采收期和加工方法对红花质量的影响
郭美丽 张芝玉 张汉明 苏中武
摘 要 目的：探索红花最佳采收期及其加工方法。方法：在对红花进行引种栽培的基础上，在其开花的不同时间采集药材，并进行阴干、晒干、45℃和60℃烘干，UV，HPLC法测定红花的化学成分含量。结果：不同采收期对红花化学成分含量影响显著(P<0.01),不同加工方法对红花化学成分含量影响不显著(P >0.05)。结论：红花在开花后第3天采收最佳，阴干、晒干及60℃以下烘干均不影响其质量。
关键词：红花 采收期 加工方法 化学成分含量
红花(Carthamus tinctorius L. )在我国已有2 100多年的引种栽培与药用历史[1]。研究表明，红花中黄色素和腺苷是红花扩张血管、延长凝血时间、抑制血小板聚集的主要活性成分[2～7]。本研究在对红花进行引种栽培的基础上，采用UV，HPLC法测定了不同采收期及加工方法对上述两种化学成分含量的影响，旨在确定红花最佳采收期及加工方法。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 种植材料 四川简阳红花，种植地点：我院药用植物园;播种期：1994-10-31;出苗期：1994-11-08;开花期：1995-05-24;果实成熟期：1995-0-6-19。
1.2 药材采集和加工方法 在红花开花期对当天所开的花进行挂牌，并从当天开始至花后第4天,于每天早晨 8：30左右采集花冠，阴干。药材加工方法有4种：阴干、晒干、45℃烘干、60℃烘干。
1.3 黄色素含量测定
1.3.1 标准曲线的绘制 精密称取黄色素对照品(日本纯药工业株式会社)103.8 mg，置100 ml容量瓶中，加入70%甲醇溶液溶解至刻度，摇匀，得黄色素标准液。从制成的溶液中精密吸取1.5，3.0，4.5，6.0，7.5，9.0，10.5 ml分别至50 ml容量瓶中，分别加70%甲醇溶液至刻度，摇匀。在403 nm处测光密度(D)，以黄色素浓度为自变量，D值为因变量，求得回归方程：D =-0.002 0+0.050 1 c, r=0.999 9。
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1.3.2 样品处理 精密称取红花粉末各200 mg，加50 ml 70%甲醇溶液浸泡过夜，过滤，残渣加20 ml 70%甲醇溶液浸泡2 h，滤过。用70%甲醇溶液洗涤3次(每次5 ml)，滤液合并，定容至100 ml，得母液A，吸取10ml母液A，定容至100 ml，用UV-265在403 nm处测D值。根据标准曲线计算质量分数：
质量分数(%)＝(c×V)/m×100%， c：黄色素质量浓度； V：测样体积(ml); m：样品质量(mg)
1.3.3 回收率测定 精密吸取红花母液10 ml，加入黄色素标准液 1 ml，定容至100 ml，测定D值,计算回收率,平均回收率为：(98.12±0.73)%;n=4,RSD=0.75%。
1.4 腺苷含量测定
1.4.1 仪器和试剂 美国Waters公司的高效液相色谱仪；Waters510泵；Waters486 UV检测器；810工作台；U6K进样阀。 冰醋酸(AR)，乙腈(色谱纯)，重蒸馏水, 腺苷对照品(上海丽珠东风生物技术有限公司)。
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1.4.2 色谱条件 色谱柱为Sumlichuosorbrp-18， 20 cm ×0.5 cm；检测波长254 nm；流动相 HAc∶CH3CN∶H2O=0.1∶6∶93.9；流速 0.6 ml/min；室温 18℃。
1.4.3 标准曲线绘制 精密称取腺苷对照品 100.0 mg，定容至 100 ml，得母液 A;精密吸取母液A 10 ml，定容至 100 ml，得母液 B;精密吸取母液B 0.5，3.5，6.5，9.5，12.5，15.5 ml，分别定容至50 ml。用微量进样器分别吸取10 μl进入HPLC仪。以腺苷进样量(μg)为横座标，峰面积为纵坐标(microvolt-second)，得回归方程： Y=9 882.3+4 903 570 X, r =0.999 7。
1.4.4 样品测定 精密称定红花样品约 1 g，加入 20 ml水，70℃保温2 h，提取2次，合并滤液，定容至50 ml。进样量为10 μl。 质量分数(μg/g)＝(X×103 ×50)/(20×m) ,其中X：由标准曲线求得相当于对照品的质量(μg),m：样品质量(g)
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1.4.5 加样回收率测定 精密称定腺苷对照品9.1 mg，70℃溶解，待冷，定容至 25 ml，吸取 0.5 ml (相当于182 μg)，加入红花经两次提取的水提液中，定容至 50 ml，吸取20 μl，进入HPLC仪，测定峰面积，计算回收率，平均回收率为(90.57±2.74)% (n =3， RSD=3.02%)。
1.5 统计学处理 试验结果以方差分析的两两比较法进行检验。
2 结 果
2.1 不同采收期对红花化学成分含量的影响 不同采收期对红花化学成分含量存在显著影响，方差分析结果表明，红花中黄色素和腺苷含量的最高值均在开花后的第3天(表1)，提示在第3天采收时，红花的质量最优。
2.2 不同加工方法对红花化学成分含量的影响 不同加工方法对红花化学成分含量的影响未达到显著意义(表2)。
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表 1 红花不同开花期化学成分的含量
Tab 1 The contents of chemical components
in different flowering days of Safflower(n=3,X±s)
Flowering
days
Safflower
yellow(%)
Adenosine
(wB/10-6)
, http://www.100md.com 0
21.36±0.54
1.31±0.36
1
28.90±0.02
4.27±0.46
2
31.91±0.66
14.20±1.10
3
34.76±0.25**
72.97±5.36***
, http://www.100md.com
4
31.35±0.16
21.91±1.19
**P < 0.01 vs other flowering days; *** P < 0.001 vs other flowering days 表 2 红花不同加工方法化学成分含量
Tab 2 The contents of chemical components by different
processing methods of Safflower crude drug(n=3,X±s)
Processing
, http://www.100md.com methods
Safflower
yellow(%)
Adenosine
(wB/10-6)
Dried in the shade
34.76±0.25
72.97±5.36
Dried in the sun
34.91±0.28
71.90±4.43
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Dried at 45℃
35.04±0.15
72.54±5.61
Dried at 60℃
34.99±0.21
71.63±9.42
3 讨 论
中药质量的稳定与提高，是其进入国际市场的首要条件，在中药的现代化研究中，研究栽培药材的生长发育规律以及有效成分的动态积累规律，掌握适宜的采收、加工方法，具有极其重要的意义。
我们的研究表明，红花在开花后的第3天采收，黄色素和腺苷含量均最高，对于提高红花的质量具有重要意义。关于红花的加工方法，过去在生产上一直是以阴干为主，但遇到雨季，往往造成发霉变质，严重影响药材质量。研究表明红花在60℃以下干燥对其质量没有显著影响，为红花的快速加工提供依据。
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*国家自然科学基金资助项目，批准号39700012
作者简介：上海，200433 郭美丽，女，1963年1月生，博士，讲师
作者单位：第二军医大学药学院生药学教研室
参 考 文 献
1 郭美丽，张汉明，张芝玉.红花本草考证[J].中药材,1996,19(4)：202
2 黄正良，崔祝梅，任 远.红花黄色素的抗凝血作用研究[J].中草药，1987,18(4):22
3 陈希元，马 军，阿不力克木.红花黄素对大鼠动脉血浆中6-Keto-PGF1α和TXB2含量的影响[J].中国药理学通报，1996,12(6):483
, http://www.100md.com
4 Kutsuna H，Fujii S， Kitamura K， et al .Identification and determination of platelet aggregation inhibitor from Safflower (Carthamus tinctorius L.)[J].Yakugaku Zasshi，1988，108(11):1101
5 李 芳，钱树娟，刘凤芝.红花黄素对豚鼠心室乳头肌缺氧和复氧损伤的保护作用[J].中国中医药科技，1997，4(1):9
6 郭美丽,张汉明,张芝玉,等. 不同栽培居群红花的活血化瘀作用比较[J]. 第二军医大学学报,1999,20(1):27
7 郭美丽,张芝玉,张汉明,等. 不同栽培居群红花各器官的组织构造和化学成分含量[J]. 第二军医大学学报,1999,20(7):441, http://www.100md.com
摘 要 目的：探索红花最佳采收期及其加工方法。方法：在对红花进行引种栽培的基础上，在其开花的不同时间采集药材，并进行阴干、晒干、45℃和60℃烘干，UV，HPLC法测定红花的化学成分含量。结果：不同采收期对红花化学成分含量影响显著(P<0.01),不同加工方法对红花化学成分含量影响不显著(P >0.05)。结论：红花在开花后第3天采收最佳，阴干、晒干及60℃以下烘干均不影响其质量。
关键词：红花 采收期 加工方法 化学成分含量
红花(Carthamus tinctorius L. )在我国已有2 100多年的引种栽培与药用历史[1]。研究表明，红花中黄色素和腺苷是红花扩张血管、延长凝血时间、抑制血小板聚集的主要活性成分[2～7]。本研究在对红花进行引种栽培的基础上，采用UV，HPLC法测定了不同采收期及加工方法对上述两种化学成分含量的影响，旨在确定红花最佳采收期及加工方法。
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1 材料和方法
1.1 种植材料 四川简阳红花，种植地点：我院药用植物园;播种期：1994-10-31;出苗期：1994-11-08;开花期：1995-05-24;果实成熟期：1995-0-6-19。
1.2 药材采集和加工方法 在红花开花期对当天所开的花进行挂牌，并从当天开始至花后第4天,于每天早晨 8：30左右采集花冠，阴干。药材加工方法有4种：阴干、晒干、45℃烘干、60℃烘干。
1.3 黄色素含量测定
1.3.1 标准曲线的绘制 精密称取黄色素对照品(日本纯药工业株式会社)103.8 mg，置100 ml容量瓶中，加入70%甲醇溶液溶解至刻度，摇匀，得黄色素标准液。从制成的溶液中精密吸取1.5，3.0，4.5，6.0，7.5，9.0，10.5 ml分别至50 ml容量瓶中，分别加70%甲醇溶液至刻度，摇匀。在403 nm处测光密度(D)，以黄色素浓度为自变量，D值为因变量，求得回归方程：D =-0.002 0+0.050 1 c, r=0.999 9。
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1.3.2 样品处理 精密称取红花粉末各200 mg，加50 ml 70%甲醇溶液浸泡过夜，过滤，残渣加20 ml 70%甲醇溶液浸泡2 h，滤过。用70%甲醇溶液洗涤3次(每次5 ml)，滤液合并，定容至100 ml，得母液A，吸取10ml母液A，定容至100 ml，用UV-265在403 nm处测D值。根据标准曲线计算质量分数：
质量分数(%)＝(c×V)/m×100%， c：黄色素质量浓度； V：测样体积(ml); m：样品质量(mg)
1.3.3 回收率测定 精密吸取红花母液10 ml，加入黄色素标准液 1 ml，定容至100 ml，测定D值,计算回收率,平均回收率为：(98.12±0.73)%;n=4,RSD=0.75%。
1.4 腺苷含量测定
1.4.1 仪器和试剂 美国Waters公司的高效液相色谱仪；Waters510泵；Waters486 UV检测器；810工作台；U6K进样阀。 冰醋酸(AR)，乙腈(色谱纯)，重蒸馏水, 腺苷对照品(上海丽珠东风生物技术有限公司)。
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1.4.2 色谱条件 色谱柱为Sumlichuosorbrp-18， 20 cm ×0.5 cm；检测波长254 nm；流动相 HAc∶CH3CN∶H2O=0.1∶6∶93.9；流速 0.6 ml/min；室温 18℃。
1.4.3 标准曲线绘制 精密称取腺苷对照品 100.0 mg，定容至 100 ml，得母液 A;精密吸取母液A 10 ml，定容至 100 ml，得母液 B;精密吸取母液B 0.5，3.5，6.5，9.5，12.5，15.5 ml，分别定容至50 ml。用微量进样器分别吸取10 μl进入HPLC仪。以腺苷进样量(μg)为横座标，峰面积为纵坐标(microvolt-second)，得回归方程： Y=9 882.3+4 903 570 X, r =0.999 7。
1.4.4 样品测定 精密称定红花样品约 1 g，加入 20 ml水，70℃保温2 h，提取2次，合并滤液，定容至50 ml。进样量为10 μl。 质量分数(μg/g)＝(X×103 ×50)/(20×m) ,其中X：由标准曲线求得相当于对照品的质量(μg),m：样品质量(g)
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1.4.5 加样回收率测定 精密称定腺苷对照品9.1 mg，70℃溶解，待冷，定容至 25 ml，吸取 0.5 ml (相当于182 μg)，加入红花经两次提取的水提液中，定容至 50 ml，吸取20 μl，进入HPLC仪，测定峰面积，计算回收率，平均回收率为(90.57±2.74)% (n =3， RSD=3.02%)。
1.5 统计学处理 试验结果以方差分析的两两比较法进行检验。
2 结 果
2.1 不同采收期对红花化学成分含量的影响 不同采收期对红花化学成分含量存在显著影响，方差分析结果表明，红花中黄色素和腺苷含量的最高值均在开花后的第3天(表1)，提示在第3天采收时，红花的质量最优。
2.2 不同加工方法对红花化学成分含量的影响 不同加工方法对红花化学成分含量的影响未达到显著意义(表2)。
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表 1 红花不同开花期化学成分的含量
Tab 1 The contents of chemical components
in different flowering days of Safflower(n=3,X±s)
Flowering
days
Safflower
yellow(%)
Adenosine
(wB/10-6)
, http://www.100md.com 0
21.36±0.54
1.31±0.36
1
28.90±0.02
4.27±0.46
2
31.91±0.66
14.20±1.10
3
34.76±0.25**
72.97±5.36***
, http://www.100md.com
4
31.35±0.16
21.91±1.19
**P < 0.01 vs other flowering days; *** P < 0.001 vs other flowering days 表 2 红花不同加工方法化学成分含量
Tab 2 The contents of chemical components by different
processing methods of Safflower crude drug(n=3,X±s)
Processing
, http://www.100md.com methods
Safflower
yellow(%)
Adenosine
(wB/10-6)
Dried in the shade
34.76±0.25
72.97±5.36
Dried in the sun
34.91±0.28
71.90±4.43
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Dried at 45℃
35.04±0.15
72.54±5.61
Dried at 60℃
34.99±0.21
71.63±9.42
3 讨 论
中药质量的稳定与提高，是其进入国际市场的首要条件，在中药的现代化研究中，研究栽培药材的生长发育规律以及有效成分的动态积累规律，掌握适宜的采收、加工方法，具有极其重要的意义。
我们的研究表明，红花在开花后的第3天采收，黄色素和腺苷含量均最高，对于提高红花的质量具有重要意义。关于红花的加工方法，过去在生产上一直是以阴干为主，但遇到雨季，往往造成发霉变质，严重影响药材质量。研究表明红花在60℃以下干燥对其质量没有显著影响，为红花的快速加工提供依据。
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*国家自然科学基金资助项目，批准号39700012
作者简介：上海，200433 郭美丽，女，1963年1月生，博士，讲师
作者单位：第二军医大学药学院生药学教研室
参 考 文 献
1 郭美丽，张汉明，张芝玉.红花本草考证[J].中药材,1996,19(4)：202
2 黄正良，崔祝梅，任 远.红花黄色素的抗凝血作用研究[J].中草药，1987,18(4):22
3 陈希元，马 军，阿不力克木.红花黄素对大鼠动脉血浆中6-Keto-PGF1α和TXB2含量的影响[J].中国药理学通报，1996,12(6):483
, http://www.100md.com
4 Kutsuna H，Fujii S， Kitamura K， et al .Identification and determination of platelet aggregation inhibitor from Safflower (Carthamus tinctorius L.)[J].Yakugaku Zasshi，1988，108(11):1101
5 李 芳，钱树娟，刘凤芝.红花黄素对豚鼠心室乳头肌缺氧和复氧损伤的保护作用[J].中国中医药科技，1997，4(1):9
6 郭美丽,张汉明,张芝玉,等. 不同栽培居群红花的活血化瘀作用比较[J]. 第二军医大学学报,1999,20(1):27
7 郭美丽,张芝玉,张汉明,等. 不同栽培居群红花各器官的组织构造和化学成分含量[J]. 第二军医大学学报,1999,20(7):441, http://www.100md.com