高效液相色谱法测定克痨宁胶囊中黄芩苷的含量
作者：丁野 张嘉乐
单位：湖南省药品检验所 长沙 410001
关键词：胶囊，克痨宁；黄芩苷；高效液相色谱法
中国药师000422
摘 要 目的： 测定克痨宁胶囊中黄芩苷的含量。 方法： 高效液相色谱法。 Spherisorb-C18柱， 甲醇-水-磷酸(43∶57∶0.2)为流动相， 检测波长为280 nm。 结果：克痨宁胶囊中黄芩苷与多种杂质能有效分离。 黄芩苷在0.100 2～1.002 μg线性关系良好， r=0.999 9， 平均回收率为101.2 %， RSD为1.1 %。 结论： 本方法简便， 快速， 准确。
Determination of Baicalin in the Capsule of Kelaoning by HPLC
, http://www.100md.com
Ding Ye, Zhang Jiale
(Hunan Institute for Drug Control, Changsha 410001, P.R.China)
ABSTRACT Objective: To determine the content of Baicalin in Kelaoning Capsule. Method: HPLC was used. Chromatographic conditions included Spherisorb C18(150mm×4.6mm) column and the mobile phase waa methonal-water-phosphoric acid(43∶57∶0.2). The UV detecting wavelength was at 280nm. Results: A satisfactory seperation between Baicalin and impurities was obtained. The calibration curves was linear in the range of 0.1002-1.002μg for Baicalin. The average recovery was 101.2% (RSD=1.11%). Conclusion: This method is simple, quick and accurative.
, 百拇医药
KEY WORDS Kelaoning capsule; Baicalin; HPLC
克痨宁胶囊由苦荬菜、 黄芩、 北沙参、 太子参等9味中药组成， 具清热化痰， 润肺杀虫的功效。 我们采用高效液相色谱法测定了黄芩中主要成分黄芩苷的含量， 为控制成药质量标准提供了依据。
1 仪器与试药
美国SP-8800高效液相色谱仪， Spectra 200检测器， C-R2AX数据处理机， CQ250超声清洗器(上海必能信超声有限公司)。
黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所， 纯度：98.75 %)， 甲醇(色谱纯)， 其他试剂均为AR级。 克痨宁胶囊与缺黄芩的阴性样品由湖南省泰来医药发展有限公司提供。
2 色谱条件
, 百拇医药
Spherisorb C18(4.6 mm×150 mm)色谱柱， 流动相： 甲醇-水-磷酸(43∶57∶0.2)， 流速：1 ml*min-1， 检测波长为280 nm， 灵敏度： 0.05AUFS， 进样量：10 μl。
3 标准曲线及供试品溶液的制备
标准曲线的制备： 精密称取在60 ℃真空干燥4 h的黄芩苷对照品适量， 加甲醇制成每1 ml含100.2 μg的溶液， 再分别稀释配制成80.16， 60.12， 40.08， 20.04， 10.02 μg*ml-1的对照品溶液， 按上述色谱条件测定， 以对照品浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线， 计算回归方程A=1.069×105C-1.271×103 r=0.999 9， 结果表明黄芩苷在0.100 2～1.002 μg范围内呈良好的线性关系。
, 百拇医药
对照品溶液制备： 精密称取在60℃真空干燥4 h的黄芩苷对照品适量， 加甲醇制成每1 ml含50μg的溶液， 作为对照品溶液。
供试品溶液制备： 取装量差异项下的内容物， 研细， 取约1 g， 精密称定， 精密加70 %乙醇50 ml， 称定重量， 超声处理40 min， 放冷， 称定重量， 加70 %乙醇补足减失的重量， 滤过， 弃去初滤液， 精密量取续滤液2 ml置10 ml量瓶中， 加甲醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 滤液作为供试品溶液。
阴性干扰情况的考察： 照上述供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液， 按上述色谱条件测定， 结果表明阴性对照品无干扰， 结果见图1。
A.对照品 B.阴性样品 C.供试品
图1 高效液相色谱图
4 精密度试验
, 百拇医药
精密吸取同一供试品溶液， 重复进行测定5次， 记录峰面积， RSD为0.4 %， 结果表明精密度良好。
5 稳定性试验
取同一批号供试品溶液分别在0， 2， 4， 6， 8， 10 h进行测定， 结果表明在10 h内基本稳定(RSD为1.2 %)。
6 重现性试验
取同一批号样品， 分别取样5份， 照“含量测定”项下方法测定， 分别测定供试品峰面积积分值， 计算含量结果表明本方法重现性好(RSD为1.3 %)。
7 加样回收率试验
精密称取已知含量为7.49 mg/粒(平均装量为0.515 3 g/粒)样品5份， 分别精密加入黄芩苷对照品3. 052 0 mg， 接正文“含量测定”项下的方法测定， 结果见表1。
, 百拇医药
表1 回收率测定结果 编
号
取量
量
(g)
样品中黄
芩苷的量
(mg)
添加的黄
芩苷量
(mg)
测出的黄
芩苷量
, 百拇医药
(mg)
回收
率
(%)
平 均
回收率
(%)
RSD
(%)
1
0.2402
3.4912
3.0520
, http://www.100md.com
6.5559
100.4
2
0.2534
3.6830
3.0520
6.7732
101.2
3
0.2593
3.7688
3.0520
6.9036
, 百拇医药
102.7
101.2
1.1
4
0.2392
3.4766
3.0520
6.5235
99.8
5
0.2586
3.7586
3.0520
, http://www.100md.com
6.8640
101.7
8 样品测定与结果
按上述色谱条件测定样品， 用外标法根据峰面积计算样品中黄芩苷的含量， 结果见表2。表2 样品测定结果(mg/粒，n=3) 批 号
含 量(mg)
RSD(%)
980503
6.36
1.6
980513
7.64
, 百拇医药
1.0
980523
6.49
1.1
9 讨论
用于黄芩苷含量测定的方法文献报道较多， 其中有比色法、 薄层扫描法、 高效液相色谱法等， 其中以高效液相色谱法较简便。 本实验流动相选择了甲醇-水-磷酸(55∶45∶0.1)， (50∶50∶0.1)， (43∶57∶0.2)等进行考察， 结果以甲醇-水-磷酸(43∶57∶0.2)分离效果好； 考察了样品提取时间30， 40， 50 min， 结果表明超声40 min样品中黄芩苷基本被提取完全； 另外比较了样品的提取溶剂70 %乙醇与甲醇， 结果以70 %乙醇作提取溶剂的供试品溶液杂质少， 黄芩苷峰易与其它峰达到基线分离， 实验证明本方法简易、 快速、 分离效果好。 参 考 文 献
1，中国药典. 1995. 一部. 270
2，国家医药管理局中草药情报中心站编著. 植物药有效成分手册. 第1版. 北京： 人民卫生出版社. 1986.111～112
3，王宝琴. 中成药质量标准与标准物质研究. 第1版. 北京： 中国医药科技出版社. 1994.226
2000-01-12 收稿 2000-06-12 修回, 百拇医药
单位：湖南省药品检验所 长沙 410001
关键词：胶囊，克痨宁；黄芩苷；高效液相色谱法
中国药师000422
摘 要 目的： 测定克痨宁胶囊中黄芩苷的含量。 方法： 高效液相色谱法。 Spherisorb-C18柱， 甲醇-水-磷酸(43∶57∶0.2)为流动相， 检测波长为280 nm。 结果：克痨宁胶囊中黄芩苷与多种杂质能有效分离。 黄芩苷在0.100 2～1.002 μg线性关系良好， r=0.999 9， 平均回收率为101.2 %， RSD为1.1 %。 结论： 本方法简便， 快速， 准确。
Determination of Baicalin in the Capsule of Kelaoning by HPLC
, http://www.100md.com
Ding Ye, Zhang Jiale
(Hunan Institute for Drug Control, Changsha 410001, P.R.China)
ABSTRACT Objective: To determine the content of Baicalin in Kelaoning Capsule. Method: HPLC was used. Chromatographic conditions included Spherisorb C18(150mm×4.6mm) column and the mobile phase waa methonal-water-phosphoric acid(43∶57∶0.2). The UV detecting wavelength was at 280nm. Results: A satisfactory seperation between Baicalin and impurities was obtained. The calibration curves was linear in the range of 0.1002-1.002μg for Baicalin. The average recovery was 101.2% (RSD=1.11%). Conclusion: This method is simple, quick and accurative.
, 百拇医药
KEY WORDS Kelaoning capsule; Baicalin; HPLC
克痨宁胶囊由苦荬菜、 黄芩、 北沙参、 太子参等9味中药组成， 具清热化痰， 润肺杀虫的功效。 我们采用高效液相色谱法测定了黄芩中主要成分黄芩苷的含量， 为控制成药质量标准提供了依据。
1 仪器与试药
美国SP-8800高效液相色谱仪， Spectra 200检测器， C-R2AX数据处理机， CQ250超声清洗器(上海必能信超声有限公司)。
黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所， 纯度：98.75 %)， 甲醇(色谱纯)， 其他试剂均为AR级。 克痨宁胶囊与缺黄芩的阴性样品由湖南省泰来医药发展有限公司提供。
2 色谱条件
, 百拇医药
Spherisorb C18(4.6 mm×150 mm)色谱柱， 流动相： 甲醇-水-磷酸(43∶57∶0.2)， 流速：1 ml*min-1， 检测波长为280 nm， 灵敏度： 0.05AUFS， 进样量：10 μl。
3 标准曲线及供试品溶液的制备
标准曲线的制备： 精密称取在60 ℃真空干燥4 h的黄芩苷对照品适量， 加甲醇制成每1 ml含100.2 μg的溶液， 再分别稀释配制成80.16， 60.12， 40.08， 20.04， 10.02 μg*ml-1的对照品溶液， 按上述色谱条件测定， 以对照品浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线， 计算回归方程A=1.069×105C-1.271×103 r=0.999 9， 结果表明黄芩苷在0.100 2～1.002 μg范围内呈良好的线性关系。
, 百拇医药
对照品溶液制备： 精密称取在60℃真空干燥4 h的黄芩苷对照品适量， 加甲醇制成每1 ml含50μg的溶液， 作为对照品溶液。
供试品溶液制备： 取装量差异项下的内容物， 研细， 取约1 g， 精密称定， 精密加70 %乙醇50 ml， 称定重量， 超声处理40 min， 放冷， 称定重量， 加70 %乙醇补足减失的重量， 滤过， 弃去初滤液， 精密量取续滤液2 ml置10 ml量瓶中， 加甲醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 滤液作为供试品溶液。
阴性干扰情况的考察： 照上述供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液， 按上述色谱条件测定， 结果表明阴性对照品无干扰， 结果见图1。
A.对照品 B.阴性样品 C.供试品
图1 高效液相色谱图
4 精密度试验
, 百拇医药
精密吸取同一供试品溶液， 重复进行测定5次， 记录峰面积， RSD为0.4 %， 结果表明精密度良好。
5 稳定性试验
取同一批号供试品溶液分别在0， 2， 4， 6， 8， 10 h进行测定， 结果表明在10 h内基本稳定(RSD为1.2 %)。
6 重现性试验
取同一批号样品， 分别取样5份， 照“含量测定”项下方法测定， 分别测定供试品峰面积积分值， 计算含量结果表明本方法重现性好(RSD为1.3 %)。
7 加样回收率试验
精密称取已知含量为7.49 mg/粒(平均装量为0.515 3 g/粒)样品5份， 分别精密加入黄芩苷对照品3. 052 0 mg， 接正文“含量测定”项下的方法测定， 结果见表1。
, 百拇医药
表1 回收率测定结果 编
号
取量
量
(g)
样品中黄
芩苷的量
(mg)
添加的黄
芩苷量
(mg)
测出的黄
芩苷量
, 百拇医药
(mg)
回收
率
(%)
平 均
回收率
(%)
RSD
(%)
1
0.2402
3.4912
3.0520
, http://www.100md.com
6.5559
100.4
2
0.2534
3.6830
3.0520
6.7732
101.2
3
0.2593
3.7688
3.0520
6.9036
, 百拇医药
102.7
101.2
1.1
4
0.2392
3.4766
3.0520
6.5235
99.8
5
0.2586
3.7586
3.0520
, http://www.100md.com
6.8640
101.7
8 样品测定与结果
按上述色谱条件测定样品， 用外标法根据峰面积计算样品中黄芩苷的含量， 结果见表2。表2 样品测定结果(mg/粒，n=3) 批 号
含 量(mg)
RSD(%)
980503
6.36
1.6
980513
7.64
, 百拇医药
1.0
980523
6.49
1.1
9 讨论
用于黄芩苷含量测定的方法文献报道较多， 其中有比色法、 薄层扫描法、 高效液相色谱法等， 其中以高效液相色谱法较简便。 本实验流动相选择了甲醇-水-磷酸(55∶45∶0.1)， (50∶50∶0.1)， (43∶57∶0.2)等进行考察， 结果以甲醇-水-磷酸(43∶57∶0.2)分离效果好； 考察了样品提取时间30， 40， 50 min， 结果表明超声40 min样品中黄芩苷基本被提取完全； 另外比较了样品的提取溶剂70 %乙醇与甲醇， 结果以70 %乙醇作提取溶剂的供试品溶液杂质少， 黄芩苷峰易与其它峰达到基线分离， 实验证明本方法简易、 快速、 分离效果好。 参 考 文 献
1，中国药典. 1995. 一部. 270
2，国家医药管理局中草药情报中心站编著. 植物药有效成分手册. 第1版. 北京： 人民卫生出版社. 1986.111～112
3，王宝琴. 中成药质量标准与标准物质研究. 第1版. 北京： 中国医药科技出版社. 1994.226
2000-01-12 收稿 2000-06-12 修回, 百拇医药