胃良恶性疾病外周血淋巴细胞染色体脆性位点表达与胃癌的发生
宋颖 苏琦 周秀田 李汉贤 刘景生 周建国
摘 要 目的：探讨胃良恶性疾病外周血淋巴细胞染色体脆性位点表达与胃癌发生的关系。方法：采用低叶酸培养条件,比较胃癌(15例)与慢性浅表性胃炎和胃溃疡(各15例)患者的外周血淋巴细胞染色体脆性位点表达率,差异有非常显著性意义(P<0.01)。结果：胃癌组中阳性个体表达例数有统计学意义的7个脆性位点5个与癌断裂点、癌基因居染色体同一区带,涉及到7个癌基因,表明与癌基因同位或相邻的脆性位点活跃表达在胃癌发生中起了极重要的作用。同一胃癌患者染色体畸变表现为多个癌基因位点共同表达,显示胃癌的发生发展是多基因损伤的结果。结论：胃良性疾病患者外周血淋巴细胞染色体上1q21及某些协同位点共同畸变时,应考虑胃癌发生的可能。
关键词:胃肿瘤 慢性浅表性胃炎 胃溃疡 脆性位点 癌基因位点
, 百拇医药
染色体上脆性位点(fragile site, Fra)与癌断裂点(cancer breakpoint, CBP)、癌基因之间的关系及它们导致肿瘤发生的机制,正引起人们的关注[1,2]。胃癌患者外周血淋巴细胞染色体Fra的表达与慢性浅表性胃炎患者比较[1,2]有非常明显的增高。本文分析比较胃癌与慢性浅表性胃炎和胃溃疡患者的外周血淋巴细胞染色体,探讨胃良、恶性疾病患者Fra表达的特点及Fra在胃癌发生中的作用。
1 材料与方法1.1 病例选择
病例均来自本院第一附属医院,经病理确诊的胃癌15例(男9例,女6例)。其中高分化腺癌2例,染色体定位脆性位点癌断裂点癌基因中分化腺癌4例,低分化腺癌8例,未分化癌1例。未经化疗或放疗,术前抽血;经内窥镜检查及病理确诊的胃溃疡15例(男12例,女3例),慢性浅表性胃炎15例(男11例,女4例)。上述患者均无吸烟史或放射物接触史。
, 百拇医药
1.2 培养制片
肝素抗凝外周血0.5ml接种于含小牛血清5%的TC-199培养基中,37℃培养94小时,终止培养前2小时加入秋水仙素,终浓度0.4mg/L-1。常规收获、制片、GTG显带。
1.3 染色体分析
每例选择100个分散良好的中期相,油镜下分析染色体裂隙、断裂、断片、重排等畸变,根据ISCN1995[3]给畸变位点定位,并依HGM9[4,5]和HGM9.5[6]标明Fra、CBP和癌基因位点,再记录各畸变位点的表达次数。
1.4 统计学处理
数据均采用卡方或确切概率法检验。
2 结果2.1 胃良、恶性疾病患者Fra表达率比较
, 百拇医药
慢性浅表性胃炎组和胃溃疡组分别与胃癌组比较Fra表达率,与CBP同位的Fra表达率及与癌基因位点一致的Fra表达率(表1),数值均有非常显著性差异。
表1 胃良、恶性疾病患者脆性位点表达率比较
分组
中期相数
脆性位点
与癌断裂点一致的脆性位点
与癌基因一致的脆性位点
表达次数(%)
表达次数(%)
表达次数(%)
, 百拇医药
胃癌
1500
234(15.60)
186(12.40)
113(7.50)
慢性胃炎
1500
80(5.33)*
39(2.60)*
24(1.60)*
胃溃疡
, 百拇医药 1500
50(3.33)*
36(2.40)*
23(1.53)*
与胃癌组比较*P<0.01
2.2 胃良、恶性疾病患者常见的染色体畸变位点及阳性个体表达比较
将胃癌组中较常见的畸变位点的阳性个体表达例数与慢性胃炎组和溃疡组逐一比较(表2),9个位点有显著性差异,9个位点中,7个是Fra(77.8%,7/9),8个是CBP(88.9%,8/9)，6个是癌基因位点(66.7%,6/9),1P36、1P32、1P22、1q21、7q32五个Fra与CBP、癌基因居染色体同一区带。
, 百拇医药
表2 胃良、恶性疾病患者常见的染色体畸变位点及阳性个体表达比较
胃癌组阳性例数(%)
慢性胃炎组阳性例数(%)
胃溃疡组阳性例数(%)
1P36
+
+
fgr
9(60.0)
4(26.7)
2(13.3)*
, 百拇医药 1P32
+
+
L-myc
5(33.3)
0(0)**
0(0)**
B-lym
1P22
+
+
N-ras
6(40.0)
, 百拇医药
0(0)*
0(0)*
1P11
—
+
—
3(20.0)
0(0)
0(0)
1q21
+
+
SKi
, 百拇医药
12(80.0)
2(13.3)*
2(13.3)*
1q44
+
—
—
9(60.0)
2(13.3)*
3(20.0)**
3P14
+
, http://www.100md.com
+
—
13(86.7)
7(46.7)*
8(53.3)**
3q21
—
+
—
7(46.7)
1(6.7)**
1(6.7)**
, 百拇医药
6P11
—
+
K-ras
7(46.7)
1(6.7)**
1(6.7)**
7q32
+
+
C-met
6(40.0)
, 百拇医药
1(6.7)**
0(0)*
Int1-L1
8q24
+
+
C-myc
3(20.0)
0(0)
3(20.0)
PVT1
, 百拇医药 与胃癌组比较 *P<0.01 **P<0.05
2.3 胃癌患者外周血染色体畸变位点分布
在胃癌外周血染色体畸变位点(表3)中,1q21表达的例数最多(80.0%,12/15),9例1P36位点畸变的患者有8例(88.9%)伴随1q21位点异常,而其它各位点与1q21共同畸变的比例分别为:1P32(100.0%,5/5),1P22(83.3%,5/6),1q44(100.0%,9/9),3P14(76.9%,10/13),3q21(85.7%,6/7),6P11(100.0%,7/7),7q32(100.0%,6/6)。
表3 不同分化程度胃癌患者外周血染色体畸变位点分布
染色体位点
1P36
, http://www.100md.com
1P32
1P22
1q21
1q44
3P14
3q21
6P11
7q32
高分化腺癌
1
+
+
—
, 百拇医药
+
—
+
+
—
+
2
—
—
+
+
+
—
—
, 百拇医药
+
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3
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+
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+
—
—
+
中分化腺癌
4
, http://www.100md.com
+
—
—
+
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+
—
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5
+
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+
, 百拇医药
+
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—
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6
+
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+
—
+
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, 百拇医药
—
低分化腺癌
7
+
—
+
+
+
+
—
+
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8
+
, http://www.100md.com
—
+
+
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+
9
+
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—
—
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, 百拇医药
+
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—
—
10
—
—
—
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+
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—
, 百拇医药
11
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—
+
—
—
+
+
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12
+
+
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, 百拇医药
+
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+
+
13
+
—
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+
+
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, 百拇医药
+
—
14
—
+
—
+
—
+
—
+
—
未分化癌
15
, 百拇医药
—
+
+
+
+
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+
—
+
单个病例分析:12例1q21(ski癌基因位点)畸变的患者全伴有1P36(fgr)、1P32(L-myc或B-Lym)、1P22(N-ras)三个癌基因位点中的一个或多个位点畸变,并分别伴有6P11(K-ras)或7q32(c-met和Int1-L1)癌基因位点异常，但不同组织学类型胃癌的染色体畸变位点表达无差异。 3 讨论 关于Fra与肿瘤发生的关系,目前认为:Fra是一段非特异的富含胸腺嘧啶核苷的DNA,它可能包含了某个原癌基因和有活性的细胞分化基因，后者可使原癌基因转化为癌基因。Fra是染色体上易断裂点,在体内可引起染色体断裂并导致结构重排和原癌基因的位置变化,位置效应则激活癌基因,促进肿瘤发生[1]。本研究中,胃癌患者外周血淋巴细胞染色体上与CBP或癌基因位点一致的Fra表达率较胃良性疾病组均有非常显著的增高,说明胃癌患者具有体内染色体易断,不稳定性高的特征[7],而胃癌组中畸变较频繁的7个Fra中,有5个与CBP及癌基因居染色体同一区带,表明Fra、CBP、癌基因三者同位与胃癌发生确实有着某种内在联系,Fra与癌基因同位构成了一个肿瘤相关位点[2],该位点的活跃表达可能是胃癌发生的分子遗传学基础。
, 百拇医药
本研究显示，同一胃癌患者的染色体畸变有多个癌基因位点和脆性位点共同表达,而在良性病变组中,有染色体异常的病例仅表现为某一位点的单独畸变,这一结果从细胞遗传学的角度揭示了胃癌的发生发展有多基因参与。胃癌组1q21位点的高度表达提示位于1q21-q22区带间的ski癌基因与胃癌发生关系密切[2],而其它畸变位点涉及到的癌基因:fgr(1P36)、L-myc或B-Lym(1P32)、N-ras(1P22)、K-ras(6P11)、met或Int1-L1(7q32)与ski共同表达,起着协同作用。近来发现,原癌基因ras的活化和过度表达主要出现在DNA含量尚未成倍增加时,ras癌基因在一定水平持续过度表达与肿瘤启动关系密切[8];而突变或重排的met癌基因已在多种转化细胞和肿瘤中被发现,26.0%的低分化型胃癌和19.0%的分化型胃癌中亦检测到有met基因的扩增[9]。胃癌研究中虽未见有关ski癌基因的报道,但在急性非淋巴细胞性白血病、恶性淋巴瘤、子宫颈癌、膀胱癌中均有该基因位点的畸变[6,10]。
, http://www.100md.com
本文胃癌组9个畸变位点阳性个体表达例数与良性病变组比较有显著差异,其中7个是Fra,表明胃癌患者的Fra表达增高有一定的特异性。肿瘤患者外周血染色体结构畸变在某种程度上可以反映肿瘤细胞的生物学特性、肿瘤病程演变和发展[7],因此,对慢性浅表性胃炎和胃溃疡患者进行外周血淋巴细胞脆性位点检测时,染色体上1q21伴随1P36、1P32、1P22、1q44、3P14、7q32(均为Fra)和3q21、6P1、6P11(均为CBP)中的某些位点共同畸变时,应考虑有恶变的可能。
*本文课题受湖南省教委科研基金资助
作者单位：宋 颖 苏琦 周秀田 李汉贤 刘景生 周建国 衡阳医学院肿瘤研究所(湖南省衡阳市421001)
李汉贤 刘景生 衡阳医学院第一附属医院
参考文献
, http://www.100md.com
1 徐扬，凌奇荷，李麓芸，等.胃良恶性疾病外周血淋巴细胞染色体脆性部位比较.湖南医科大学学报，1993；18：73
2 宋颖，苏琦，甘润良，等.慢性胃炎患者外周血淋巴细胞染色体畸变与胃癌发生的关系.实验与临床病理学杂志，1997；13：7
3 Lund FM.ISCN 1995(An International System for Human Cytogenetic Nomenclature 1995). S Karger Publishers Inc, USA,1995
4 Sutherland GR, Mattei JF. Report of the committee on cytogenetic makers (Human Gene Mapping 9, HGM 9). Cytogenet Cell Genet, 1987;46:316
, 百拇医药
5 Bloomfield CD, Trent JM,Van Den Berghe H. Report of the committee on structural chromosome changes in neoplasia (HGM9). Cytogenet Cell Genet,1987;46:344
6 Trent JM. Report of the committee on structural chromosome changes in neoplasia, (HGM 9.5). Cytogenet Cell Genet ,1988;49:221
7 徐伟珍，顾文祥.胃癌患者手术前后外周血淋巴细胞染色体畸变及核仁组成区的研究.肿瘤，1997；17：78
8 王昭，殷慧君.胃癌及胃粘膜非典型增生组织P21RAS表达与DNA倍体关系的探讨.实用癌症杂志，1996；11：79
9 张建明，杨柯，鄂征.与胃癌相关的癌基因met及K-sam的研究进展.肿瘤，1997；7：116
10 Mitelman F, Kaneko Y, Trent J. Report of the committee on chromosome changes in neoplasia,(HGM 11). Cytogenet Cell Genet, 1991;58:1053, 百拇医药
摘 要 目的：探讨胃良恶性疾病外周血淋巴细胞染色体脆性位点表达与胃癌发生的关系。方法：采用低叶酸培养条件,比较胃癌(15例)与慢性浅表性胃炎和胃溃疡(各15例)患者的外周血淋巴细胞染色体脆性位点表达率,差异有非常显著性意义(P<0.01)。结果：胃癌组中阳性个体表达例数有统计学意义的7个脆性位点5个与癌断裂点、癌基因居染色体同一区带,涉及到7个癌基因,表明与癌基因同位或相邻的脆性位点活跃表达在胃癌发生中起了极重要的作用。同一胃癌患者染色体畸变表现为多个癌基因位点共同表达,显示胃癌的发生发展是多基因损伤的结果。结论：胃良性疾病患者外周血淋巴细胞染色体上1q21及某些协同位点共同畸变时,应考虑胃癌发生的可能。
关键词:胃肿瘤 慢性浅表性胃炎 胃溃疡 脆性位点 癌基因位点
, 百拇医药
染色体上脆性位点(fragile site, Fra)与癌断裂点(cancer breakpoint, CBP)、癌基因之间的关系及它们导致肿瘤发生的机制,正引起人们的关注[1,2]。胃癌患者外周血淋巴细胞染色体Fra的表达与慢性浅表性胃炎患者比较[1,2]有非常明显的增高。本文分析比较胃癌与慢性浅表性胃炎和胃溃疡患者的外周血淋巴细胞染色体,探讨胃良、恶性疾病患者Fra表达的特点及Fra在胃癌发生中的作用。
1 材料与方法1.1 病例选择
病例均来自本院第一附属医院,经病理确诊的胃癌15例(男9例,女6例)。其中高分化腺癌2例,染色体定位脆性位点癌断裂点癌基因中分化腺癌4例,低分化腺癌8例,未分化癌1例。未经化疗或放疗,术前抽血;经内窥镜检查及病理确诊的胃溃疡15例(男12例,女3例),慢性浅表性胃炎15例(男11例,女4例)。上述患者均无吸烟史或放射物接触史。
, 百拇医药
1.2 培养制片
肝素抗凝外周血0.5ml接种于含小牛血清5%的TC-199培养基中,37℃培养94小时,终止培养前2小时加入秋水仙素,终浓度0.4mg/L-1。常规收获、制片、GTG显带。
1.3 染色体分析
每例选择100个分散良好的中期相,油镜下分析染色体裂隙、断裂、断片、重排等畸变,根据ISCN1995[3]给畸变位点定位,并依HGM9[4,5]和HGM9.5[6]标明Fra、CBP和癌基因位点,再记录各畸变位点的表达次数。
1.4 统计学处理
数据均采用卡方或确切概率法检验。
2 结果2.1 胃良、恶性疾病患者Fra表达率比较
, 百拇医药
慢性浅表性胃炎组和胃溃疡组分别与胃癌组比较Fra表达率,与CBP同位的Fra表达率及与癌基因位点一致的Fra表达率(表1),数值均有非常显著性差异。
表1 胃良、恶性疾病患者脆性位点表达率比较
分组
中期相数
脆性位点
与癌断裂点一致的脆性位点
与癌基因一致的脆性位点
表达次数(%)
表达次数(%)
表达次数(%)
, 百拇医药
胃癌
1500
234(15.60)
186(12.40)
113(7.50)
慢性胃炎
1500
80(5.33)*
39(2.60)*
24(1.60)*
胃溃疡
, 百拇医药 1500
50(3.33)*
36(2.40)*
23(1.53)*
与胃癌组比较*P<0.01
2.2 胃良、恶性疾病患者常见的染色体畸变位点及阳性个体表达比较
将胃癌组中较常见的畸变位点的阳性个体表达例数与慢性胃炎组和溃疡组逐一比较(表2),9个位点有显著性差异,9个位点中,7个是Fra(77.8%,7/9),8个是CBP(88.9%,8/9)，6个是癌基因位点(66.7%,6/9),1P36、1P32、1P22、1q21、7q32五个Fra与CBP、癌基因居染色体同一区带。
, 百拇医药
表2 胃良、恶性疾病患者常见的染色体畸变位点及阳性个体表达比较
胃癌组阳性例数(%)
慢性胃炎组阳性例数(%)
胃溃疡组阳性例数(%)
1P36
+
+
fgr
9(60.0)
4(26.7)
2(13.3)*
, 百拇医药 1P32
+
+
L-myc
5(33.3)
0(0)**
0(0)**
B-lym
1P22
+
+
N-ras
6(40.0)
, 百拇医药
0(0)*
0(0)*
1P11
—
+
—
3(20.0)
0(0)
0(0)
1q21
+
+
SKi
, 百拇医药
12(80.0)
2(13.3)*
2(13.3)*
1q44
+
—
—
9(60.0)
2(13.3)*
3(20.0)**
3P14
+
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+
—
13(86.7)
7(46.7)*
8(53.3)**
3q21
—
+
—
7(46.7)
1(6.7)**
1(6.7)**
, 百拇医药
6P11
—
+
K-ras
7(46.7)
1(6.7)**
1(6.7)**
7q32
+
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C-met
6(40.0)
, 百拇医药
1(6.7)**
0(0)*
Int1-L1
8q24
+
+
C-myc
3(20.0)
0(0)
3(20.0)
PVT1
, 百拇医药 与胃癌组比较 *P<0.01 **P<0.05
2.3 胃癌患者外周血染色体畸变位点分布
在胃癌外周血染色体畸变位点(表3)中,1q21表达的例数最多(80.0%,12/15),9例1P36位点畸变的患者有8例(88.9%)伴随1q21位点异常,而其它各位点与1q21共同畸变的比例分别为:1P32(100.0%,5/5),1P22(83.3%,5/6),1q44(100.0%,9/9),3P14(76.9%,10/13),3q21(85.7%,6/7),6P11(100.0%,7/7),7q32(100.0%,6/6)。
表3 不同分化程度胃癌患者外周血染色体畸变位点分布
染色体位点
1P36
, http://www.100md.com
1P32
1P22
1q21
1q44
3P14
3q21
6P11
7q32
高分化腺癌
1
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, 百拇医药
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中分化腺癌
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未分化癌
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单个病例分析:12例1q21(ski癌基因位点)畸变的患者全伴有1P36(fgr)、1P32(L-myc或B-Lym)、1P22(N-ras)三个癌基因位点中的一个或多个位点畸变,并分别伴有6P11(K-ras)或7q32(c-met和Int1-L1)癌基因位点异常，但不同组织学类型胃癌的染色体畸变位点表达无差异。 3 讨论 关于Fra与肿瘤发生的关系,目前认为:Fra是一段非特异的富含胸腺嘧啶核苷的DNA,它可能包含了某个原癌基因和有活性的细胞分化基因，后者可使原癌基因转化为癌基因。Fra是染色体上易断裂点,在体内可引起染色体断裂并导致结构重排和原癌基因的位置变化,位置效应则激活癌基因,促进肿瘤发生[1]。本研究中,胃癌患者外周血淋巴细胞染色体上与CBP或癌基因位点一致的Fra表达率较胃良性疾病组均有非常显著的增高,说明胃癌患者具有体内染色体易断,不稳定性高的特征[7],而胃癌组中畸变较频繁的7个Fra中,有5个与CBP及癌基因居染色体同一区带,表明Fra、CBP、癌基因三者同位与胃癌发生确实有着某种内在联系,Fra与癌基因同位构成了一个肿瘤相关位点[2],该位点的活跃表达可能是胃癌发生的分子遗传学基础。
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本研究显示，同一胃癌患者的染色体畸变有多个癌基因位点和脆性位点共同表达,而在良性病变组中,有染色体异常的病例仅表现为某一位点的单独畸变,这一结果从细胞遗传学的角度揭示了胃癌的发生发展有多基因参与。胃癌组1q21位点的高度表达提示位于1q21-q22区带间的ski癌基因与胃癌发生关系密切[2],而其它畸变位点涉及到的癌基因:fgr(1P36)、L-myc或B-Lym(1P32)、N-ras(1P22)、K-ras(6P11)、met或Int1-L1(7q32)与ski共同表达,起着协同作用。近来发现,原癌基因ras的活化和过度表达主要出现在DNA含量尚未成倍增加时,ras癌基因在一定水平持续过度表达与肿瘤启动关系密切[8];而突变或重排的met癌基因已在多种转化细胞和肿瘤中被发现,26.0%的低分化型胃癌和19.0%的分化型胃癌中亦检测到有met基因的扩增[9]。胃癌研究中虽未见有关ski癌基因的报道,但在急性非淋巴细胞性白血病、恶性淋巴瘤、子宫颈癌、膀胱癌中均有该基因位点的畸变[6,10]。
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本文胃癌组9个畸变位点阳性个体表达例数与良性病变组比较有显著差异,其中7个是Fra,表明胃癌患者的Fra表达增高有一定的特异性。肿瘤患者外周血染色体结构畸变在某种程度上可以反映肿瘤细胞的生物学特性、肿瘤病程演变和发展[7],因此,对慢性浅表性胃炎和胃溃疡患者进行外周血淋巴细胞脆性位点检测时,染色体上1q21伴随1P36、1P32、1P22、1q44、3P14、7q32(均为Fra)和3q21、6P1、6P11(均为CBP)中的某些位点共同畸变时,应考虑有恶变的可能。
*本文课题受湖南省教委科研基金资助
作者单位：宋 颖 苏琦 周秀田 李汉贤 刘景生 周建国 衡阳医学院肿瘤研究所(湖南省衡阳市421001)
李汉贤 刘景生 衡阳医学院第一附属医院
参考文献
, http://www.100md.com
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