单扫描示波极谱法测定血清中佐匹克隆含量
作者：刘燕娥 王玉瑾 张加玲
单位：刘燕娥(山西职工医学院中心实验室，太原 030012)；王玉瑾(山西医科大学法医学系)；张加玲(山西医科大学公共卫生学院)
关键词：极谱法，单扫描示波；佐匹克隆；血清
山西医科大学学报000413 摘要：目的 建立了单扫描示波极谱法测定血清中佐匹克隆的方法。方法 样品在pH 6.86条件下用二氯甲烷/异戊醇(98∶2)提取，在0.1 m ol/L盐酸溶液中用单扫描示波极谱法测定佐匹克隆的导数波高。结果 导数波高与佐匹克隆浓度在0.03 mg/L～5 mg/L范围内呈线性关系，最低检出浓度为0. 02 mg/L。平均提取回收率为78.9%，相对标准差为4.9%。结论 本方 法简便快速，可用于血清中佐匹克隆的测定。
中图分类号：R971+.3 文献标识码：A
, http://www.100md.com
文章编号：1007-6611(2000)04-0319-02
Determination of zopiclone by single sweep oscillopolarography
LIU Yan-e WANG Yu-jin ZHANG Jia-ling
(Shanxi Adult Medical College,Taiyuan 030012,China)
Abstract:Objective To establish a sin gle sweep oscillopolarigraphic method for determination of zopiclone in human se rum. Method The samples were adjusted to pH 6.86, extracted with dichlorme thane-isoamylalcohol(98:2)and determined the height of derivative wave in 0.1mol /L HCl solution.Results The linearrange was 0.03～5 mg/L and the detectio n limit was 0.02 mg/L. The average recovery was 78.9% and RSD was 4.9%. Conclu sion The method is rapid,simple and suitable for determination of zopiclone c oncentration in serum.
, 百拇医药
Key words:single sweep oscillopolarography；zopiclone；serum
佐匹克隆(zopiclone)是一种新型安眠镇静药物，属于环吡咯酮衍生物。 它与第一代安眠药(巴比妥类)、第二代安眠镇静药(苯骈二氮杂(艹)/(卓)类)比较，最大优点是 高效低毒，作用迅速，连续服用无蓄积作用，停药后无戒断反应和失眠返跳现象，被誉为第 三代安眠药[1]。佐匹克隆的血药浓度测定方法有HPLC法[2]、GC法 [3]和薄层荧光扫描法[4-5]。应用极谱法测定佐匹克隆含量，国内外文献未 见报道。本研究采用单扫描示波极谱法，在0.1 mol/L盐酸溶液中，微量佐匹克隆可产生一 个灵敏度较高的极谱还原波。根据佐匹克隆在一定浓度范围内与波高有良好的线性关系，测 定了血清中佐匹克隆含量，取得了满意的结果。
1 仪器与试药
, 百拇医药
1.1 仪器 JP-1A型示波极谱仪(成都仪器厂)、三电极系统。电热恒温水浴锅(北京)、 电动离心机(江苏)、旋涡混合器(北京)。
1.2 试药 佐匹克隆标准溶液：准确称取佐匹克隆对照品(沈阳药科大学药物研究所提供 ，含量为98.5%)溶于pH=3的盐酸溶液中，配制成1 g/L的贮备液。使用时用pH＝3的盐酸溶 液逐级稀释。
二氯甲烷、异戊醇等试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 分析条件 取一定量佐匹克隆标准溶液置于10 ml烧杯中，加入0.1 mol/L的盐酸溶液8 .0 ml，在示波极谱仪上以-0.20 V为起扫电位进行阴极化扫描，于-0.40 V处记录佐匹克隆 的导数波高。其导数示波极谱图见图1。
, 百拇医药
图1 佐匹克隆导数示波极谱图
2.2 底液选择 分别测定了佐匹克隆在硼砂、六次甲基四胺、醋酸─醋酸钠缓冲液、氨 水─氯化铵缓冲液、盐酸及硫酸等介质中的极谱波，其中在0.1 mol/L的盐酸介质中极谱波 峰形好，灵敏度高且稳定，故选用0.1 mol/L的盐酸溶液作为底液。
2.3 标准曲线制备 精密吸取不同量的佐匹克隆标准溶液于10 ml烧杯中，加入 0.1 mol/L的盐酸溶液8.0 ml，在分析条件下测量导数波高(H)，结果发现，药物浓 度在0.03 ～0.1 mg/L、0.1～1 mg/L和1～5 mg/L三个不同数量级 范围内与波高均有良好的线性关系，但其斜率不同。经对0.1～1 mg/L范围内 的佐匹克隆浓度对波高进行线性回归，得回归方程为：
H=22.762 4C-0.018 5 r＝0.992 8
, http://www.100md.com 对佐匹克隆浓度逐级稀释并测其导数波 高，当药物浓度低于0.02 mg/L时，导数波高便测不出，由此得最低检出浓度为0.02 mg/L。
2.4 血清中佐匹克隆提取回收率、精密度测定 精密吸取空白血清1.0 ml，共15份 ，分别加入1 g/L的佐匹克隆标准溶液1.0，2.0，4.0 μl,每种浓度各5份，加pH为6 .86的磷酸盐缓冲液1.0 ml，二氯甲烷/异丙醇(98∶2)混合溶剂3.0 ml，振摇10 min ，离心10 min(3 000 r/min)，弃去水层，有机层于70 ℃水浴挥干。残渣加0.1 mol/L的 盐酸溶液8.0 ml，溶解后转入10 ml烧杯中，在分析条件下测量导数波高。 分别求得三种浓度佐匹克隆的提取回收率及精密度，结果见表1。
表1 佐匹克隆提取回收率及精密度 (n=5) 药物加入量
(μg)
, http://www.100md.com 平均测得量
(μg)
平均回收率
(%)
RSD(%)
1.000
0.766±0.038
76.6
5.5
2.000
1.590±0.076
79.5
4.8
, 百拇医药
4.000
3.220±0.142
80.5
4.4
平均
78.9
4.9
表2 家兔血清中佐匹克隆含量 (n =3) 时间(h)
血药浓度(mg/L)
0.5
0.30±0.021
1
, http://www.100md.com
0.81±0.040
2
0.93±0.032
3
0.37±0.024
5
0.26±0.014
7
0.19±0.027
2.5 样品测定 健康家兔3只，平均体重2.2±0.4 kg，雌雄兼用，实验前隔夜禁食。按 成 人每日最大用量100倍剂量体表面积换算，佐匹克隆88 mg溶于水中给家兔灌胃(40 mg/kg) 。 于给药前及给药后不同时间颈动脉取血约2.5 ml，离心取血清1.0 ml。同时取空白血清3 份 ，分别加入相同量的佐匹克隆标准溶液，使空白血清中加入的药物量与样品中药物含量相接 近，按2.4项下步骤平行操作，在线性范围内用直接比较法定量测定血清样品中佐匹克隆含 量。结果见表2。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 极谱波性质研究 分别测量了汞柱高度、起扫电位、温度及表面活性剂对极谱波高的 影响，发现波高与汞柱高度成正比；起扫电位越接近波电位则波高越高，最后达到极限值； 在10～50 ℃范围内温度系数为正值，达1.3%，当温度低于10 ℃时，出现双波，波高几乎相 等 ；表面活性剂明胶、十二烷基磺酸钠、聚乙烯醇等均不同程度地使波高降低，波形不规则。 以上实验结果均表明，该波是一极谱扩散波。
3.2 佐匹克隆在中性条件下溶于氯仿、二氯甲烷、乙腈等，在pH 3条件下溶于水。 血清中佐匹克隆经有机相提取后必须蒸干方能用pH 3的盐酸溶液溶解测定，否则使 测定结果偏低。
3.3 本方法简便快速，灵敏度、准确度均能满足一般临床分析的要求，适于基层 实验室佐匹克隆血药浓度的检测。
作者简介：刘燕娥，女，1960年12月生，本科，副教授.
, http://www.100md.com
参考文献：
[1]张雅芳，左代姝，田科鹏，等. 新型镇静催眠药──Zopiclone的研制[J]. 中国药物化学杂志， 1994, 4 (1): 62.
[2]Miller LG, Leduc BW, Greenblatt DJ. Determination of zopiclone in plasma by liquid chromatography with application to steady-state mon itoring[J]. J Chromatogr, 1986, 380: 211.
[3]Debruyue D,Lacotte J,Hurault DLB,et al. Determination of zo piclone and zopidem in serum by capillary colume gas chroma-tography[J]. J Ph arm Sci, 1 991, 80 (1): 71.
[4]王玉瑾，张加玲，吴克明，等.佐匹克隆的薄层荧光测定及在中毒家兔 体内的分布研究[J].药物分析杂志， 1998, 18 (3): 153.
[5]王玉瑾，刘燕娥，张加玲.荧光分光光度法测定血清中佐匹克隆含量[ J]. 山西医科大学学报，1999, 30 (4): 379.
收稿日期：2000-03-24, 百拇医药
单位：刘燕娥(山西职工医学院中心实验室，太原 030012)；王玉瑾(山西医科大学法医学系)；张加玲(山西医科大学公共卫生学院)
关键词：极谱法，单扫描示波；佐匹克隆；血清
山西医科大学学报000413 摘要：目的 建立了单扫描示波极谱法测定血清中佐匹克隆的方法。方法 样品在pH 6.86条件下用二氯甲烷/异戊醇(98∶2)提取，在0.1 m ol/L盐酸溶液中用单扫描示波极谱法测定佐匹克隆的导数波高。结果 导数波高与佐匹克隆浓度在0.03 mg/L～5 mg/L范围内呈线性关系，最低检出浓度为0. 02 mg/L。平均提取回收率为78.9%，相对标准差为4.9%。结论 本方 法简便快速，可用于血清中佐匹克隆的测定。
中图分类号：R971+.3 文献标识码：A
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文章编号：1007-6611(2000)04-0319-02
Determination of zopiclone by single sweep oscillopolarography
LIU Yan-e WANG Yu-jin ZHANG Jia-ling
(Shanxi Adult Medical College,Taiyuan 030012,China)
Abstract:Objective To establish a sin gle sweep oscillopolarigraphic method for determination of zopiclone in human se rum. Method The samples were adjusted to pH 6.86, extracted with dichlorme thane-isoamylalcohol(98:2)and determined the height of derivative wave in 0.1mol /L HCl solution.Results The linearrange was 0.03～5 mg/L and the detectio n limit was 0.02 mg/L. The average recovery was 78.9% and RSD was 4.9%. Conclu sion The method is rapid,simple and suitable for determination of zopiclone c oncentration in serum.
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Key words:single sweep oscillopolarography；zopiclone；serum
佐匹克隆(zopiclone)是一种新型安眠镇静药物，属于环吡咯酮衍生物。 它与第一代安眠药(巴比妥类)、第二代安眠镇静药(苯骈二氮杂(艹)/(卓)类)比较，最大优点是 高效低毒，作用迅速，连续服用无蓄积作用，停药后无戒断反应和失眠返跳现象，被誉为第 三代安眠药[1]。佐匹克隆的血药浓度测定方法有HPLC法[2]、GC法 [3]和薄层荧光扫描法[4-5]。应用极谱法测定佐匹克隆含量，国内外文献未 见报道。本研究采用单扫描示波极谱法，在0.1 mol/L盐酸溶液中，微量佐匹克隆可产生一 个灵敏度较高的极谱还原波。根据佐匹克隆在一定浓度范围内与波高有良好的线性关系，测 定了血清中佐匹克隆含量，取得了满意的结果。
1 仪器与试药
, 百拇医药
1.1 仪器 JP-1A型示波极谱仪(成都仪器厂)、三电极系统。电热恒温水浴锅(北京)、 电动离心机(江苏)、旋涡混合器(北京)。
1.2 试药 佐匹克隆标准溶液：准确称取佐匹克隆对照品(沈阳药科大学药物研究所提供 ，含量为98.5%)溶于pH=3的盐酸溶液中，配制成1 g/L的贮备液。使用时用pH＝3的盐酸溶 液逐级稀释。
二氯甲烷、异戊醇等试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 分析条件 取一定量佐匹克隆标准溶液置于10 ml烧杯中，加入0.1 mol/L的盐酸溶液8 .0 ml，在示波极谱仪上以-0.20 V为起扫电位进行阴极化扫描，于-0.40 V处记录佐匹克隆 的导数波高。其导数示波极谱图见图1。
, 百拇医药
图1 佐匹克隆导数示波极谱图
2.2 底液选择 分别测定了佐匹克隆在硼砂、六次甲基四胺、醋酸─醋酸钠缓冲液、氨 水─氯化铵缓冲液、盐酸及硫酸等介质中的极谱波，其中在0.1 mol/L的盐酸介质中极谱波 峰形好，灵敏度高且稳定，故选用0.1 mol/L的盐酸溶液作为底液。
2.3 标准曲线制备 精密吸取不同量的佐匹克隆标准溶液于10 ml烧杯中，加入 0.1 mol/L的盐酸溶液8.0 ml，在分析条件下测量导数波高(H)，结果发现，药物浓 度在0.03 ～0.1 mg/L、0.1～1 mg/L和1～5 mg/L三个不同数量级 范围内与波高均有良好的线性关系，但其斜率不同。经对0.1～1 mg/L范围内 的佐匹克隆浓度对波高进行线性回归，得回归方程为：
H=22.762 4C-0.018 5 r＝0.992 8
, http://www.100md.com 对佐匹克隆浓度逐级稀释并测其导数波 高，当药物浓度低于0.02 mg/L时，导数波高便测不出，由此得最低检出浓度为0.02 mg/L。
2.4 血清中佐匹克隆提取回收率、精密度测定 精密吸取空白血清1.0 ml，共15份 ，分别加入1 g/L的佐匹克隆标准溶液1.0，2.0，4.0 μl,每种浓度各5份，加pH为6 .86的磷酸盐缓冲液1.0 ml，二氯甲烷/异丙醇(98∶2)混合溶剂3.0 ml，振摇10 min ，离心10 min(3 000 r/min)，弃去水层，有机层于70 ℃水浴挥干。残渣加0.1 mol/L的 盐酸溶液8.0 ml，溶解后转入10 ml烧杯中，在分析条件下测量导数波高。 分别求得三种浓度佐匹克隆的提取回收率及精密度，结果见表1。
表1 佐匹克隆提取回收率及精密度 (n=5) 药物加入量
(μg)
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(μg)
平均回收率
(%)
RSD(%)
1.000
0.766±0.038
76.6
5.5
2.000
1.590±0.076
79.5
4.8
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4.000
3.220±0.142
80.5
4.4
平均
78.9
4.9
表2 家兔血清中佐匹克隆含量 (n =3) 时间(h)
血药浓度(mg/L)
0.5
0.30±0.021
1
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0.81±0.040
2
0.93±0.032
3
0.37±0.024
5
0.26±0.014
7
0.19±0.027
2.5 样品测定 健康家兔3只，平均体重2.2±0.4 kg，雌雄兼用，实验前隔夜禁食。按 成 人每日最大用量100倍剂量体表面积换算，佐匹克隆88 mg溶于水中给家兔灌胃(40 mg/kg) 。 于给药前及给药后不同时间颈动脉取血约2.5 ml，离心取血清1.0 ml。同时取空白血清3 份 ，分别加入相同量的佐匹克隆标准溶液，使空白血清中加入的药物量与样品中药物含量相接 近，按2.4项下步骤平行操作，在线性范围内用直接比较法定量测定血清样品中佐匹克隆含 量。结果见表2。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 极谱波性质研究 分别测量了汞柱高度、起扫电位、温度及表面活性剂对极谱波高的 影响，发现波高与汞柱高度成正比；起扫电位越接近波电位则波高越高，最后达到极限值； 在10～50 ℃范围内温度系数为正值，达1.3%，当温度低于10 ℃时，出现双波，波高几乎相 等 ；表面活性剂明胶、十二烷基磺酸钠、聚乙烯醇等均不同程度地使波高降低，波形不规则。 以上实验结果均表明，该波是一极谱扩散波。
3.2 佐匹克隆在中性条件下溶于氯仿、二氯甲烷、乙腈等，在pH 3条件下溶于水。 血清中佐匹克隆经有机相提取后必须蒸干方能用pH 3的盐酸溶液溶解测定，否则使 测定结果偏低。
3.3 本方法简便快速，灵敏度、准确度均能满足一般临床分析的要求，适于基层 实验室佐匹克隆血药浓度的检测。
作者简介：刘燕娥，女，1960年12月生，本科，副教授.
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参考文献：
[1]张雅芳，左代姝，田科鹏，等. 新型镇静催眠药──Zopiclone的研制[J]. 中国药物化学杂志， 1994, 4 (1): 62.
[2]Miller LG, Leduc BW, Greenblatt DJ. Determination of zopiclone in plasma by liquid chromatography with application to steady-state mon itoring[J]. J Chromatogr, 1986, 380: 211.
[3]Debruyue D,Lacotte J,Hurault DLB,et al. Determination of zo piclone and zopidem in serum by capillary colume gas chroma-tography[J]. J Ph arm Sci, 1 991, 80 (1): 71.
[4]王玉瑾，张加玲，吴克明，等.佐匹克隆的薄层荧光测定及在中毒家兔 体内的分布研究[J].药物分析杂志， 1998, 18 (3): 153.
[5]王玉瑾，刘燕娥，张加玲.荧光分光光度法测定血清中佐匹克隆含量[ J]. 山西医科大学学报，1999, 30 (4): 379.
收稿日期：2000-03-24, 百拇医药