贯叶连翘中金丝桃素的测定
作者：张健 李俊 李芳 莫琪
单位：桂林 541004 广西师范大学化学与生 命科学学院
关键词：金丝桃素；贯叶连翘；测试
中国现代应用药学000410 摘要 目的：建立贯叶连翘中金丝桃素的测定方 法。方法：采用紫外可见光谱测试，在589nm处有特征吸收。 结果：样品的平均加样回收率为99.27%，精密度及稳定性的相对标准偏差分别为0.1 9%及0.55%。结论：本法可以作为企业生产贯叶连翘提取物的质量控制测 试方法。
Determination of hypericin in hypericum perforatum L.
Zhang Jian(Zhang J)，Li Jun(Li J)，Li Fang(Li F)，et al
, 百拇医药
(Col lege of Chemistry and Bio-Science，Guangxi Normal University，Guiling 541004)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for the determination of hypericin in hyericum perforatum L.METHODS:UV spect rometry was used for the determination.The maximum absorption wavelength was at 589nm.RESULTS:The average recovery was 99.27%.The RSD of precision and stability are 0.19% and 0.55%，respectively.CONCLUSION:The method can be used in factory for the determination of hypericin.
, 百拇医药
KEY WORDS Hypericum，hyericum perforatum L.，determine
出产于我国西南与西北部的植物贯叶连翘(Hypericum perforafum L.)含有一种天然蒽醌 类物质金丝桃素(Hypericin)。由于金丝桃素在临床中显示抗抑郁、抑制中枢神经及抗病毒 的作用，使其在医学上已得到应用，最近的研究表明，金丝桃素有显著的抗DNA、RNA病毒作 用，可用于爱滋病的治疗，通过对与其结构相似的一些蒽酮化合物抗逆转录病毒(包括抗人 类免疫缺陷病毒HIV)的药理研究，发现金丝桃素的作用最为突出[1]。目前国外已 将金丝桃素与蛋白结合用于临床治疗爱滋病。
金丝桃素在贯叶连翘全草中含量为万分之几 ，对于它的提取及测试有一定的要求，我们在实验中探索了从贯叶连翘全草中提取金丝桃素 的工艺，并将其运用到了工业生产中[2]，金丝桃素的含量采用紫外可见光谱来测试 ，为生产提供质量控制的手段。
, http://www.100md.com
1 实验药品与仪器
1.1 试剂及原料 贯叶连翘提取物(由本课题组实验制备，全草采自贵州安顺)； 金丝桃素对照品(简称HP，Sigama公司)；甲醇(AR)；氯仿(AR)。
1.2 仪器 紫外/可见分光光度计U-3400(岛津公司)；电子天平(Sartor ius，德国产，精确至万分之一克)；恒温水浴槽、索氏提取器。
2 方 法
2.1 准确称取金丝桃素对照品0.0026g ，将其溶于甲醇并转移至25ml量瓶中，然后各取一定量将其配成5种浓度分别不同的溶液，在 紫外可见光谱下扫描，确定其特征峰，以浓度为横坐标，吸光度(ABS)为纵坐标，作金丝桃 素的标准曲线图。
2.2 在电子天平上准确称取已制备好的贯叶连翘提 取物0.1g，置于索氏提取器中，用氯仿洗涤，除去其中的酯溶性干扰物质，1h后取出凉干。
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2.3 将已处理好的贯叶连翘提取物样品用甲醇配成溶液，定容后测试 样品的精密度、稳定性及样品的加样回收率，考查这些数据以确定测试方法的可靠性。
3 结果与讨论
3.1 标准曲线 对金丝桃素进行紫外 可见光谱范围内的扫描，发现其在589nm处有最大吸收，如图1所示。这一吸收峰处于可见光 区，主要是由于金丝桃素属脱去一分子氢的二聚蒽酮，其α-羟基数目较 多，因此吸收峰向长波方向移动。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，作出的HP工作曲线， 测试数据如表1。用最小二乘法拟合得到标准曲线(如图2所示)及回归方程。其回归方程为y=21.412x-0.0143，相关系数r为0.9976。
图1 HP对照品及贯叶连翘提取物UV扫描图谱
1-HP对照品；2-贯叶连翘提取物
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表1 标准曲线数据 序 号
浓度/mg.ml-1
ABS
1
0.0052
0.1175
2
0.0104
0.2044
3
0.0208
0.4132
, 百拇医药
4
0.0312
0.6297
5
0.0416
0.9018
图2 HP标准曲线图
3.2 样品测试精密度 将同一批号的样品，按1.2方法配成溶液，然后对 其进行紫外可见光谱扫描，在标准特征峰处测定其吸收峰值，计算样品中金丝桃素的含量， 重复测定7次，其结果如表2所示，样品精密度的变异系数为0.19%。样品中HP平均含量为0.7 1%。
3.3 稳定性考查 考查了样品溶液配制之后6h内其在589nm处 的吸光度，其吸收值基本保持不变，如表3所示，因此样品溶液在6h内基本稳定，R SD为0.55%。
, 百拇医药
表2 样品精密度测试数据 序 号
ABS
a%
RSD/ %
1
0.5048
0.7135
2
0.5066
0.7161
3
0.5055
0.7145
, http://www.100md.com
4
0.5065
0.7159
0.19
5
0.5087
0.7191
6
0.5056
0.7147
7
0.5074
0.7172
, 百拇医药
表3 稳定性数据 时间/h
ABS
a%
RSD/ %
0
0.5089
0.7193
1
0.5092
0.7197
2
0.5070
0.7166
, 百拇医药
3
0.5079
0.7179
0.55
4
0.5065
0.7159
5
0.5060
0.7152
6
0.5068
0.7163
, 百拇医药
3.4 回收率测定结果 在样品中加入金丝桃素对照品，按处理样品的方 法处理后，测定其紫外吸收值，计算其回收率。结果见表4所示。样品的平均加样回收率为9 9.27%，RSD为0.17%。表4 加样回收率结果 测定序号
样品HP
含量
加标品量
实际含量
测定结果
回收率/%
1
0.0068
0.0048
, http://www.100md.com 0.0116
0.0115
99.14
2
0.0068
0.0052
0.0120
0.0119
99.17
3
0.0080
0.0048
0.0128
, 百拇医药
0.0127
99.22
4
0.0080
0.0052
0.0132
0.0131
99.24
5
0.0120
0.0108
0.0228
0.0227
, http://www.100md.com
99.56
4 结 论
以紫外可见光谱扫描法测定贯 叶连翘中金丝桃素含量的方法精密度好，样品的平均加样回收率高，在样品配成溶液当天测 试的稳定性亦可保证。因此，这一方法可作为企业生产贯叶连翘金丝桃素的产品测试方法。
参考文献
[1]潘映红，郭宝林.国产金丝桃属植物有效成分研究概况. 中药材，1993，6(8)∶40.
[2]李俊，莫琪，张健.乙醇法提取金丝桃素的研究.现代化 工，1998，8(8)∶27.
收稿日期：1999-04-08, http://www.100md.com
单位：桂林 541004 广西师范大学化学与生 命科学学院
关键词：金丝桃素；贯叶连翘；测试
中国现代应用药学000410 摘要 目的：建立贯叶连翘中金丝桃素的测定方 法。方法：采用紫外可见光谱测试，在589nm处有特征吸收。 结果：样品的平均加样回收率为99.27%，精密度及稳定性的相对标准偏差分别为0.1 9%及0.55%。结论：本法可以作为企业生产贯叶连翘提取物的质量控制测 试方法。
Determination of hypericin in hypericum perforatum L.
Zhang Jian(Zhang J)，Li Jun(Li J)，Li Fang(Li F)，et al
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(Col lege of Chemistry and Bio-Science，Guangxi Normal University，Guiling 541004)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for the determination of hypericin in hyericum perforatum L.METHODS:UV spect rometry was used for the determination.The maximum absorption wavelength was at 589nm.RESULTS:The average recovery was 99.27%.The RSD of precision and stability are 0.19% and 0.55%，respectively.CONCLUSION:The method can be used in factory for the determination of hypericin.
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KEY WORDS Hypericum，hyericum perforatum L.，determine
出产于我国西南与西北部的植物贯叶连翘(Hypericum perforafum L.)含有一种天然蒽醌 类物质金丝桃素(Hypericin)。由于金丝桃素在临床中显示抗抑郁、抑制中枢神经及抗病毒 的作用，使其在医学上已得到应用，最近的研究表明，金丝桃素有显著的抗DNA、RNA病毒作 用，可用于爱滋病的治疗，通过对与其结构相似的一些蒽酮化合物抗逆转录病毒(包括抗人 类免疫缺陷病毒HIV)的药理研究，发现金丝桃素的作用最为突出[1]。目前国外已 将金丝桃素与蛋白结合用于临床治疗爱滋病。
金丝桃素在贯叶连翘全草中含量为万分之几 ，对于它的提取及测试有一定的要求，我们在实验中探索了从贯叶连翘全草中提取金丝桃素 的工艺，并将其运用到了工业生产中[2]，金丝桃素的含量采用紫外可见光谱来测试 ，为生产提供质量控制的手段。
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1 实验药品与仪器
1.1 试剂及原料 贯叶连翘提取物(由本课题组实验制备，全草采自贵州安顺)； 金丝桃素对照品(简称HP，Sigama公司)；甲醇(AR)；氯仿(AR)。
1.2 仪器 紫外/可见分光光度计U-3400(岛津公司)；电子天平(Sartor ius，德国产，精确至万分之一克)；恒温水浴槽、索氏提取器。
2 方 法
2.1 准确称取金丝桃素对照品0.0026g ，将其溶于甲醇并转移至25ml量瓶中，然后各取一定量将其配成5种浓度分别不同的溶液，在 紫外可见光谱下扫描，确定其特征峰，以浓度为横坐标，吸光度(ABS)为纵坐标，作金丝桃 素的标准曲线图。
2.2 在电子天平上准确称取已制备好的贯叶连翘提 取物0.1g，置于索氏提取器中，用氯仿洗涤，除去其中的酯溶性干扰物质，1h后取出凉干。
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2.3 将已处理好的贯叶连翘提取物样品用甲醇配成溶液，定容后测试 样品的精密度、稳定性及样品的加样回收率，考查这些数据以确定测试方法的可靠性。
3 结果与讨论
3.1 标准曲线 对金丝桃素进行紫外 可见光谱范围内的扫描，发现其在589nm处有最大吸收，如图1所示。这一吸收峰处于可见光 区，主要是由于金丝桃素属脱去一分子氢的二聚蒽酮，其α-羟基数目较 多，因此吸收峰向长波方向移动。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，作出的HP工作曲线， 测试数据如表1。用最小二乘法拟合得到标准曲线(如图2所示)及回归方程。其回归方程为y=21.412x-0.0143，相关系数r为0.9976。
图1 HP对照品及贯叶连翘提取物UV扫描图谱
1-HP对照品；2-贯叶连翘提取物
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表1 标准曲线数据 序 号
浓度/mg.ml-1
ABS
1
0.0052
0.1175
2
0.0104
0.2044
3
0.0208
0.4132
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4
0.0312
0.6297
5
0.0416
0.9018
图2 HP标准曲线图
3.2 样品测试精密度 将同一批号的样品，按1.2方法配成溶液，然后对 其进行紫外可见光谱扫描，在标准特征峰处测定其吸收峰值，计算样品中金丝桃素的含量， 重复测定7次，其结果如表2所示，样品精密度的变异系数为0.19%。样品中HP平均含量为0.7 1%。
3.3 稳定性考查 考查了样品溶液配制之后6h内其在589nm处 的吸光度，其吸收值基本保持不变，如表3所示，因此样品溶液在6h内基本稳定，R SD为0.55%。
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表2 样品精密度测试数据 序 号
ABS
a%
RSD/ %
1
0.5048
0.7135
2
0.5066
0.7161
3
0.5055
0.7145
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4
0.5065
0.7159
0.19
5
0.5087
0.7191
6
0.5056
0.7147
7
0.5074
0.7172
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表3 稳定性数据 时间/h
ABS
a%
RSD/ %
0
0.5089
0.7193
1
0.5092
0.7197
2
0.5070
0.7166
, 百拇医药
3
0.5079
0.7179
0.55
4
0.5065
0.7159
5
0.5060
0.7152
6
0.5068
0.7163
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3.4 回收率测定结果 在样品中加入金丝桃素对照品，按处理样品的方 法处理后，测定其紫外吸收值，计算其回收率。结果见表4所示。样品的平均加样回收率为9 9.27%，RSD为0.17%。表4 加样回收率结果 测定序号
样品HP
含量
加标品量
实际含量
测定结果
回收率/%
1
0.0068
0.0048
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0.0115
99.14
2
0.0068
0.0052
0.0120
0.0119
99.17
3
0.0080
0.0048
0.0128
, 百拇医药
0.0127
99.22
4
0.0080
0.0052
0.0132
0.0131
99.24
5
0.0120
0.0108
0.0228
0.0227
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99.56
4 结 论
以紫外可见光谱扫描法测定贯 叶连翘中金丝桃素含量的方法精密度好，样品的平均加样回收率高，在样品配成溶液当天测 试的稳定性亦可保证。因此，这一方法可作为企业生产贯叶连翘金丝桃素的产品测试方法。
参考文献
[1]潘映红，郭宝林.国产金丝桃属植物有效成分研究概况. 中药材，1993，6(8)∶40.
[2]李俊，莫琪，张健.乙醇法提取金丝桃素的研究.现代化 工，1998，8(8)∶27.
收稿日期：1999-04-08, http://www.100md.com