钙粘素在上皮性卵巢肿瘤中的表达
曲芃芃 焦书竹 郭月梅 张新莹 张晓晶 陈斌其
摘要 目的：检测E-钙粘素(E-Cd)在卵巢上皮性肿瘤的表达情况，并了解E-Cd表达的临床意义。方法：用特异性抗E-Cd单克隆抗体，以SP免疫组化法，检测78例卵巢上皮性肿瘤中E-Cd表达，结合临床病理情况，进行统计学分析。结果：1)卵巢粘液性肿瘤中E-Cd表达率高，与其它类型比较差异有显著性。透明细胞癌及未分化癌中无E-Cd表达。2)分化程度降低，E-Cd表达率有降低的趋势，但差异无显著性。3)有转移灶者E-Cd表达率低。结论：E-Cd表达是卵巢粘液性肿瘤的特征，E-Cd表达降低与卵巢恶性肿瘤种植转移的发生有关。E-Cd表达对估计卵巢上皮性肿瘤生物学行为可有一定作用。
关键词：E-钙粘素(E-Cd) 卵巢上皮性肿瘤 免疫组化
, 百拇医药
钙粘素(Cadherin，Cd)是一组钙依赖性的细胞跨膜糖蛋白，介导正常和肿瘤组织中细胞-细胞间的粘附作用。E-钙粘素(EpithelialCadherin，E-Cd)是Cd家族的经典亚族成员，其结构与功能的变化直接关系到癌细胞的生物学行为，影响着肿瘤细胞的脱离与再附着。已有人认为E-Cd基因是肿瘤转移和侵袭的抑制基因[1,2]。目前，E-Cd与卵巢肿瘤关系的研究尚少。本文利用免疫组化法观察了卵巢上皮性肿瘤组织中E-Cd表达，旨在了解E-Cd在卵巢上皮性肿瘤中的作用，并探讨其表达的临床意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象
1995年4月～1996年10月，天津医科大学总医院妇科及天津市中心妇产科医院手术治疗卵巢上皮性肿瘤78例，年龄19～80岁(中位数45岁)；其中良性21例，交界性8例，恶性49例。浆液性肿瘤38例(良性7例，交界性4例，恶性27例)，粘液性肿瘤25例(良性10例，交界性4例，恶性11例)，内膜样癌2例，透明细胞癌3例，未分化癌6例，腺纤维瘤4例。恶性中病理分级G16例，G212例，G331例；按FIGO临床分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期12例，Ⅲ期22例，Ⅳ期2例。所有手术切除标本经石蜡包埋，HE染色，病理医师复诊，查阅病历获取临床资料。
, 百拇医药
1.2 检测试剂及方法
采用SP免疫组化法，鼠抗人E-Cd单克隆抗体、生物素标记的抗鼠抗体、辣根酶标记的链霉亲和素及DAB显色剂均购于北京中山生物制品有限公司。用已知E-Cd阳性的正常宫颈上皮组织作为阳性对照，用PBS替代I抗作为阴性对照。
1.3 结果判定标准
肿瘤细胞膜和(或)细胞浆内无棕黄色染色为阴性，有棕黄色染色为阳性。根据染色强度和范围将阳性分为三级：+为仅在高倍镜下见到较浅染色，阳性细胞分布范围≤25%瘤细胞/HPF；+++为着色深，显而易见，分布范围≥50%瘤细胞/HPF；++介于上述两者之间。
1.4 统计学分析
采用χ2检验及精确概率计算。
, http://www.100md.com 2 结果
2.1 不同性质的上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达(表1)
表1 不同性质的上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达
肿瘤性质
例数
E-Cd表达程度
表达率(%)
-
+
++
+++
良性
, 百拇医药
21
7
1
6
7
66.67
交界性
8
4
1
0
3
50.00
恶性
, 百拇医药
49
28
5
10
6
42.86
χ2=3.333 P>0.05
不同性质的上皮性卵巢肿瘤中良性表达率高，恶性表达率低；粘液性肿瘤中，良性表达率达100%(10/10)，恶性表达率为72.73%；浆液性肿瘤中，良性表达率达28.57%(2/7)，恶性表达率为44.44%。但良、恶性比较差异无显著性。
2.2 不同类型的上皮性卵巢癌中E-Cd表达(表2)
, http://www.100md.com
表2 不同类型的上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达
肿瘤性质
例数
E-Cd表达程度
表达率(%)
-
+
++
+++
浆液性癌
27
15
5
, http://www.100md.com
6
1
44.44
粘液性癌
11
3
0
3
5
72.73
内膜样癌
2
1
0
, http://www.100md.com
1
2
50.00
透明细胞癌
3
3
0
0
0
0
未分化腺癌
6
6
0
, http://www.100md.com
0
0
0
在所检测的卵巢上皮性癌中粘液性癌E-Cd表达率最高，达72.78%，透明细胞癌和未分化癌中未见有E-Cd表达。各类型之间粘液性癌表达率高于其他类型肿瘤，并有统计学意义。
2.3 恶性上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达与病理分级的关系(表3)
表3 不同分化程度恶性上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达
分级
例数
E-Cd表达程度
表达率(%)
, 百拇医药
-
+
++
+++
G1
6
2
0
4
0
66.67
G2
12
7
, 百拇医药
0
3
2
41.67
G3
31
19
5
3
4
38.70
不同分化程度的恶性上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达率差异无显著性(χ2=0.5927P>0.05)，但分化程度低者，表达率有降低趋势。
, http://www.100md.com
2.4 恶性上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达与临床分期的关系(表4)
表4 不同临床分期的恶性上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达
分级
例数
E-Cd表达程度
表达率(%)
-
+
++
+++
Ⅰ
13
, 百拇医药
6
0
5
2
53.85
Ⅱ
12
7
1
3
1
41.67
Ⅲ
22
, 百拇医药
13
4
2
3
40.51
Ⅳ
2
2
0
0
0
0
不同临床分期的上皮性卵巢癌中E-Cd表达差异无显著性(χ2=1.062P>0.05).
, 百拇医药
2.5 E-Cd在卵巢上皮性肿瘤细胞中的分布
E-Cd多在细胞膜上表达，少数病例在胞浆中表达。表达较强者在相应部位可见深棕色颗粒(附图)。10例良性粘液性肿瘤中，均为细胞膜上E-Cd表达，19例转移灶均无细胞膜表达，仅3例在细胞浆中表达。
附图 E-Cd在卵巢粘液性囊腺瘤中的表达
3 讨论
E-Cd基因位于16号染色体长臂22.1区带，此基因编码分子量120KD的细胞表面跨膜糖蛋白，这种蛋白以同种亲和的方式与附近细胞表面的同类型E-Cd分子相互作用，提高细胞的粘附性。E-Cd胞浆内部分通过α、β连接素与细胞骨架连接，由连接素将细胞内的信息传给E-Cd分子而至细胞外，介导细胞外的粘附作用，所以说α、β连接素是E-Cd的功能基础[2]。目前在胃癌、乳腺癌、子宫内膜癌及宫颈癌中E-Cd表达的研究均提示癌组织中E-Cd表达降低，且E-Cd表达与细胞分化程度有关，分化越低，E-Cd表达越少[3～6]。Inoue[7]等研究发现，正常卵巢上皮(3例)有E-Cd表达，高分化的卵巢浆液性和粘液性腺癌中也有E-Cd表达。但也有研究提示正常卵巢上皮中不存在E-Cd表达[8]。本研究表明：E-Cd在粘液性肿瘤中表达率高，良性粘液肿瘤中100%表达，恶性中表达率也达72.7%，说明E-Cd表达是卵巢粘液性肿瘤的特征。一般说来，卵巢粘液性癌预后好，表现在复发晚，五年存活率高，而浆液性癌、透明细胞癌的五年存活率较粘液性低，未分化癌更是恶性程度高，预后差[9]。本研究中，E-Cd粘液性癌中表达率72.73%，浆液性癌中表达率44.44%，在透明细胞癌及未分化癌中无表达，且前者与后三者分别比较均有统计学意义，可见E-Cd在生物学行为较好的卵巢癌中表达，E-Cd表达可能与卵巢肿瘤的生物学行为有关，值得做进一步的研究。
, 百拇医药
E-Cd主要通过3种机制降低细胞外的粘附作用：1)E-Cd表达下调或基因突变，2)连接素异常或缺失，3)连接素的生化修饰如β连接素的磷酸化。E-Cd粘附系统紊乱致E-Cd功能减低，使癌细胞从原发灶释出并使细胞失分化[10]。转移是恶性肿瘤的生物学行为，癌细胞从原发灶释出是转移的第一步。本研究表明：E-Cd表达与卵巢癌临床分期无关，与其他肿瘤研究结果一致[3～6]。本文在19例取自盆腹腔孤立转移及大网膜灶中观察到E-Cd表达率仅为15.79%(3/19)，都在胞浆内而癌细胞膜无E-Cd表达。这类病例很可能是α或β连接素缺乏或结合位点缺失，使E-Cd在细胞浆内堆积，而不能在细胞膜上起作用，很可能是无功能的E-Cd表达[2,10]。所以，E-Cd表达丧失或功能缺陷使卵巢癌细胞失粘附可能是其转移的分子基础。
体内研究表明E-Cd表达减少可使肿瘤细胞分化程度降低[7]。本研究提示；分化程度低者，表达率也有降低的趋势，其差异未显示出统计学意义可能与病例数较少有关。
, http://www.100md.com
E-Cd与卵巢癌的组织学类型有关，其表达是卵巢粘液性肿瘤的特征；有种植转移者E-Cd表达减少；由此可见，E-Cd表达对估计卵巢上皮性肿瘤生物学行为有一定作用。目前在卵巢肿瘤中对E-Cd及其相关的α、β连接素的研究还很少，还有待于做进一步的探索。
作者单位：曲芃芃 郭月梅 张新莹 张晓晶 天津市中心妇产科医院(天津市 300052)
焦书竹 陈斌其 天津医科大学总医院
参考文献
1 许洪卫,王元和,高瀚.E-钙粘附素失活及其基因突变对恶性肿瘤侵袭倾向的影响.癌症,1996;15(1):70～1
2 Jothy S,Munro SB,Leduy L,et al.Adhesion or anti-adhesion in cancer:what matters more? Cancer Metastasis Rev,1995;14:363～76
, 百拇医药
3 Mayer B, Johnson JP, Leid F,et al. E-Cadherin expression in primary and metastatic gastric cancer: down-regulation correlates with cellular dedifferentiation and glandular disintegration. Cancer Res,1993;53:1690～5
4 Oka H,Shiozaki H,Kobayashi K,et al. Expression of E-Cadherin cell adhesion molecules in human breast cancer tissues and its relationship to metastasis.Cancer Res,1992;53:1696～1701
5 Sakuragi N,Nishiya M,Ikeda K,et al. Decreased E-Cadherin expression in endometrial carcinoma is associated with tumor dedifferentiation and deep myometrial invasion. Gynecol Oncol,1994;53:183～9
, 百拇医药
6 Vessey CJ,Wilding J,Folarin N,et al. Altered expression and function of E- Cadherin in cervical intraepithelial neoplasm and invasive squamous cell carcinoma. J Pathol,1995;176:151～9
7 Inoue M,Ogawa H,Miyata M,et al. Expression of E-Cadherin in normal,benign,and malignant tissues of female genital organs,Anat Pathol,1992;98(1):76～80
8 Shimoyama Y,Hirohashi S,Hirano S,et al. Cadherin cell-adhesion molecules in human epithelial tissues and carcinomas.Cancer Res,1989;49:2128～33
9 连利娟，主编.林巧稚妇科肿瘤学.第二版.北京：人民卫生出版社，1994：489～507
10 Shiozaki H,Oka H,Inoue M, et al. E-Cadherin mediated adhesion system in cancer cells. Cancer,1996;77(8 Suppl):1605～13
(1998-06-29收稿 1998-12-23修回)
杨红欣 校对, 百拇医药
摘要 目的：检测E-钙粘素(E-Cd)在卵巢上皮性肿瘤的表达情况，并了解E-Cd表达的临床意义。方法：用特异性抗E-Cd单克隆抗体，以SP免疫组化法，检测78例卵巢上皮性肿瘤中E-Cd表达，结合临床病理情况，进行统计学分析。结果：1)卵巢粘液性肿瘤中E-Cd表达率高，与其它类型比较差异有显著性。透明细胞癌及未分化癌中无E-Cd表达。2)分化程度降低，E-Cd表达率有降低的趋势，但差异无显著性。3)有转移灶者E-Cd表达率低。结论：E-Cd表达是卵巢粘液性肿瘤的特征，E-Cd表达降低与卵巢恶性肿瘤种植转移的发生有关。E-Cd表达对估计卵巢上皮性肿瘤生物学行为可有一定作用。
关键词：E-钙粘素(E-Cd) 卵巢上皮性肿瘤 免疫组化
, 百拇医药
钙粘素(Cadherin，Cd)是一组钙依赖性的细胞跨膜糖蛋白，介导正常和肿瘤组织中细胞-细胞间的粘附作用。E-钙粘素(EpithelialCadherin，E-Cd)是Cd家族的经典亚族成员，其结构与功能的变化直接关系到癌细胞的生物学行为，影响着肿瘤细胞的脱离与再附着。已有人认为E-Cd基因是肿瘤转移和侵袭的抑制基因[1,2]。目前，E-Cd与卵巢肿瘤关系的研究尚少。本文利用免疫组化法观察了卵巢上皮性肿瘤组织中E-Cd表达，旨在了解E-Cd在卵巢上皮性肿瘤中的作用，并探讨其表达的临床意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象
1995年4月～1996年10月，天津医科大学总医院妇科及天津市中心妇产科医院手术治疗卵巢上皮性肿瘤78例，年龄19～80岁(中位数45岁)；其中良性21例，交界性8例，恶性49例。浆液性肿瘤38例(良性7例，交界性4例，恶性27例)，粘液性肿瘤25例(良性10例，交界性4例，恶性11例)，内膜样癌2例，透明细胞癌3例，未分化癌6例，腺纤维瘤4例。恶性中病理分级G16例，G212例，G331例；按FIGO临床分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期12例，Ⅲ期22例，Ⅳ期2例。所有手术切除标本经石蜡包埋，HE染色，病理医师复诊，查阅病历获取临床资料。
, 百拇医药
1.2 检测试剂及方法
采用SP免疫组化法，鼠抗人E-Cd单克隆抗体、生物素标记的抗鼠抗体、辣根酶标记的链霉亲和素及DAB显色剂均购于北京中山生物制品有限公司。用已知E-Cd阳性的正常宫颈上皮组织作为阳性对照，用PBS替代I抗作为阴性对照。
1.3 结果判定标准
肿瘤细胞膜和(或)细胞浆内无棕黄色染色为阴性，有棕黄色染色为阳性。根据染色强度和范围将阳性分为三级：+为仅在高倍镜下见到较浅染色，阳性细胞分布范围≤25%瘤细胞/HPF；+++为着色深，显而易见，分布范围≥50%瘤细胞/HPF；++介于上述两者之间。
1.4 统计学分析
采用χ2检验及精确概率计算。
, http://www.100md.com 2 结果
2.1 不同性质的上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达(表1)
表1 不同性质的上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达
肿瘤性质
例数
E-Cd表达程度
表达率(%)
-
+
++
+++
良性
, 百拇医药
21
7
1
6
7
66.67
交界性
8
4
1
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3
50.00
恶性
, 百拇医药
49
28
5
10
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42.86
χ2=3.333 P>0.05
不同性质的上皮性卵巢肿瘤中良性表达率高，恶性表达率低；粘液性肿瘤中，良性表达率达100%(10/10)，恶性表达率为72.73%；浆液性肿瘤中，良性表达率达28.57%(2/7)，恶性表达率为44.44%。但良、恶性比较差异无显著性。
2.2 不同类型的上皮性卵巢癌中E-Cd表达(表2)
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表2 不同类型的上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达
肿瘤性质
例数
E-Cd表达程度
表达率(%)
-
+
++
+++
浆液性癌
27
15
5
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6
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44.44
粘液性癌
11
3
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3
5
72.73
内膜样癌
2
1
0
, http://www.100md.com
1
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50.00
透明细胞癌
3
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未分化腺癌
6
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0
0
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在所检测的卵巢上皮性癌中粘液性癌E-Cd表达率最高，达72.78%，透明细胞癌和未分化癌中未见有E-Cd表达。各类型之间粘液性癌表达率高于其他类型肿瘤，并有统计学意义。
2.3 恶性上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达与病理分级的关系(表3)
表3 不同分化程度恶性上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达
分级
例数
E-Cd表达程度
表达率(%)
, 百拇医药
-
+
++
+++
G1
6
2
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4
0
66.67
G2
12
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, 百拇医药
0
3
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41.67
G3
31
19
5
3
4
38.70
不同分化程度的恶性上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达率差异无显著性(χ2=0.5927P>0.05)，但分化程度低者，表达率有降低趋势。
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2.4 恶性上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达与临床分期的关系(表4)
表4 不同临床分期的恶性上皮性卵巢肿瘤中E-Cd表达
分级
例数
E-Cd表达程度
表达率(%)
-
+
++
+++
Ⅰ
13
, 百拇医药
6
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5
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53.85
Ⅱ
12
7
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41.67
Ⅲ
22
, 百拇医药
13
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3
40.51
Ⅳ
2
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不同临床分期的上皮性卵巢癌中E-Cd表达差异无显著性(χ2=1.062P>0.05).
, 百拇医药
2.5 E-Cd在卵巢上皮性肿瘤细胞中的分布
E-Cd多在细胞膜上表达，少数病例在胞浆中表达。表达较强者在相应部位可见深棕色颗粒(附图)。10例良性粘液性肿瘤中，均为细胞膜上E-Cd表达，19例转移灶均无细胞膜表达，仅3例在细胞浆中表达。
附图 E-Cd在卵巢粘液性囊腺瘤中的表达
3 讨论
E-Cd基因位于16号染色体长臂22.1区带，此基因编码分子量120KD的细胞表面跨膜糖蛋白，这种蛋白以同种亲和的方式与附近细胞表面的同类型E-Cd分子相互作用，提高细胞的粘附性。E-Cd胞浆内部分通过α、β连接素与细胞骨架连接，由连接素将细胞内的信息传给E-Cd分子而至细胞外，介导细胞外的粘附作用，所以说α、β连接素是E-Cd的功能基础[2]。目前在胃癌、乳腺癌、子宫内膜癌及宫颈癌中E-Cd表达的研究均提示癌组织中E-Cd表达降低，且E-Cd表达与细胞分化程度有关，分化越低，E-Cd表达越少[3～6]。Inoue[7]等研究发现，正常卵巢上皮(3例)有E-Cd表达，高分化的卵巢浆液性和粘液性腺癌中也有E-Cd表达。但也有研究提示正常卵巢上皮中不存在E-Cd表达[8]。本研究表明：E-Cd在粘液性肿瘤中表达率高，良性粘液肿瘤中100%表达，恶性中表达率也达72.7%，说明E-Cd表达是卵巢粘液性肿瘤的特征。一般说来，卵巢粘液性癌预后好，表现在复发晚，五年存活率高，而浆液性癌、透明细胞癌的五年存活率较粘液性低，未分化癌更是恶性程度高，预后差[9]。本研究中，E-Cd粘液性癌中表达率72.73%，浆液性癌中表达率44.44%，在透明细胞癌及未分化癌中无表达，且前者与后三者分别比较均有统计学意义，可见E-Cd在生物学行为较好的卵巢癌中表达，E-Cd表达可能与卵巢肿瘤的生物学行为有关，值得做进一步的研究。
, 百拇医药
E-Cd主要通过3种机制降低细胞外的粘附作用：1)E-Cd表达下调或基因突变，2)连接素异常或缺失，3)连接素的生化修饰如β连接素的磷酸化。E-Cd粘附系统紊乱致E-Cd功能减低，使癌细胞从原发灶释出并使细胞失分化[10]。转移是恶性肿瘤的生物学行为，癌细胞从原发灶释出是转移的第一步。本研究表明：E-Cd表达与卵巢癌临床分期无关，与其他肿瘤研究结果一致[3～6]。本文在19例取自盆腹腔孤立转移及大网膜灶中观察到E-Cd表达率仅为15.79%(3/19)，都在胞浆内而癌细胞膜无E-Cd表达。这类病例很可能是α或β连接素缺乏或结合位点缺失，使E-Cd在细胞浆内堆积，而不能在细胞膜上起作用，很可能是无功能的E-Cd表达[2,10]。所以，E-Cd表达丧失或功能缺陷使卵巢癌细胞失粘附可能是其转移的分子基础。
体内研究表明E-Cd表达减少可使肿瘤细胞分化程度降低[7]。本研究提示；分化程度低者，表达率也有降低的趋势，其差异未显示出统计学意义可能与病例数较少有关。
, http://www.100md.com
E-Cd与卵巢癌的组织学类型有关，其表达是卵巢粘液性肿瘤的特征；有种植转移者E-Cd表达减少；由此可见，E-Cd表达对估计卵巢上皮性肿瘤生物学行为有一定作用。目前在卵巢肿瘤中对E-Cd及其相关的α、β连接素的研究还很少，还有待于做进一步的探索。
作者单位：曲芃芃 郭月梅 张新莹 张晓晶 天津市中心妇产科医院(天津市 300052)
焦书竹 陈斌其 天津医科大学总医院
参考文献
1 许洪卫,王元和,高瀚.E-钙粘附素失活及其基因突变对恶性肿瘤侵袭倾向的影响.癌症,1996;15(1):70～1
2 Jothy S,Munro SB,Leduy L,et al.Adhesion or anti-adhesion in cancer:what matters more? Cancer Metastasis Rev,1995;14:363～76
, 百拇医药
3 Mayer B, Johnson JP, Leid F,et al. E-Cadherin expression in primary and metastatic gastric cancer: down-regulation correlates with cellular dedifferentiation and glandular disintegration. Cancer Res,1993;53:1690～5
4 Oka H,Shiozaki H,Kobayashi K,et al. Expression of E-Cadherin cell adhesion molecules in human breast cancer tissues and its relationship to metastasis.Cancer Res,1992;53:1696～1701
5 Sakuragi N,Nishiya M,Ikeda K,et al. Decreased E-Cadherin expression in endometrial carcinoma is associated with tumor dedifferentiation and deep myometrial invasion. Gynecol Oncol,1994;53:183～9
, 百拇医药
6 Vessey CJ,Wilding J,Folarin N,et al. Altered expression and function of E- Cadherin in cervical intraepithelial neoplasm and invasive squamous cell carcinoma. J Pathol,1995;176:151～9
7 Inoue M,Ogawa H,Miyata M,et al. Expression of E-Cadherin in normal,benign,and malignant tissues of female genital organs,Anat Pathol,1992;98(1):76～80
8 Shimoyama Y,Hirohashi S,Hirano S,et al. Cadherin cell-adhesion molecules in human epithelial tissues and carcinomas.Cancer Res,1989;49:2128～33
9 连利娟，主编.林巧稚妇科肿瘤学.第二版.北京：人民卫生出版社，1994：489～507
10 Shiozaki H,Oka H,Inoue M, et al. E-Cadherin mediated adhesion system in cancer cells. Cancer,1996;77(8 Suppl):1605～13
(1998-06-29收稿 1998-12-23修回)
杨红欣 校对, 百拇医药