罗氏海盘车、海燕、金氏真蛇尾皂甙的制备及性质鉴定比较
作者：郭承华 曹建国 宁黔冀
单位：郭承华 曹建国 宁黔冀(烟台大学生化系，烟台 264005)
关键词：罗氏海盘车，海燕，金氏真蛇尾，海星皂甙，蛇尾皂甙
中国海洋药物000408 摘要 采用甲醇法分别对罗氏海盘车、海燕、金氏真蛇尾3种棘皮动物的皂甙进行了提取制备，其产率分别为0.0233%、0.0522%、0.1154%，结果表明金氏真蛇尾的皂甙含量最高，并且对3种皂甙进行理化性质实验、溶血实验、紫外光谱和红外光谱鉴定比较，证明提取物为海星总皂甙，由罗氏海盘车、海燕、金氏真蛇尾提取的皂甙溶点分别为175～178℃、242～255℃、244～260℃。
PREPARATION AND IDENTIFICATION OF ASTEROSAPONIN FROM ASTERIAS ROLLESTONI ASTERIN PECTINIFERA AND OPHIURA KINBERGI
, http://www.100md.com
Guo Chenghua，Cao Jianguo，Ning Qianji
(Department of Biochemistry,Yantai University,Yantai 264005)
ABSTRACT Asterossaponin from Asterias rollestoni Asterina pectinifera and Ophiura kinbergi at the coast Yantai were prepared separately by extration with methanol,the yields were 0.0233g、0.0522g and 0.1154g from 100g dry material respectively.The content of asterosaponin from Ophiura kinbergi is the most.Data of the physical and chemical test,hemolytic test,ultraviolet spectrum and infrared spectrum analyses showed that the extracts were asterosaponin.The melting point of asterosaponin from Asterias rollestini Asterina pectinifera and Ophiura kinbergi oranged 175～178℃,242～255℃ and 244～260℃ respectively.
, 百拇医药
KEY WORDS Asterias rollestoni,Asterina pectinifera,Ophiura kinbergi,asterosaponin,ophiura saponin
自本世纪中期由Hashimoto和Yasumoto[1]最初发现海星的水提取物中存在着有毒的皂甙以来，国内外许多学者对生活在不同海域的数十种棘皮动物中皂甙的化学结构和毒理效应等进行了大量研究[2]。海星皂甙(asterosaponin)不但具有抗癌、抗菌及抗炎等活性，而且还具有持续降压等多种作用，是可开发为实用海洋药物的一种重要活性物质[2]。海星纲的罗氏海盘车、海燕和蛇尾纲的金氏真蛇尾是黄海海域常见几种棘皮动物，对其皂甙的制备及性质少见报道，为充分开发烟台近海药用棘皮动物资源，我们采用生物化学方法对上述3种棘皮动物中的皂甙进行了提取制备，并对其含量及纯度进行了比较。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 材料
罗氏海盘车Asterias rollestoni Bell、海燕Asterina pectinifera (Muller et Jroschel)、金氏真蛇尾Ophiura kinbergi Ljungman，1999年4月末至5月初采自烟台潮下带，新鲜时洗净泥沙，烘干备用。
1.2 药品及仪器
标准皂甙(Serva进口分装，北京化工厂)，甲醇，苯，正丁醇，丙酮，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，柠檬酸钠，均为AR试制。
真空抽压机，蒸馏装置，IR-180红外分光光度计(日本分光公司)，U-3400紫外分光光度计(日本日立公司)，XT4-100X显微熔点测定仪(北京电光科学仪器厂)。
1.3 皂甙的提取方法(甲醇法)
, 百拇医药
将材料粉碎成碎末状，称量后用甲醇法提取[3]。
1.4 皂甙的分析鉴定
1.4.1 溶血实验
参照Fujita和Nishimoto 的方法[4]进行，同时以标准皂甙的溶血指数(hemolytic index,HI.)作参考，皂甙的含量及纯度以每克试样溶血指数(H.I./g)表示。
1.4.2 紫外、红外光谱分析
取3种皂甙样品测其红光、紫外光谱，并与标准皂甙相比较(紫外、红外光谱测定时所用溶液均用磷酸盐缓冲液配制)。
1.4.3 显微熔点测定
取皂甙样品和标准皂甙用显微熔点测定仪测其熔点并比较。
, 百拇医药
2 结果与讨论
2.1 3种皂甙产量及产率比较
表1 3种皂甙的总皂甙产量及产率 种类
材料重量(g)
总皂甙产量(g)
产率(%)
罗氏海盘车
60
0.014
0.0233
海 燕
100
, 百拇医药
0.0522
0.0522
金氏真蛇尾
2.6
0.003
0.1154
表中所示结果为两次实验的平均值。
从以上结果可以看出，3种棘皮动物总皂甙产量及产率明显不同。产量不同的原因所用材料的起始重量不同所致；而产率的差异与金氏真蛇尾、海燕、罗氏海盘车3种棘皮动物本身皂甙含量不同有关。另外，金氏真蛇尾、海燕、罗氏海盘车各自的生殖周期，也是造成皂甙产率不同的原因。
2.2 3种皂甙的溶血性及比较
, 百拇医药
表2 3种皂甙的溶血活性 种类
总皂甙产率(%)
每克试样溶血指数
罗氏海盘车
0.0233
6473
海 燕
0.0522
6416
金氏真蛇尾
0.1154
17857
, http://www.100md.com
表中结果为两次实验的平均值，标准皂甙HI./g平均为34722。
从实验结果可以看出，3种棘皮动物皂甙的溶血活性自高至低依次为：金氏真蛇尾、罗氏海盘车、海燕。从海燕、罗氏海盘车中提取的皂甙产量和产率虽有较大区别，HI./g却相差不大，这说明从同属于海星纲的海燕、罗氏海盘车中提取到总皂甙的活性非常相似，因此从海星纲动物体中提取的皂甙统称为海星皂甙[5]。而从金氏真蛇尾中提取的皂甙与前二者的溶血活性差异较大，可定义为蛇尾皂甙(ophiura saponin)。
2.3 皂甙特性鉴定及比较
2.3.1 理化性质比较
从外观看，罗氏海盘车皂甙呈淡黄色，海燕皂甙略呈浅绿色，而金氏真蛇尾皂甙则呈棕黄色，三者均有粘性，易吸潮。它们的水溶液经振荡均产生持久的泡沫反应，均溶于水、甲醇、含水乙醇及正丁醇等低级醇中，不溶于苯、乙醚、丙酮等极性小的有机溶剂中。3种皂甙均具备皂甙的典型性质。与标准皂甙的熔点(187～189℃)相比，罗氏海盘车、海燕、金氏真蛇尾3种皂甙样品的熔点分别为175～178℃、242～255℃和244～260℃。3种皂甙的熔点与标准皂甙均有差别，除罗氏海盘车外，另外两种皂甙熔距较大，这说明其皂甙中含有杂质且为混合组分。这些杂质可能是熔点与皂甙有较大差别的脂类，主要是在脱脂或透析时混入的。
, 百拇医药
2.3.2 红外光谱与紫外光谱分析比较
红外光谱测定结果显示，3种样品与标准皂甙均在3450cm-1、2970cm-1、1640cm-1、1060cm-1处有相似峰形的吸收峰，但3种皂甙的吸收峰与标准皂甙吸收峰也有一定的差异,这说明提取的3种皂甙中均为混合组分。
从紫外光谱分析发展，3种样品溶液与标准皂甙溶液在222～244nm处有特征吸收峰。其中金氏真蛇尾的皂甙的吸收峰不十分明显，这可能是金氏真蛇尾皂甙的溶液浓度偏低造成的。海燕、罗氏海盘车皂甙的吸收峰多，说明这两种皂甙中含有混合组分。另从分类分析，罗氏海盘车属海星纲钳棘目海盘车科，海燕属有棘目海燕科。而金氏真蛇尾属于蛇尾纲唇蛇尾目真蛇科，所以不同科属的化学成分的结构，虽都是皂甙，结构不能完全相同，其理化性质有所差异,也是必然的。
大量海洋非食用资源的药用开发研究，不仅可变废为宝，从中获取特效药物，而且活性成分被提取后，剩余部分的蛋白质与多糖类等，有的可作为食品及其添加剂；有的可作为饲料，进行再开发，从而提高资源的利用价值[6]，创造明显的社会效益和经济效益。
, http://www.100md.com
罗氏海盘车是广泛分布于浅海的一种食肉性棘皮动物，营养丰富，富含蛋白质，其中不饱和脂肪酸含量较高，具有作为食品、饲料开发的巨大潜力。因罗氏海盘车类棘皮组织内含毒素，可引起神经症状，故作为食品或饲料开发国内报道尚少。对金氏真蛇尾的研究尚未见报道。本文通过比较总结出3种海洋生物中皂甙的含量与性质的差别，这对于大规模利用黄海海域棘皮动物提取皂甙，开发海洋药物具有一定的现实意义。
参考文献
[1]Hashimoto Y,Yasumoto T.Confirmation of saponin as a toxic principle of starfish.Bull Jap Fish 1960,26(11):1132
[2]王唯玮.海星的生理药理活性物质.海洋药物杂志，1986，4：46
[3]郭承华，刘传琳，张传钦，等.砂海星海星皂甙的制备.中国海洋药物，1997，16(1)：36
[4]Fujita M,Nishimoto K.On the biological assay of Japanese senega. J Pharm Soc Japan,1952,72:1654
[5]张豁中.棘皮动物中皂甙的分布及其分离提取.海洋药物，1983，6(2)：109
[6]关美君，丁源.我国海洋药物科学的十年进展及战略设想.中国海洋药物，1989，8(1)：25
(收稿日期：1999-11-12), 百拇医药
单位：郭承华 曹建国 宁黔冀(烟台大学生化系，烟台 264005)
关键词：罗氏海盘车，海燕，金氏真蛇尾，海星皂甙，蛇尾皂甙
中国海洋药物000408 摘要 采用甲醇法分别对罗氏海盘车、海燕、金氏真蛇尾3种棘皮动物的皂甙进行了提取制备，其产率分别为0.0233%、0.0522%、0.1154%，结果表明金氏真蛇尾的皂甙含量最高，并且对3种皂甙进行理化性质实验、溶血实验、紫外光谱和红外光谱鉴定比较，证明提取物为海星总皂甙，由罗氏海盘车、海燕、金氏真蛇尾提取的皂甙溶点分别为175～178℃、242～255℃、244～260℃。
PREPARATION AND IDENTIFICATION OF ASTEROSAPONIN FROM ASTERIAS ROLLESTONI ASTERIN PECTINIFERA AND OPHIURA KINBERGI
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Guo Chenghua，Cao Jianguo，Ning Qianji
(Department of Biochemistry,Yantai University,Yantai 264005)
ABSTRACT Asterossaponin from Asterias rollestoni Asterina pectinifera and Ophiura kinbergi at the coast Yantai were prepared separately by extration with methanol,the yields were 0.0233g、0.0522g and 0.1154g from 100g dry material respectively.The content of asterosaponin from Ophiura kinbergi is the most.Data of the physical and chemical test,hemolytic test,ultraviolet spectrum and infrared spectrum analyses showed that the extracts were asterosaponin.The melting point of asterosaponin from Asterias rollestini Asterina pectinifera and Ophiura kinbergi oranged 175～178℃,242～255℃ and 244～260℃ respectively.
, 百拇医药
KEY WORDS Asterias rollestoni,Asterina pectinifera,Ophiura kinbergi,asterosaponin,ophiura saponin
自本世纪中期由Hashimoto和Yasumoto[1]最初发现海星的水提取物中存在着有毒的皂甙以来，国内外许多学者对生活在不同海域的数十种棘皮动物中皂甙的化学结构和毒理效应等进行了大量研究[2]。海星皂甙(asterosaponin)不但具有抗癌、抗菌及抗炎等活性，而且还具有持续降压等多种作用，是可开发为实用海洋药物的一种重要活性物质[2]。海星纲的罗氏海盘车、海燕和蛇尾纲的金氏真蛇尾是黄海海域常见几种棘皮动物，对其皂甙的制备及性质少见报道，为充分开发烟台近海药用棘皮动物资源，我们采用生物化学方法对上述3种棘皮动物中的皂甙进行了提取制备，并对其含量及纯度进行了比较。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 材料
罗氏海盘车Asterias rollestoni Bell、海燕Asterina pectinifera (Muller et Jroschel)、金氏真蛇尾Ophiura kinbergi Ljungman，1999年4月末至5月初采自烟台潮下带，新鲜时洗净泥沙，烘干备用。
1.2 药品及仪器
标准皂甙(Serva进口分装，北京化工厂)，甲醇，苯，正丁醇，丙酮，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，柠檬酸钠，均为AR试制。
真空抽压机，蒸馏装置，IR-180红外分光光度计(日本分光公司)，U-3400紫外分光光度计(日本日立公司)，XT4-100X显微熔点测定仪(北京电光科学仪器厂)。
1.3 皂甙的提取方法(甲醇法)
, 百拇医药
将材料粉碎成碎末状，称量后用甲醇法提取[3]。
1.4 皂甙的分析鉴定
1.4.1 溶血实验
参照Fujita和Nishimoto 的方法[4]进行，同时以标准皂甙的溶血指数(hemolytic index,HI.)作参考，皂甙的含量及纯度以每克试样溶血指数(H.I./g)表示。
1.4.2 紫外、红外光谱分析
取3种皂甙样品测其红光、紫外光谱，并与标准皂甙相比较(紫外、红外光谱测定时所用溶液均用磷酸盐缓冲液配制)。
1.4.3 显微熔点测定
取皂甙样品和标准皂甙用显微熔点测定仪测其熔点并比较。
, 百拇医药
2 结果与讨论
2.1 3种皂甙产量及产率比较
表1 3种皂甙的总皂甙产量及产率 种类
材料重量(g)
总皂甙产量(g)
产率(%)
罗氏海盘车
60
0.014
0.0233
海 燕
100
, 百拇医药
0.0522
0.0522
金氏真蛇尾
2.6
0.003
0.1154
表中所示结果为两次实验的平均值。
从以上结果可以看出，3种棘皮动物总皂甙产量及产率明显不同。产量不同的原因所用材料的起始重量不同所致；而产率的差异与金氏真蛇尾、海燕、罗氏海盘车3种棘皮动物本身皂甙含量不同有关。另外，金氏真蛇尾、海燕、罗氏海盘车各自的生殖周期，也是造成皂甙产率不同的原因。
2.2 3种皂甙的溶血性及比较
, 百拇医药
表2 3种皂甙的溶血活性 种类
总皂甙产率(%)
每克试样溶血指数
罗氏海盘车
0.0233
6473
海 燕
0.0522
6416
金氏真蛇尾
0.1154
17857
, http://www.100md.com
表中结果为两次实验的平均值，标准皂甙HI./g平均为34722。
从实验结果可以看出，3种棘皮动物皂甙的溶血活性自高至低依次为：金氏真蛇尾、罗氏海盘车、海燕。从海燕、罗氏海盘车中提取的皂甙产量和产率虽有较大区别，HI./g却相差不大，这说明从同属于海星纲的海燕、罗氏海盘车中提取到总皂甙的活性非常相似，因此从海星纲动物体中提取的皂甙统称为海星皂甙[5]。而从金氏真蛇尾中提取的皂甙与前二者的溶血活性差异较大，可定义为蛇尾皂甙(ophiura saponin)。
2.3 皂甙特性鉴定及比较
2.3.1 理化性质比较
从外观看，罗氏海盘车皂甙呈淡黄色，海燕皂甙略呈浅绿色，而金氏真蛇尾皂甙则呈棕黄色，三者均有粘性，易吸潮。它们的水溶液经振荡均产生持久的泡沫反应，均溶于水、甲醇、含水乙醇及正丁醇等低级醇中，不溶于苯、乙醚、丙酮等极性小的有机溶剂中。3种皂甙均具备皂甙的典型性质。与标准皂甙的熔点(187～189℃)相比，罗氏海盘车、海燕、金氏真蛇尾3种皂甙样品的熔点分别为175～178℃、242～255℃和244～260℃。3种皂甙的熔点与标准皂甙均有差别，除罗氏海盘车外，另外两种皂甙熔距较大，这说明其皂甙中含有杂质且为混合组分。这些杂质可能是熔点与皂甙有较大差别的脂类，主要是在脱脂或透析时混入的。
, 百拇医药
2.3.2 红外光谱与紫外光谱分析比较
红外光谱测定结果显示，3种样品与标准皂甙均在3450cm-1、2970cm-1、1640cm-1、1060cm-1处有相似峰形的吸收峰，但3种皂甙的吸收峰与标准皂甙吸收峰也有一定的差异,这说明提取的3种皂甙中均为混合组分。
从紫外光谱分析发展，3种样品溶液与标准皂甙溶液在222～244nm处有特征吸收峰。其中金氏真蛇尾的皂甙的吸收峰不十分明显，这可能是金氏真蛇尾皂甙的溶液浓度偏低造成的。海燕、罗氏海盘车皂甙的吸收峰多，说明这两种皂甙中含有混合组分。另从分类分析，罗氏海盘车属海星纲钳棘目海盘车科，海燕属有棘目海燕科。而金氏真蛇尾属于蛇尾纲唇蛇尾目真蛇科，所以不同科属的化学成分的结构，虽都是皂甙，结构不能完全相同，其理化性质有所差异,也是必然的。
大量海洋非食用资源的药用开发研究，不仅可变废为宝，从中获取特效药物，而且活性成分被提取后，剩余部分的蛋白质与多糖类等，有的可作为食品及其添加剂；有的可作为饲料，进行再开发，从而提高资源的利用价值[6]，创造明显的社会效益和经济效益。
, http://www.100md.com
罗氏海盘车是广泛分布于浅海的一种食肉性棘皮动物，营养丰富，富含蛋白质，其中不饱和脂肪酸含量较高，具有作为食品、饲料开发的巨大潜力。因罗氏海盘车类棘皮组织内含毒素，可引起神经症状，故作为食品或饲料开发国内报道尚少。对金氏真蛇尾的研究尚未见报道。本文通过比较总结出3种海洋生物中皂甙的含量与性质的差别，这对于大规模利用黄海海域棘皮动物提取皂甙，开发海洋药物具有一定的现实意义。
参考文献
[1]Hashimoto Y,Yasumoto T.Confirmation of saponin as a toxic principle of starfish.Bull Jap Fish 1960,26(11):1132
[2]王唯玮.海星的生理药理活性物质.海洋药物杂志，1986，4：46
[3]郭承华，刘传琳，张传钦，等.砂海星海星皂甙的制备.中国海洋药物，1997，16(1)：36
[4]Fujita M,Nishimoto K.On the biological assay of Japanese senega. J Pharm Soc Japan,1952,72:1654
[5]张豁中.棘皮动物中皂甙的分布及其分离提取.海洋药物，1983，6(2)：109
[6]关美君，丁源.我国海洋药物科学的十年进展及战略设想.中国海洋药物，1989，8(1)：25
(收稿日期：1999-11-12), 百拇医药