硒化低聚糖的药理试验研究
作者：缪锦来 李光友 杨炳所 贾元印
单位：缪锦来 李光友 杨炳所 贾元印(国家海洋局第一海洋研究所 山东省中医药研究所)
关键词：硒，硒化低聚糖，药理
中国海洋药物000308 摘 要 对小鼠以能允许的最大浓度10%的硒化低聚糖混悬液0.4mL/10g ig，测不出LD50，故根据新药审批办法中对急性毒性的要求，进行了最大耐受量(MTD)的测定，当给予小鼠硒化低聚糖16g.kg-124h，对小鼠未见明显毒性反应，表明其MTD>16g.kg-1。对小鼠S180肉瘤按4.0，2.0g.kg-1的剂量连续灌胃给药9d，各剂量组小鼠均表现出明显的抑瘤作用，其中以中剂量组(3.0g.kg-1)为最佳，其抑瘤率达67.77%，与阳性对照药物替加氟片(FT-207)的抑瘤率(70.37%)接近，低剂量组抑瘤率为40.77%，高剂量组为31.48%。
, 百拇医药
STUDY ON THE ACUTE TOXICITY AND ANTI-TUMOUR EFFECT OF SELENO-OLIGOSACCHARIDES
Miao jinlai
(The first Institute of Oceangraphy, SOA Qingdao 266003)
Li Guangyou
(The first Institute of Oceangraphy, SOA Qingdao 266003)
ABSTRACT In this paper,the acute toxicity and anti-tumour effect of seleno-oligosaccharides prepared by our lab were investigated,and compared with that of Ftorafur(FT-207).Even if rats were given seleno-oligosaccharides 0.4ml/10g ig which was the maximum concentration (10%) that could be allowd,LD50 couldnt be determined.Therefore,according to the requirements of the new drug methed of examination and approval,MTD was determined.When rats were given seleno-oligosaccharides 16g.kg-1.24h,no obriously tozic reaction arised.So,it snowed that MTD of selene oligosaccharioles was beyond 16g.kg-1.When three groups of rats with tumour (S180) continued to be poured into stomach for nine days respectively with 4.0，3.0 and 2.0g.kg-1,three dose groups of rats had obvious antitumor effect.However,the middle dose group(3.0g.kg-1 was best and its anti-tumour rate was up to 67.77%,which was close to that of the positive contrast drug-ftorafur (FT-207),and in the meantime,the low dose group was 40.77% and the high group was 31.48%.
, 百拇医药
KEY WORDS Selenium,seleno-oligosaccharides,pharmacology
自1957年Schwarz K发现缺乏维生素E的饮食中添加微量硒可以防治营养性肝坏死以来[1]，有许多出色的工作揭示了硒在人类防癌抗癌[2，3]、抗衰老[4]、预防和治疗心血管疾病、克山病和大骨节病以及家畜白肌病等方面[5]的重要作用。多糖是天然生物大分子物质，它几乎存在于所有生物体中，是有机体能量的主要物质和结构成分，是一类非特异性免疫增强化合物，能提高机体免疫功能[6～7]，增强抗病能力，有防止衰老、抗癌防癌以及防治肝炎等多方面的生物功能，受到人们的普遍重视。本文使用的硒化低聚糖是通过化学的方法制备，以期获得更强的药理活性，同时又能大大降低硒的毒副作用。本文就本实验室制备的硒化低聚糖药理活性进行了研究。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1材料
受试药物：硒化低聚糖，由海洋红藻Hypnea中提取的硫酸多糖，经过硒化反应制备而成，纯度大于95%，含硒量为0.8mg.g-1。相对分子质量为2500～3000。
对照药物：阳性对照药物替加氟片(FT-207)[9，10]，为济南制药厂产品，生产文号为：鲁卫药准字(1995)第024020，产品批号为980605；阴性对照物是生理盐水。
试验动物：昆明种健康小鼠，由山东医科大学实验动物中心提供，动物合格证号为鲁动质字980102。
1.2方法
1.2.1 硒化低聚糖的急性毒性试验
预试验选取18～20g小鼠10只，给予10%的硒化低聚糖混悬液0.4ml/10g ig，观察24h，以求测LD50。根据新药审批办法[11，12]中关于急性毒性的要求，进行了最大耐受量(MTD)的测定，选18～22g小鼠40只，♂♀各20只，随机分为2组，每组♂♀各10只，禁食8h，分别给予10%的硒化低聚糖悬液0.4ml/10g ig，对照组给予生理盐水0.4ml/10g，24h内给4次，与对照组比较其进食、活动、粪便、毛泽等，于7d再次称体重。
, 百拇医药
1.2.2 硒化低聚糖的抗肿瘤作用实验[12，13]
选19～21g小鼠，左腋下接种S180小鼠腹水稀释液，S180腹水瘤种鼠由山东省医科院药物研究所提供，在无菌条件下抽出腹水，用无菌生理盐水稀释3倍，每鼠接种0.1mL。接种18h后将小鼠随机分为5组，试验组每组♂♀各6只，共12只，对照组根据n=12×(试验组数)1/2=12×41/2=24，分别给硒化低聚糖4.0，3.0，2.0g.kg-1.24h ig，阳性对照组给予FT-207 150mg.kg-1 ig，阴性对照组给予生理盐水0.6ml.10g ig，给药组和阴性对照组为每日分2次给药，分别于8Am、6Pm、阳性对照组为8Am给药1次。连续给药9d，禁食12h,于末次给药24h后称体重后,剖杀各组小鼠，剥离瘤体，于电子天平下称瘤体，分别称体重、瘤重，计算抑瘤率和瘤体系数(瘤体/体重×100%)
, 百拇医药
2 结果
2.1 硒化低聚糖急性毒性试验结果
对小鼠以能允许的最大浓度灌胃给药，测不出LD50，故根据卫生部新药审批办法中急性毒性的实验要求，进行了最大耐受量(MTD)的测定，当小鼠给予硒化低聚糖达16g.kg-1.24h时，结果除给药组有8只小鼠出现稀便外，用药组小鼠与对照组比较其进食、活动、粪便、毛泽等均未见明显差异，观察7d，40只小鼠无一死亡，无明显毒性反应，表明其MTD>16g.kg-1，根据毒性物质的分级标准，本品属无毒物质。药前药后2组小鼠体重如下表。
表1 药物对小鼠体重的影响(x±s) 组别
鼠数(只)
药前(g)
, 百拇医药
(g)
对照组
20
18.69±0.47
21.00±1.36
试验组
20
18.71±0.45
21.63±1.47
从表1可知两组小鼠体重无明显差异，P>0.05。
2.2 硒化低聚糖抗肿瘤活性试验结果
以4.0g.kg-1、3.0g.kg-1、2.0g.kg-1剂量的硒化低聚糖灌胃给药，进行小鼠抗S180的抑瘤试验，结果见下表：表2 硒化低聚糖抗S180的抑瘤实验结果(x±s) 组别
, 百拇医药
鼠数(只)
体重
瘤重
抑瘤率(%)
瘤体系数(%)(瘤重/100g体重)
NS组
2g.kg-1
3g.kg-1
4g.kg-1
FT-207
24
, 百拇医药
12
12
12
12
22.98±3.09
22.16±1.64
22.77±2.59
22.83±2.39
17.08±1.20***
1.085±0.380
0.640±0.482***
, 百拇医药 0.352±0.1***
0.742±0.288***
0.318±0.150***
40.77
67.77
31.48
70.37
4.89±1.83
2.95±2.05***
2.53±1.50***
, 百拇医药 3.13±1.15***
2.06±0.79***
硒化低聚糖抗S180的抑瘤效果与阴性组比***P<0.001，NS对照组最大瘤重2.392g，试验组最大为1.706g。
结果表明3个剂量组小鼠均具有明显的抑瘤作用，其中以中剂量组3.0g.kg-1抑瘤效果最佳，其抑瘤率达67.77%，与FT-207的抑瘤作用(70.37%)接近，低剂量组(2.0g.kg-1)抑瘤作用次之，为40.77%，高剂量组(4.0g.kg-1)抑瘤作用最低，为31.48%，这可能与药物在高浓度下粘度较大，影响吸收，使生物利用度降低有关。
, http://www.100md.com
3 讨论
急性毒性试验表明，硒化低聚糖具有无毒性优点，这对于抗肿瘤药物来说是非常重要的。抗肿瘤活性试验表明，硒化低聚糖具有较强的抗肿瘤活性，与目前最好的抗肿瘤药之一——替加氟片的抗肿瘤效果接近，其活性与所使用剂量间的关系问题需进一步研究。本试验仅对S180进行抑瘤试验，对其他瘤谱的抑瘤作用及临床的抗癌效果有待于深入研究。
参考文献
1，Schwarz K.Selenium as an integral part of factor 3 against dietary necrotic liver degeneration.J Am Chem Soc,1957,79.3292
2，Griffin A C.Role of selenium in the chemoprevertion of cancer.Advances in cancer Research,1979,29：419
, http://www.100md.com
3，Walter M L.Influence of slenium on the growth of N-nitrosomethyhurea-induced mammary tumor cells in culture.Proceedings of the Society for Expeerimental Biology and Medicine,1985,180：33
4，Csallany A S Selenium in Biology and Medicine JulianE S (eds).1981,118
5，Raymond J S selenium deficiency diseases in a nimals.Biochemistry of selenium,Plenum press,New York,1983,31
6，方积年.第十五次国际碳水化合物讨论会介绍.中国药学杂志，1991，26(9)：533
, 百拇医药
7，Franz G.Polysaccharides in Pharmacy current applicayions and future concept.Planta Medica,1989,55:493
8，方积年.多糖研究的现状.药学学报，1986，21：944
9，中国药典(95版)
10，药物化学.彭司勋.化学工业出版社，1988，294
11，新药审批办法及有关法规汇编(一)，卫生部药品审评办公室编，1992，213
12，新药审批办法及有关法规汇编(一)，卫生部药品审评办公室编，1992，215
13，新药研究与开发有关文件汇编，国家新药研究与开发管理办公室编，1993，130
收稿日期：2000-04-20, http://www.100md.com
单位：缪锦来 李光友 杨炳所 贾元印(国家海洋局第一海洋研究所 山东省中医药研究所)
关键词：硒，硒化低聚糖，药理
中国海洋药物000308 摘 要 对小鼠以能允许的最大浓度10%的硒化低聚糖混悬液0.4mL/10g ig，测不出LD50，故根据新药审批办法中对急性毒性的要求，进行了最大耐受量(MTD)的测定，当给予小鼠硒化低聚糖16g.kg-124h，对小鼠未见明显毒性反应，表明其MTD>16g.kg-1。对小鼠S180肉瘤按4.0，2.0g.kg-1的剂量连续灌胃给药9d，各剂量组小鼠均表现出明显的抑瘤作用，其中以中剂量组(3.0g.kg-1)为最佳，其抑瘤率达67.77%，与阳性对照药物替加氟片(FT-207)的抑瘤率(70.37%)接近，低剂量组抑瘤率为40.77%，高剂量组为31.48%。
, 百拇医药
STUDY ON THE ACUTE TOXICITY AND ANTI-TUMOUR EFFECT OF SELENO-OLIGOSACCHARIDES
Miao jinlai
(The first Institute of Oceangraphy, SOA Qingdao 266003)
Li Guangyou
(The first Institute of Oceangraphy, SOA Qingdao 266003)
ABSTRACT In this paper,the acute toxicity and anti-tumour effect of seleno-oligosaccharides prepared by our lab were investigated,and compared with that of Ftorafur(FT-207).Even if rats were given seleno-oligosaccharides 0.4ml/10g ig which was the maximum concentration (10%) that could be allowd,LD50 couldnt be determined.Therefore,according to the requirements of the new drug methed of examination and approval,MTD was determined.When rats were given seleno-oligosaccharides 16g.kg-1.24h,no obriously tozic reaction arised.So,it snowed that MTD of selene oligosaccharioles was beyond 16g.kg-1.When three groups of rats with tumour (S180) continued to be poured into stomach for nine days respectively with 4.0，3.0 and 2.0g.kg-1,three dose groups of rats had obvious antitumor effect.However,the middle dose group(3.0g.kg-1 was best and its anti-tumour rate was up to 67.77%,which was close to that of the positive contrast drug-ftorafur (FT-207),and in the meantime,the low dose group was 40.77% and the high group was 31.48%.
, 百拇医药
KEY WORDS Selenium,seleno-oligosaccharides,pharmacology
自1957年Schwarz K发现缺乏维生素E的饮食中添加微量硒可以防治营养性肝坏死以来[1]，有许多出色的工作揭示了硒在人类防癌抗癌[2，3]、抗衰老[4]、预防和治疗心血管疾病、克山病和大骨节病以及家畜白肌病等方面[5]的重要作用。多糖是天然生物大分子物质，它几乎存在于所有生物体中，是有机体能量的主要物质和结构成分，是一类非特异性免疫增强化合物，能提高机体免疫功能[6～7]，增强抗病能力，有防止衰老、抗癌防癌以及防治肝炎等多方面的生物功能，受到人们的普遍重视。本文使用的硒化低聚糖是通过化学的方法制备，以期获得更强的药理活性，同时又能大大降低硒的毒副作用。本文就本实验室制备的硒化低聚糖药理活性进行了研究。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1材料
受试药物：硒化低聚糖，由海洋红藻Hypnea中提取的硫酸多糖，经过硒化反应制备而成，纯度大于95%，含硒量为0.8mg.g-1。相对分子质量为2500～3000。
对照药物：阳性对照药物替加氟片(FT-207)[9，10]，为济南制药厂产品，生产文号为：鲁卫药准字(1995)第024020，产品批号为980605；阴性对照物是生理盐水。
试验动物：昆明种健康小鼠，由山东医科大学实验动物中心提供，动物合格证号为鲁动质字980102。
1.2方法
1.2.1 硒化低聚糖的急性毒性试验
预试验选取18～20g小鼠10只，给予10%的硒化低聚糖混悬液0.4ml/10g ig，观察24h，以求测LD50。根据新药审批办法[11，12]中关于急性毒性的要求，进行了最大耐受量(MTD)的测定，选18～22g小鼠40只，♂♀各20只，随机分为2组，每组♂♀各10只，禁食8h，分别给予10%的硒化低聚糖悬液0.4ml/10g ig，对照组给予生理盐水0.4ml/10g，24h内给4次，与对照组比较其进食、活动、粪便、毛泽等，于7d再次称体重。
, 百拇医药
1.2.2 硒化低聚糖的抗肿瘤作用实验[12，13]
选19～21g小鼠，左腋下接种S180小鼠腹水稀释液，S180腹水瘤种鼠由山东省医科院药物研究所提供，在无菌条件下抽出腹水，用无菌生理盐水稀释3倍，每鼠接种0.1mL。接种18h后将小鼠随机分为5组，试验组每组♂♀各6只，共12只，对照组根据n=12×(试验组数)1/2=12×41/2=24，分别给硒化低聚糖4.0，3.0，2.0g.kg-1.24h ig，阳性对照组给予FT-207 150mg.kg-1 ig，阴性对照组给予生理盐水0.6ml.10g ig，给药组和阴性对照组为每日分2次给药，分别于8Am、6Pm、阳性对照组为8Am给药1次。连续给药9d，禁食12h,于末次给药24h后称体重后,剖杀各组小鼠，剥离瘤体，于电子天平下称瘤体，分别称体重、瘤重，计算抑瘤率和瘤体系数(瘤体/体重×100%)
, 百拇医药
2 结果
2.1 硒化低聚糖急性毒性试验结果
对小鼠以能允许的最大浓度灌胃给药，测不出LD50，故根据卫生部新药审批办法中急性毒性的实验要求，进行了最大耐受量(MTD)的测定，当小鼠给予硒化低聚糖达16g.kg-1.24h时，结果除给药组有8只小鼠出现稀便外，用药组小鼠与对照组比较其进食、活动、粪便、毛泽等均未见明显差异，观察7d，40只小鼠无一死亡，无明显毒性反应，表明其MTD>16g.kg-1，根据毒性物质的分级标准，本品属无毒物质。药前药后2组小鼠体重如下表。
表1 药物对小鼠体重的影响(x±s) 组别
鼠数(只)
药前(g)
, 百拇医药
(g)
对照组
20
18.69±0.47
21.00±1.36
试验组
20
18.71±0.45
21.63±1.47
从表1可知两组小鼠体重无明显差异，P>0.05。
2.2 硒化低聚糖抗肿瘤活性试验结果
以4.0g.kg-1、3.0g.kg-1、2.0g.kg-1剂量的硒化低聚糖灌胃给药，进行小鼠抗S180的抑瘤试验，结果见下表：表2 硒化低聚糖抗S180的抑瘤实验结果(x±s) 组别
, 百拇医药
鼠数(只)
体重
瘤重
抑瘤率(%)
瘤体系数(%)(瘤重/100g体重)
NS组
2g.kg-1
3g.kg-1
4g.kg-1
FT-207
24
, 百拇医药
12
12
12
12
22.98±3.09
22.16±1.64
22.77±2.59
22.83±2.39
17.08±1.20***
1.085±0.380
0.640±0.482***
, 百拇医药 0.352±0.1***
0.742±0.288***
0.318±0.150***
40.77
67.77
31.48
70.37
4.89±1.83
2.95±2.05***
2.53±1.50***
, 百拇医药 3.13±1.15***
2.06±0.79***
硒化低聚糖抗S180的抑瘤效果与阴性组比***P<0.001，NS对照组最大瘤重2.392g，试验组最大为1.706g。
结果表明3个剂量组小鼠均具有明显的抑瘤作用，其中以中剂量组3.0g.kg-1抑瘤效果最佳，其抑瘤率达67.77%，与FT-207的抑瘤作用(70.37%)接近，低剂量组(2.0g.kg-1)抑瘤作用次之，为40.77%，高剂量组(4.0g.kg-1)抑瘤作用最低，为31.48%，这可能与药物在高浓度下粘度较大，影响吸收，使生物利用度降低有关。
, http://www.100md.com
3 讨论
急性毒性试验表明，硒化低聚糖具有无毒性优点，这对于抗肿瘤药物来说是非常重要的。抗肿瘤活性试验表明，硒化低聚糖具有较强的抗肿瘤活性，与目前最好的抗肿瘤药之一——替加氟片的抗肿瘤效果接近，其活性与所使用剂量间的关系问题需进一步研究。本试验仅对S180进行抑瘤试验，对其他瘤谱的抑瘤作用及临床的抗癌效果有待于深入研究。
参考文献
1，Schwarz K.Selenium as an integral part of factor 3 against dietary necrotic liver degeneration.J Am Chem Soc,1957,79.3292
2，Griffin A C.Role of selenium in the chemoprevertion of cancer.Advances in cancer Research,1979,29：419
, http://www.100md.com
3，Walter M L.Influence of slenium on the growth of N-nitrosomethyhurea-induced mammary tumor cells in culture.Proceedings of the Society for Expeerimental Biology and Medicine,1985,180：33
4，Csallany A S Selenium in Biology and Medicine JulianE S (eds).1981,118
5，Raymond J S selenium deficiency diseases in a nimals.Biochemistry of selenium,Plenum press,New York,1983,31
6，方积年.第十五次国际碳水化合物讨论会介绍.中国药学杂志，1991，26(9)：533
, 百拇医药
7，Franz G.Polysaccharides in Pharmacy current applicayions and future concept.Planta Medica,1989,55:493
8，方积年.多糖研究的现状.药学学报，1986，21：944
9，中国药典(95版)
10，药物化学.彭司勋.化学工业出版社，1988，294
11，新药审批办法及有关法规汇编(一)，卫生部药品审评办公室编，1992，213
12，新药审批办法及有关法规汇编(一)，卫生部药品审评办公室编，1992，215
13，新药研究与开发有关文件汇编，国家新药研究与开发管理办公室编，1993，130
收稿日期：2000-04-20, http://www.100md.com