高浓度草酸对古糖酯(G872)与晶体粘附作用的影响
作者：邓岗 张岩 耿美玉 辛现良 李静 管华诗
单位：邓岗 张岩 耿美玉 辛现良 李静 管华诗(青岛海洋大学海洋药物与食品研究所，青岛 266003)
关键词：高草酸，古糖酯(G872)，晶体粘附
中国海洋药物000505 摘 要 应用Coulter DELSA 440 zeta电位仪测定一水草酸钙晶体表面的zeta电位，研究高浓度草酸(0.2mmol.L-1、0.4mmol.L-1)对古糖酯(G872)与一水草酸钙晶体粘附作用的影响；并应用[3H]G872研究高浓度草酸下G872在一水草酸钙晶体表面的粘附变化。结果表明高草酸下晶体表面的zeta电位负值自24.5mV降低至20.6mV，晶体表面的放射强度显著低于空白对照组(P<0.05、P<0.01)，提示高草酸下只有较少的大分子聚阴离子大分子抑制物(如 G872)粘附到晶体表面，从而解释了高草酸降低尿路结石症大分子抑制物抑制活性的原因。
, http://www.100md.com
THE INFLUENCE OF HIGH CONCENTRATION OF OXALATE ON G872 AND CALCIUM OXALATE MONOHYDRATE CRYSTALS INTERACTION
Deng Gang Zhang Yan Geng Meiyu Xing Xianliang Guan Huashi
(Institute of Drugs and Food,Ocean University of Qingdao,Qingdao 266003)
ABSTRACT In our previous paper,we have addressed that the high concentration of oxalate interfered with the inhibitory activity of macromolecular weight inhibitors ,such as G872,on calcium oxalate monohydrate 1 crystals growth and agglomeration.The current paper focused on the mechanism of this influence by using of zeta potential measurement.Meanwhile [3H]G872 was also employed to study the influence of oxalate on crystals and G872 interaction.The results showed that the negative zeta potential values decreased from- 24.5mV to -20.6mV and -18.7mV(G872)in present of high concentration of oxalate of 0.2mmol.L-1 and 0.4mmol.L-1 respectively,revealed either less G872 binding to the crystal surface or weaker charged G872 binding to the crystal surface of combination.However the less radioactivity of crystals with hot G872 in present of high concentration of oxalate indicated exclusively less oxalate G872 binding to the crystal surface.
, 百拇医药
KEY WORDS High concentration oxalate,G872, Binding
自Robertson[1]的尿路结石症大分子抑制物学说建立以来，尿液大分子抑制物的研究已进行多年，在已发现的大分子抑制物中，糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAGs)对草酸钙晶体和磷酸钙晶体的生长、聚集具有很强的抑制作用。由青岛海洋大学海洋药物与食品研究所以海藻为原料，经物理化学方法制得的古糖酯(G872)是一种海洋硫酸多糖。实验表明它在体外可以抑制一水草酸钙(COMH)晶体和磷酸钙晶体的生长和聚集[2，3]，并具有抑制COMH晶体向细胞表面粘附的作用[4]。此外，将G872加到正常人和复发性尿路结石症患者尿液中也可以显著提高尿液对COMH晶体生长和聚集的抑制活性，提示G872具有抑制含钙结石发病和复发的潜能。1997年Cao和Deng[5]报道高浓度草酸可能降低内源性糖胺聚糖(硫酸软骨素)和外源性硫酸多糖(G872)的抑制活性。本文研究高草酸对大分子抑制物粘附于COMH晶体表面后对zeta电位的影响，并应用[3H]G872研究高草酸条件下G872在COMH晶体表面粘附性的变化，从而部分地解释了高浓度草酸降低大分子抑制物抑制作用的原因。
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1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 药品与试剂 古糖酯(G872)：批号940517，青岛海洋大学海洋药物与食品研究所药化室提供(无定型白色粉末，分子量6000±500，纯度92%～95%)；[3H]G872：中科院原子能研究所选用循环曝射法制备，放射强度385MBq.mg-1，放射化学纯度大于95%；硫酸软骨素C(CS-C)：购自Sigma公司；多聚硫酸戊糖(SP54)：购自德国Bene Arzneimittel GmbH公司。实验用其它试剂均为分析纯。
1.1.2 仪器 Coulter DELSA 440型zeta电位仪：美国Coulter公司；Beckman LS 5000TD液闪仪：美国Beckman公司。
1.2 方法
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1.2.1 一水草酸钙(calcium oxalate monohydrate,COMH)晶体的制备 采用Sheehan和Nancollas法[6]。室温下，将1L
0.25mol.L-1的氯化钙溶液于1h内滴入1L 0.25mol.L-1的草酸钠溶液中，其间不断搅拌。形成的COMH晶体用蒸馏水冲洗多遍，直至溶液中检测不到氯离子为止。用纯水将晶体配成12mg.mL-1的混悬液，70℃振荡水浴保温2h。晶体使用前至少于常温下放置3周。粒度分析表明晶体平均直径为2.4μm,X-射线衍射测定晶体为COMH。
1.2.2 人工尿液的配制[7] A液：每升纯水中含有二水氯化钙1.765g、硫酸钠4.862g、七水硫酸镁1.460g、氯化铵4.643g、氯化钾12.133g。B液：每升纯水中含有二水磷酸二氢钠6.800g、无水磷酸氢二钠0.869g、二水柠檬酸钠1.168g、氯化钠0.166g。
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A液和B液分别于4℃冰箱中保存，使用前将A∶B∶纯水=1∶1∶18混合，然后加入20mmol.L-1的草酸钠溶液至终浓度为0.06mmol.L-1,人工尿pH6.0，离子强度0.033。
1.2.3 高浓度草酸对大分子抑制物zeta电位的影响 取3组1.5mL Eppendorff试管，各加入1mL 0.05mol.L-1(pH7.0)的PBS缓冲液，再在不同组别的试管中分别加入G872、SP54、硫酸软骨素C(CS-C)至终浓度为1mg.L-1；然后向第Ⅰ组试管中加入20μl 12mg.mL-1的COMH晶体悬液，向Ⅱ、Ⅲ组试管中先分别加入20mmol.L-1的草酸钠溶液至终浓度为0.2mmol.L-1和0.4
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mmol.L-1，再加入与第Ⅰ组试管等量的COMH晶体，另设空白对照管只在试管中加入1mL PBS和COMH晶体。37℃振荡水浴中温育2h后10000rpm离心，沉淀的晶体经饱和草酸钙溶液冲洗3次，最后悬浮于3mL人工尿中，上机测定晶体的zeta电位。每检测点有6个小管，实验重复4次。
1.2.4 高草酸对[3H]G872在COMH晶体表面粘附的影响 取3系列 1.5mL Eppendorff 试管，各加入1mL 0.05ml.L-1(pH7.0)的PBS缓冲液，再分别于各系列试管中加入G872溶液至终浓度为0ng.mL-1、125ng.mL-1、250ng.mL-1、500ng.mL-1、1000ng.mL-1,然后各试管均加入痕量的
, 百拇医药
[3H]G872。之后向Ⅰ系列试管中加入20μL 12g.L-1的COMH晶体悬液；第Ⅱ、Ⅲ系列试管先分别加入20mmol.L-1的草酸钠溶液至终浓度0.2mmol.L-1和0.4mmol.L-1,再加入与第Ⅰ系列试管等量的COMH晶体。所有试管于37℃振荡水浴中温育2h，10000rpm离心，分离出的晶体用饱和草酸钙溶液冲洗3次，最后用1ml 1mol.L-1的高氯酸将晶体溶解，取0.5mL溶液加入测量瓶中，再加入5mL闪烁液，上机测定放射强度。每检测点有6个小管，试验重复4次。
2 结果
2.1 高草酸对抑制物zeta电位的影响 zeta电位是颗粒表面的电位，它表征了颗粒表面的带电特性，就尿路结石症体外研究而言，它是研究晶体与大分子抑制物、晶体与细胞作用的重要指标。颗粒表面的zeta电位数值越高，它们相互接近就需要越过更高的能量屏障，因此颗粒之间越不易碰撞而发生粘附。本实验结果表明(图1)，与空白对照晶体表面的zeta电位值相比(-6.43mV),体系中加入大分子抑制物后的变化趋势一致,均可以提高zeta电位的负值3～4倍(-17.6～-24.5mV)，提示抑制物粘附到晶体表面可以显著增加晶体表面的负电分布，其中G872的作用最强。但在高草酸(0.2mmol.L-1、0.4
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mmol.L-1)下，zeta电位向正方向移动(-14.0～-20.6mV)，提示高草酸条件下晶体表面的负电荷分布有所减少，表明高浓度草酸可以减少大分子抑制物在晶体表面的粘附或是降低了大分子抑制物表面的电荷数目。
图1 高草酸对抑制物zeta电位的影响
抑制物：体系中仅有抑制物；抑制物+：体系中草酸钠浓度为0.2mmol.L-1；抑制物++：体系中草酸钠浓度为0.4mmol.L-1。
2.2 高草酸对[3H]G872在COMH晶体表面粘附的影响 所测放射性结果经与总放射性比较，得晶体表面放射性的百分数与G872浓度作图。结果(图2)表明，在3个系列溶液体系中，无草酸体系晶体上G872粘附最多，而随着草酸浓度自0.2mmol.L-1升至
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0.4mmol.L-1，同-G872浓度检测点放射强度显著下降，并随草酸浓度的增加晶体表面的放射强度显著下降(P<0.05或P<0.01)，提示高草酸能减少G872在COMH晶体表面的粘附。
图2 高草酸对晶体粘附的影响
G872：体系中仅有G872；G872+：体系中草酸浓度为0.2mmol.L-1;G872++：体系中草酸浓度为0.4mmol.L-1。
G872+组各点 P<0.05，G872++组各点 P<0.01 vs G872
3 讨论
, 百拇医药
Robertson早在70年代末就提出高草酸尿是尿路结石症发病致病最危险的因素[8]。与尿钙相比，尿草酸对尿液中草酸钙过饱和度的影响更大[9]。此外，高草酸还可以引起肾小管的损伤，而后者正是尿石形成的主要病理基础。
尿液大分子抑制物中，糖胺聚糖对草酸钙晶体和磷酸钙晶体的生长、聚集具有很强的抑制作用。外源性的大分子抑制物中直链型硫酸多糖因其结构和性质与酸性粘多糖相似，受到广泛地重视和深入地研究。在过去20年里，应用外源性硫酸多糖预防和治疗尿石症的研究是尿石研究中的一个热点，而且已发现外源性硫酸多糖如SP54和G872在体外能显著抑制COMH晶体生长和聚集。一般认为多糖类大分子抑制物的作用机理是：(1)大分子抑制物粘附到晶体表面，一方面覆盖于晶体的生长点形成一层保护膜，从而抑制晶体的生长；另一方面改变晶体表面的电荷分布，使晶体表面带有更多的负电荷，增加晶体之间的相互斥力，提高晶体间的能量屏障，抑制晶体的聚集 (2)带负电荷的硫酸多糖可以有效地修补受损的肾小管上皮组织，防止晶体粘附到上皮损伤部位，阻止晶体向结石的转变[10]。尿液中存在着多种大分子抑制物，有报道认为大分子抑制物的抑制活性不能简单地以代数方法累加[11]，说明大分子抑制物之间、大分子与小分子之间、分子与介质之间的相互作用部分地抵消了它们的作用效果。
, 百拇医药
此前大分子抑制尿路结石症研究多集中在它对晶体生长和聚集的抑制作用以及对肾小管上皮细胞的损伤的保护作用。最近的研究发现，高草酸能降低尿液中内源性糠胺聚糖和外源性硫酸多糖的抑制活性[5]。本实验采用zeta电位测定法和[3H]G872晶体粘附法研究高草酸(0.2mmol.L-1和0.4mmol.L-1)对晶体zeta电位和G872在晶体表面粘附的影响，结果表明高草酸能够显著降低晶体zeta电位的负值，并能显著减少[3H]G872在晶体表面的粘附。本实验选择的两个高草酸剂量分别接近人高草酸尿和大鼠服用成石剂(饮水中加入1%氯化铵和1%乙二醇)后尿草酸浓度的高限，这也提示在选择诱发高草酸的成石模型评价大分子抑制物时必须要考虑草酸的影响。
致谢 本文承蒙上海市第五人民医院泌尿外科何家扬教授审阅并提建设性意见，特此感谢!
, 百拇医药
参考文献
1，Robertson WG,Peacock M,Nordin BE:Inhibitors of the growth and aggregation of calcium oxalate crystals in vitro.Clin Chim Acta,1973,43:31
2，Cao LC,Boeve ER,Schroder FH,Robertson WG,Ketelaars GA,de Bruijn WC:The effect of two new semisynthetic glycosaminoglycans(G871,G872)on the zeta potential of calcium oxalate crystals and on growth and agglomeration.J Urol,1992,147:1643
3，Boeve ER,Cao LC,Deng G,de Bruijn WC,Schroder FH:Effect of two new polysaccharides on growth,agglomeration and zeta potential of calcium phosphate crystals.J Urol,1996,155:368
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4，Verkoelen CF,Romijn JC,Cao LC,Boeve ER,de Bruijn WC,Schroder FH:Crystal-cell interaction inhibition by polysaccharides.J Urol,1996,155:749
5，Cao LC,Deng G,Boeve ER,Romijn JC,de Bruijn WC,Verkoelen CF,Schroder FH:Does urinary oxalate interfere with the inhibitory role of glycosaminoglycans and semi-synthetic sulfated polysaccharides in calcium oxalate crystallization?Eur Urol,1997,31:485
6，Sheehan ME,Nancollas GH:Calcium oxalate crystal growth:A new constant composition method for modelling urinary stone formation.Invest Urol,1980,17:446
, 百拇医药
7，Scurr DS,Robertson WG:Modifiers of clacium oxalate crystllization found in urine.J Urol,1986,136:128
8，Robertson WG,Peacock M,Heybrun PJ:Risk factors in calcium stone disease of the urinary tract.Br J Urol,1978,50:449
9，Hallson PC:Hyperoxaluria in calcium oxalate urolithiasis.In: Wickham JEA.Buck AC eds.Renal Tract Stone.London:Churchill Livingstone.1990,271
10，Cao LC,Boeve ER,De Bruijn,Kok DJ,De Water R,Deng G and Schroder FH:Glycosaminoglycans and semisynthetic sulfated polysaccharides: An voerview fo their potential application in treatment of patients with urilithiasis.Urology,1997,50:173
11，Cao LC,Deng G,Boeve ER,de Bruijn WC,de Water R,Verkoelen CF,Romijn JC,Schroder FH:Zeta potential measurement and particle size analysis for a better understanding of urinary inhibitors of calcium oxalate crystallization.Scanning Microsc,1996,10:110, 百拇医药
单位：邓岗 张岩 耿美玉 辛现良 李静 管华诗(青岛海洋大学海洋药物与食品研究所，青岛 266003)
关键词：高草酸，古糖酯(G872)，晶体粘附
中国海洋药物000505 摘 要 应用Coulter DELSA 440 zeta电位仪测定一水草酸钙晶体表面的zeta电位，研究高浓度草酸(0.2mmol.L-1、0.4mmol.L-1)对古糖酯(G872)与一水草酸钙晶体粘附作用的影响；并应用[3H]G872研究高浓度草酸下G872在一水草酸钙晶体表面的粘附变化。结果表明高草酸下晶体表面的zeta电位负值自24.5mV降低至20.6mV，晶体表面的放射强度显著低于空白对照组(P<0.05、P<0.01)，提示高草酸下只有较少的大分子聚阴离子大分子抑制物(如 G872)粘附到晶体表面，从而解释了高草酸降低尿路结石症大分子抑制物抑制活性的原因。
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THE INFLUENCE OF HIGH CONCENTRATION OF OXALATE ON G872 AND CALCIUM OXALATE MONOHYDRATE CRYSTALS INTERACTION
Deng Gang Zhang Yan Geng Meiyu Xing Xianliang Guan Huashi
(Institute of Drugs and Food,Ocean University of Qingdao,Qingdao 266003)
ABSTRACT In our previous paper,we have addressed that the high concentration of oxalate interfered with the inhibitory activity of macromolecular weight inhibitors ,such as G872,on calcium oxalate monohydrate 1 crystals growth and agglomeration.The current paper focused on the mechanism of this influence by using of zeta potential measurement.Meanwhile [3H]G872 was also employed to study the influence of oxalate on crystals and G872 interaction.The results showed that the negative zeta potential values decreased from- 24.5mV to -20.6mV and -18.7mV(G872)in present of high concentration of oxalate of 0.2mmol.L-1 and 0.4mmol.L-1 respectively,revealed either less G872 binding to the crystal surface or weaker charged G872 binding to the crystal surface of combination.However the less radioactivity of crystals with hot G872 in present of high concentration of oxalate indicated exclusively less oxalate G872 binding to the crystal surface.
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KEY WORDS High concentration oxalate,G872, Binding
自Robertson[1]的尿路结石症大分子抑制物学说建立以来，尿液大分子抑制物的研究已进行多年，在已发现的大分子抑制物中，糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAGs)对草酸钙晶体和磷酸钙晶体的生长、聚集具有很强的抑制作用。由青岛海洋大学海洋药物与食品研究所以海藻为原料，经物理化学方法制得的古糖酯(G872)是一种海洋硫酸多糖。实验表明它在体外可以抑制一水草酸钙(COMH)晶体和磷酸钙晶体的生长和聚集[2，3]，并具有抑制COMH晶体向细胞表面粘附的作用[4]。此外，将G872加到正常人和复发性尿路结石症患者尿液中也可以显著提高尿液对COMH晶体生长和聚集的抑制活性，提示G872具有抑制含钙结石发病和复发的潜能。1997年Cao和Deng[5]报道高浓度草酸可能降低内源性糖胺聚糖(硫酸软骨素)和外源性硫酸多糖(G872)的抑制活性。本文研究高草酸对大分子抑制物粘附于COMH晶体表面后对zeta电位的影响，并应用[3H]G872研究高草酸条件下G872在COMH晶体表面粘附性的变化，从而部分地解释了高浓度草酸降低大分子抑制物抑制作用的原因。
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1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 药品与试剂 古糖酯(G872)：批号940517，青岛海洋大学海洋药物与食品研究所药化室提供(无定型白色粉末，分子量6000±500，纯度92%～95%)；[3H]G872：中科院原子能研究所选用循环曝射法制备，放射强度385MBq.mg-1，放射化学纯度大于95%；硫酸软骨素C(CS-C)：购自Sigma公司；多聚硫酸戊糖(SP54)：购自德国Bene Arzneimittel GmbH公司。实验用其它试剂均为分析纯。
1.1.2 仪器 Coulter DELSA 440型zeta电位仪：美国Coulter公司；Beckman LS 5000TD液闪仪：美国Beckman公司。
1.2 方法
, 百拇医药
1.2.1 一水草酸钙(calcium oxalate monohydrate,COMH)晶体的制备 采用Sheehan和Nancollas法[6]。室温下，将1L
0.25mol.L-1的氯化钙溶液于1h内滴入1L 0.25mol.L-1的草酸钠溶液中，其间不断搅拌。形成的COMH晶体用蒸馏水冲洗多遍，直至溶液中检测不到氯离子为止。用纯水将晶体配成12mg.mL-1的混悬液，70℃振荡水浴保温2h。晶体使用前至少于常温下放置3周。粒度分析表明晶体平均直径为2.4μm,X-射线衍射测定晶体为COMH。
1.2.2 人工尿液的配制[7] A液：每升纯水中含有二水氯化钙1.765g、硫酸钠4.862g、七水硫酸镁1.460g、氯化铵4.643g、氯化钾12.133g。B液：每升纯水中含有二水磷酸二氢钠6.800g、无水磷酸氢二钠0.869g、二水柠檬酸钠1.168g、氯化钠0.166g。
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A液和B液分别于4℃冰箱中保存，使用前将A∶B∶纯水=1∶1∶18混合，然后加入20mmol.L-1的草酸钠溶液至终浓度为0.06mmol.L-1,人工尿pH6.0，离子强度0.033。
1.2.3 高浓度草酸对大分子抑制物zeta电位的影响 取3组1.5mL Eppendorff试管，各加入1mL 0.05mol.L-1(pH7.0)的PBS缓冲液，再在不同组别的试管中分别加入G872、SP54、硫酸软骨素C(CS-C)至终浓度为1mg.L-1；然后向第Ⅰ组试管中加入20μl 12mg.mL-1的COMH晶体悬液，向Ⅱ、Ⅲ组试管中先分别加入20mmol.L-1的草酸钠溶液至终浓度为0.2mmol.L-1和0.4
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mmol.L-1，再加入与第Ⅰ组试管等量的COMH晶体，另设空白对照管只在试管中加入1mL PBS和COMH晶体。37℃振荡水浴中温育2h后10000rpm离心，沉淀的晶体经饱和草酸钙溶液冲洗3次，最后悬浮于3mL人工尿中，上机测定晶体的zeta电位。每检测点有6个小管，实验重复4次。
1.2.4 高草酸对[3H]G872在COMH晶体表面粘附的影响 取3系列 1.5mL Eppendorff 试管，各加入1mL 0.05ml.L-1(pH7.0)的PBS缓冲液，再分别于各系列试管中加入G872溶液至终浓度为0ng.mL-1、125ng.mL-1、250ng.mL-1、500ng.mL-1、1000ng.mL-1,然后各试管均加入痕量的
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[3H]G872。之后向Ⅰ系列试管中加入20μL 12g.L-1的COMH晶体悬液；第Ⅱ、Ⅲ系列试管先分别加入20mmol.L-1的草酸钠溶液至终浓度0.2mmol.L-1和0.4mmol.L-1,再加入与第Ⅰ系列试管等量的COMH晶体。所有试管于37℃振荡水浴中温育2h，10000rpm离心，分离出的晶体用饱和草酸钙溶液冲洗3次，最后用1ml 1mol.L-1的高氯酸将晶体溶解，取0.5mL溶液加入测量瓶中，再加入5mL闪烁液，上机测定放射强度。每检测点有6个小管，试验重复4次。
2 结果
2.1 高草酸对抑制物zeta电位的影响 zeta电位是颗粒表面的电位，它表征了颗粒表面的带电特性，就尿路结石症体外研究而言，它是研究晶体与大分子抑制物、晶体与细胞作用的重要指标。颗粒表面的zeta电位数值越高，它们相互接近就需要越过更高的能量屏障，因此颗粒之间越不易碰撞而发生粘附。本实验结果表明(图1)，与空白对照晶体表面的zeta电位值相比(-6.43mV),体系中加入大分子抑制物后的变化趋势一致,均可以提高zeta电位的负值3～4倍(-17.6～-24.5mV)，提示抑制物粘附到晶体表面可以显著增加晶体表面的负电分布，其中G872的作用最强。但在高草酸(0.2mmol.L-1、0.4
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mmol.L-1)下，zeta电位向正方向移动(-14.0～-20.6mV)，提示高草酸条件下晶体表面的负电荷分布有所减少，表明高浓度草酸可以减少大分子抑制物在晶体表面的粘附或是降低了大分子抑制物表面的电荷数目。
图1 高草酸对抑制物zeta电位的影响
抑制物：体系中仅有抑制物；抑制物+：体系中草酸钠浓度为0.2mmol.L-1；抑制物++：体系中草酸钠浓度为0.4mmol.L-1。
2.2 高草酸对[3H]G872在COMH晶体表面粘附的影响 所测放射性结果经与总放射性比较，得晶体表面放射性的百分数与G872浓度作图。结果(图2)表明，在3个系列溶液体系中，无草酸体系晶体上G872粘附最多，而随着草酸浓度自0.2mmol.L-1升至
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0.4mmol.L-1，同-G872浓度检测点放射强度显著下降，并随草酸浓度的增加晶体表面的放射强度显著下降(P<0.05或P<0.01)，提示高草酸能减少G872在COMH晶体表面的粘附。
图2 高草酸对晶体粘附的影响
G872：体系中仅有G872；G872+：体系中草酸浓度为0.2mmol.L-1;G872++：体系中草酸浓度为0.4mmol.L-1。
G872+组各点 P<0.05，G872++组各点 P<0.01 vs G872
3 讨论
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Robertson早在70年代末就提出高草酸尿是尿路结石症发病致病最危险的因素[8]。与尿钙相比，尿草酸对尿液中草酸钙过饱和度的影响更大[9]。此外，高草酸还可以引起肾小管的损伤，而后者正是尿石形成的主要病理基础。
尿液大分子抑制物中，糖胺聚糖对草酸钙晶体和磷酸钙晶体的生长、聚集具有很强的抑制作用。外源性的大分子抑制物中直链型硫酸多糖因其结构和性质与酸性粘多糖相似，受到广泛地重视和深入地研究。在过去20年里，应用外源性硫酸多糖预防和治疗尿石症的研究是尿石研究中的一个热点，而且已发现外源性硫酸多糖如SP54和G872在体外能显著抑制COMH晶体生长和聚集。一般认为多糖类大分子抑制物的作用机理是：(1)大分子抑制物粘附到晶体表面，一方面覆盖于晶体的生长点形成一层保护膜，从而抑制晶体的生长；另一方面改变晶体表面的电荷分布，使晶体表面带有更多的负电荷，增加晶体之间的相互斥力，提高晶体间的能量屏障，抑制晶体的聚集 (2)带负电荷的硫酸多糖可以有效地修补受损的肾小管上皮组织，防止晶体粘附到上皮损伤部位，阻止晶体向结石的转变[10]。尿液中存在着多种大分子抑制物，有报道认为大分子抑制物的抑制活性不能简单地以代数方法累加[11]，说明大分子抑制物之间、大分子与小分子之间、分子与介质之间的相互作用部分地抵消了它们的作用效果。
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此前大分子抑制尿路结石症研究多集中在它对晶体生长和聚集的抑制作用以及对肾小管上皮细胞的损伤的保护作用。最近的研究发现，高草酸能降低尿液中内源性糠胺聚糖和外源性硫酸多糖的抑制活性[5]。本实验采用zeta电位测定法和[3H]G872晶体粘附法研究高草酸(0.2mmol.L-1和0.4mmol.L-1)对晶体zeta电位和G872在晶体表面粘附的影响，结果表明高草酸能够显著降低晶体zeta电位的负值，并能显著减少[3H]G872在晶体表面的粘附。本实验选择的两个高草酸剂量分别接近人高草酸尿和大鼠服用成石剂(饮水中加入1%氯化铵和1%乙二醇)后尿草酸浓度的高限，这也提示在选择诱发高草酸的成石模型评价大分子抑制物时必须要考虑草酸的影响。
致谢 本文承蒙上海市第五人民医院泌尿外科何家扬教授审阅并提建设性意见，特此感谢!
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参考文献
1，Robertson WG,Peacock M,Nordin BE:Inhibitors of the growth and aggregation of calcium oxalate crystals in vitro.Clin Chim Acta,1973,43:31
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