003-4706(2000)03-0030-04
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    The Effects of LBP-D and Hypoglycemic Agents

    on Blood Glucose and the Function of Cellular

    Immunity in Alloxan-induced Diabetes Mice

    WANG Ling,ZHANG Cai-jun,XIE Pu-ling

    (Department of Microbiology and Immunology, Kunming Medical College, Kunming 650031)

    ZENG Wei-ling

    (Department of Central Laboratory, the First Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650032)
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    JIANG Lu-zhi

    (Department of Endocrinology, the Second Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650101)

    LI Wei-bo

    (Department of Physics, Kunming Medical College, Kunming 650031)

    Abstract:An experimental diabetic model was induced by vein injection of alloxan monohydrate ( 100 mg/ kg). We observed the effects of LBP-D, hypoglycemic agents alone or in combination, on blood glucose and the functions of cellular immunity in alloxan-induced diabetes mice. In the present study, agents administered ig at 72 hours after the injection of alloxan for ten days in succession. The blood glucose level in NS mice and alloxan-induced diabetes mice were significantly reduced by the drug, and the combination of LBP-D and hypoglycemic agents (glibenclamide and metformin) were able to markedly decrease blood glucose level. In addition, LBP-D could obviously accelerate DTH responsibility and modulate the functions of T lymphocyte subpopulations. It made immune functions recover near the normal in alloxan-induced diabetic mice. These results indicated that LBP-D may have a cytoprotection effect on β-cells of pancreatic islets in mice and an immune modulation therapeutic effect on artificial diabetes.
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    Key words:LBP-D; Alloxan monohydrate; Diabetes; Hypoglycemic agents; DTH; T lymphocyte subpopulations

    糖尿病是一种常见多发的代谢内分泌疾病,近年来发病率处于上升趋势,其死亡率仅次于肿瘤和心血管病,高血糖还可诱发冠心病和动脉粥样硬化,严重危害人们的生命健康.新近研究表明[1],糖尿病患者可出现多种免疫功能的紊乱,采用环孢霉素、硫唑嘌呤等免疫疗法治疗有严重的副作用[2],而降糖药长期使用会失效[3],因此从天然药物中筛选和研究降糖药,已为世界各国工作者所嘱目.近年来国内外对具有降糖作用的植物多糖的化学和药理研究进展迅速[4],多糖类成分不仅是一种非特异性免疫增强剂,而起到抗菌、抗病毒、抗肿瘤等功能,并具有降血糖、降血脂、降血压等多种生理活性,且无任何毒副作用.本文首次研究了枸杞多糖-D组份(Lycium Barbarum Polysaccharides-D)单独及与降糖药联合应用对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖和细胞免疫功能的影响.
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    1 材料与方法

    1.1 材料

    主要试剂:四氧嘧啶,Sigma产品,上海试剂公司提供.葡萄糖测定试剂盒(葡萄糖氧化酶-过氧化物酶终点比色法),卫生部上海生物研究所提供.鸡红细胞(CRBC)在4℃冰箱保存于Alsever氏液中.小鼠T淋巴细胞亚群检测试剂盒,购于北京医科大学免疫系.

    药品:LBP-D按文献方法[5]从枸杞子中提取.降糖药:优降糖,苏州长征制药厂生产;二甲双胍,北京天安制药厂生产.实验时用三蒸水配成所需浓度.

    实验动物:ICR小鼠,体重18~24 g,雄性,云南省天然药物研究中心动物室提供.

    主要仪器:荧光显微镜,日本产01ympus(昆明医学院第一附属医院中心实验室免疫室提供).722型光栅分光光度计,上海第三分析仪器产出品(Q/YXLH4-92型).
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    1.2 方法

    动物模型:实验性四氧嘧啶糖尿病动物模型的制备参见文献[6],四氧嘧啶由小鼠尾静脉注入,剂量为100 mg/kg.

    给药方法:ICR小鼠46只,随机分成5组,正常组和四氧嘧啶动物模型组.后者在四氧嘧啶注射后72 h,开始给药,ig.正常组和四氧嘧啶动物模型的生理盐水对照组:每只0.5 mL/次,Bid;LBP-D组:100 mg/kg Bid(200 mg.kg-1.d-1);降糖药组:优降糖0.125 mg.kg-1.d-1,二甲双胍12.5 mg.kg-1.d-1,定为降糖药单独或与LBP-D联合用药的剂量,Bid;LBP-D+降糖药组:LBP-D 100 mg/kg,Bid(200 mg.kg-1.d-1),降糖药组:优降糖0.125 mg.kg-1.d-1,二甲双胍12.5 mg.kg-1.d-1,Bid.连续用药10 d,第11 d检测血糖和免疫学功能.
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    血糖测定:葡萄糖氧化酶-过氧化物酶终点比色法,按文献[6]进行.

    DTH的测定:按文献[7]进行.

    T淋巴细胞亚群的检测[8]:大鼠抗小鼠L 3T4及Lyt-2McAb和FITC-兔抗大鼠IgG McAb用0.1 mol/L PBS按1:10稀释.取ICR小鼠的脾细胞(1×104/L)50 μL移入40孔塑料培养板中,离心沉淀弃上清后,加L 3T4或Lyt-2McAC 40 μL/孔,非特异染色对照加等量的RPMI-1640液混匀,4℃反应30 min,洗涤3次,弃上清,每孔加入FITC-兔抗大鼠IgG 40 μL,混匀;4℃反应30 min,洗涤3次后加100 μL Hank's混匀,吸10 μL置血球计数板上,在荧光显微镜(激发光490 nm,屏障滤板透光范围520 nm~530 nm)下观察计数.每个样品共计数200个细胞,其中阳性荧光细胞数换算成阳性百分率(%).
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    统计学分析:实验数据以±s表示,组间比较采用t检验.

    2 结果

    2.1 LBP-D单独及与降糖药联合应用对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响

    小鼠在注射四氧嘧啶后72 h,ig给药,NS对照组和正常组均给等量.NS连续用药10 d,第11 d检测血糖水平,结果见表1.由结果可见,与NS对照组比较,LBP-D和降糖药可使升高的血糖明显降低,且两者有协同降血糖作用.

    表1 LBP-D单独及与降糖药联合应用对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖影响(±s,mmol/L) 组别

, 百拇医药     鼠数(n)

    血糖浓度

    正常组

    10

    5.89±0.21

    NS对照组

    9

    18.44±0.81

    LBP-D组

    9

    5.79±0.42**

    降糖药组

    9
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    9.81±0.82**

    LBP-D+降糖药组

    9

    8.60±0.38***△△

    **P<0.01,*** P<0.001,用药组与NS对照组比较;△△ P<0.01,LBP-D+降糖药组与LBP-D组和降糖药组比较.

    2.2 LBP-D单独及与降糖药联合应用对四氧嘧啶糖尿病小鼠DTH的影响

    按实验方法测定小鼠DTH反应,结果见表2.由结果可看出,NS对照组与正常免疫组相比DTH明显降低,LBP-D具有增高DTH反应的作用,而降糖药无此作用.表2 LBP-D单独及与降糖药联合应用对四氧嘧啶糖尿病小鼠DTH的影响(±s,mm) 组别
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    鼠数(n)

    足肿胀程度

    正常免疫组

    8

    1.008±0.064

    NS对照组

    8

    0.663±0.141△△

    LBP-D组

    8

    1.013±0.113***

    降糖药组
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    8

    0.625±0.104

    LBP-D+降糖药组

    8

    0.950±0.107***

    △△P<0.01,NS对照组与正常免疫组比较;

    ***P<0.001,用药组与NS对照组比较.

    2.3 LBD-D单独及与降糖药联合应用对四氧嘧啶糖尿病小鼠T淋巴细胞亚群的影响

    结果见表3.实验表明,NS对照组与正常免疫组相比L 3T4+明显降低,LBP-D主要是对L 3T4+T淋巴细胞亚群具有上调作用,使其数值接近正常,而对Lyt-2+无影响,因而使L 3T4+/Lyt-2+比值也接近正常,由此可见,LBP-D具有明显的调节T淋巴细胞亚群的作用.
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    表3 LBP-D单独及与降糖药联合应用对四氧嘧啶糖尿病小鼠T淋巴细胞亚群的影响(±s) 组别

    鼠数

    (n)

    阳性细胞

    L 3T4+/Lyt-2+

    L 3T4+

    Lyt-2+

    正常免疫组

    10

, http://www.100md.com     35.08±1.23

    29.27±0.84

    1.26±0.16

    NS对照组

    8

    26.31±1.31△△△

    29.17±0.85

    0.90±0.06△△

    LBP-D组

    9

    34.08±0.85***
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    28.83±0.99

    1.18±0.05***

    降糖药组

    9

    25.22±1.54

    29.37±0.91

    0.86±0.05

    LBP-D+降糖药组

    8

    33.98±1.36***

    29.30±0.79
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    1.16±0.06***

    △△P<0.01,△△△P<0.001,NS对照组与正常免疫组比较;***P<0.001,用药组与NS对照组比较.3 讨论

    四氧嘧啶能选择性地破坏胰岛β细胞,广泛用于制备实验性糖尿病动物模型.实验表明LBP-D单独及与降糖药联合应用对四氧嘧啶引起的糖尿病有明显的降低血糖的作用,且LBP-D与降糖药有协同降糖作用,这一作用可能是LBP-D减弱了四氧嘧啶对胰岛β细胞损伤,可试用于糖尿病患者,以望减轻降糖药的副作用,加强降糖效果.

    文献报道[4],多种植物多糖成分不仅是一种非特异性免疫增强剂,从而起到抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老的功能,而且有降血压、降胆固醇、抗炎和抗血凝等多种生理活性,由于多糖无任何毒副作用,将有可能作为一种高效低毒药物跨入口服降糖药的行列.LBP-D是从传统中药枸杞子中提取有效成分,免疫增强作用是其主要药理活性,在神经内分泌免疫网络中具有免疫增强功能[9],且具有前述植物多糖降血压、降胆固醇及抗衰老等药理学活性[10],这对糖尿病并发症具有防治作用.LBP-D可明显从细胞水平调节四氧嘧啶糖尿病小鼠的免疫功能紊乱,这样即可纠正糖尿病患者的免疫功能紊乱,降低抗糖尿病药物及免疫治疗剂的副作用,又可治疗糖尿病的并发证,在临床上有广阔的前景,这对于结合祖国医学理论去研究开发降糖新药开辟了一条新的途径,但其构效关系有待于进一步研究.
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    基金项目:云南省教委应用研究基金资助项目(9612117)

    作者简介:王玲(1960~ ),女,浙江宁海人,硕士,主要从事免疫调节研究.

    参考文献

    [1] 王玲,蒋绿芝.免疫细胞及细胞因子在胰岛素依赖型糖尿病致病机制的研究进展[J].国外医学免疫学分册,1997,20(4):190

    [2] 张强,于德民.I型糖尿病的免疫治疗[J].国外医学内分泌分册,1993,13(1):34

    [3] 何戊华.黄脲类降糖药治疗失效研究进展[J].国外医学内分泌分册,1996,15(2):81

    [4] 吴寿金,李德玉.降血糖植物多糖的研究概况[J].中草药,1992,23(10):549
, 百拇医药
    [5] 王玲,赵羽 中,李欣,等.枸杞多糖的分离、纯化、鉴定及生物活性的研究[J].中国中西医结合杂志,1996,16(基础理论特集):221

    [6] 徐淑云,卞如濂,陈修主编.药理实验方法学[M].第2版.北京:人民卫生出版社,1994.1269~1285

    [7] 王玲,杜守英,钱玉昆.LBP2对束缚应激小鼠免疫功能的影响[J].昆明医学院学报,1996,17:19

    [8] SPRENT J.Function of purified L 3T4+ and Lyt-2+cell in vitro and vivo[J].Immunol Res,1986,117(2):243

    [9] 王玲,杜守英,钱玉昆.枸杞多糖的免疫调节研究进展[J].上海免疫学杂志,1995,15(2):118

    [10] 耿长山,王葛英,林永栋,等.枸杞子多糖对老年小鼠免疫功能低下的调节作用[J].中华老年医学杂志,1998,8(4):236

    (2000-03-20收稿), 百拇医药