两种中药多糖对巨噬细胞超微结构影响的分析
作者：王淑静 杨建军 张焱
单位：(宁夏医学院中心实验室，银川 740004)
关键词：枸杞多糖(LBPS)；红毛五加(AGPS)；超微结构
宁夏医学院学报000502 摘要：目的：分析枸杞多糖(LBPS)和红毛五加多糖(AGPS)对小鼠腹腔巨噬细胞超微结构影响。方法：LBPS、AGPS分别腹腔注射于BALB/C小鼠体内，120h后取出腹腔液，分离巨噬细胞。常规扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)标本制作，置JSM—35G扫描电镜和H—600透射电镜下观察。结果：LBPS、AGPS组巨噬细胞表面微绒毛数目增多、增长、增粗，胞质内糖原颗粒增多，线粒体增大；出现大量初、次级溶酶体，与对照组形成明显差异，尤以LBPS组为明显。结论：LBPS、AGPS增强小鼠腹腔巨噬细胞功能的形态学改变是一致的。
中图分类号：R329.2+4 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1005-8486(2000)05-0316-03
Effect of Polysaccharides of Two Chinese Medicines
on the Ultrastructure of Macrophage
WANG Shu-jin,YANG Jian-jun,ZHANG Yan
(Central Laboratory of Ningxia Med.Coll.Yinchuan 750004)
Abstract:Objective:Analyzing the effect of lycium barbarum polysaccharide (LBPS) and Acanthopanax Giraldilarms Polysaccharide (AGPS) on the ultramicrostructure of macrophage from mouse peritoneal cavity.Methods:Injecting LBPS and AGPS respectively into the BALB/C mice peritoneal cavity,taking out the fluid 120 hours later,isolating the macrophage and making samples for scanning electron microscopy and TEM observing under the JSM-35G and H-600.Results:The tiny villi on the surface of macrophage were increased,lengthened and thickened.The glycogen particles in LBPS and AGPS gorup were increased and chondriosome became large and lots of elementary and secondary lysosome appeared,being quite different from those of the control group,especially in the LBPS group.Conclusion:The morphology transformations of mouse macrophage potentiated with LBPS or with AGPS show basically similar.
, 百拇医药
Key words:lycium barbarum polysaccharide;acanthopanax giraldilarms polysaccharide (AGPS);ultrastructure
中药枸杞、红毛五加经现代医学技术均已提得纯度较高的多糖成份。已有报道，二者均可使巨噬细胞数量增加，体积增大，伪足增多，吞噬活力显著增强，细胞内DNA、RNA、糖原体、多种酶活性显著增强[1，2]。其细胞化学改变的形态学基础是否一致，乃是本文的旨意。
1 材料与方法
1.1 18～20g雄性健康BALB/C小鼠，购于北京市肿瘤防治研究所。
1.2 药品
1.2.1 枸杞多糖：宁夏中药厂提取纯品，按1mg/ml浓度生理盐水配制，8磅10min高压灭菌，现用现配。
, 百拇医药
1.2.2 红毛五加多糖：中国中医研究院基础所提取纯品，按5mg/ml浓度生理盐水配制，8磅10min高压灭菌，现用现配。
1.3 分组
1.3.1 对照组：小鼠8只，腹腔注射无菌生理盐水0.2ml/只/d。
1.3.2 枸杞多糖(LBPS)组：小鼠8只，腹腔注射LBPS?0.2ml/只/d[1]。
1.3.3 红毛五加多糖(AGPS)组：小鼠8只腹腔注射AGPS?1mg/0.2ml/只/d[2]。
1.4 实验方法 三组动物，每日按时腹腔注射，连用5d?120h后断颈放血，腹腔立即注射Hanks液2ml，轻揉腹部；剖腹吸取腹腔液0.5ml，用于制作标
, 百拇医药
本。
1.5 扫描电镜的标本制作 腹腔液0.5ml置离心管，加等量2%戊二醛4℃固定2h后，常规缓冲液换洗[3]，系列酒精脱水。临界点干燥、喷金，JSM—35G型扫描电镜观察。
1.6 透射电镜的标本制作 同上步骤缓冲液换洗后，1%OSO4后固定，系列酒精脱水；环氧树脂包埋，超薄切片。醋酸铀、硝酸铅双重染色，置H—600电镜下详细观察，并留照比较。
2 结果
2.1 扫描电镜观察结果
2.1.1 对照组：巨噬细胞呈圆形、椭圆形，表面布满微绒毛。显得平坦，多呈小短杆状突起，偶有交错重叠现象，或突起稍粗大(图1)。
, 百拇医药 2.1.2 LBPS组：巨噬细胞体积增大，呈圆形/棱形/长形/不规则形。表面微绒毛增多、增长、增粗，甚或融成云片状，重叠交错或呈簇，显得密集杂乱，还可见较长的伪足(图2)。
2.1.3 AGPS组：巨噬细胞体积增大，呈椭圆/棱形/不规则形，表面微绒毛增多、增长、增粗，亦见融成较薄云片状，重叠交错(图3)。
2.2 透射电镜观察结果
2.2.1 对照组：巨噬细胞表面可见较小、较细的突起，细胞核呈圆形或椭圆形，局部略有凹陷，双层核膜清晰，核孔存在，核仁可见，染色质分布无异常。细胞质内糖原颗粒较少，核蛋白体可见；线粒体界线清楚，双层膜完整；崤突向腔内，崤间隙存在，粗面内质网发达，滑面内质网散在，溶酶体少见。
2.2.2 LBPS组：巨噬细胞处于极度活跃状态，细胞表面突起增多、增粗、增长，交错重叠。核呈圆或椭圆形，局部有凹陷，核膜清晰，核孔可见，核仁易见，常染色质丰富，未见异常。粗面内质网丰富，未见脱粒、扩大现象；滑面内质网增多。但溶酶体增多更明显，尤以次级溶酶体为明显，且可见其多种状态(图5)。
, 百拇医药
2.2.3 红毛五加组：巨噬细胞显极度活跃状态，细胞表面突增多、增长，交错重叠。核呈圆/椭圆形，局部凹陷，双层核膜清晰，核孔存在，核仁易见，常染色质丰富。细胞质内糖原颗粒增多，核蛋白体可见，线粒体丰富。结构未见异常。粗面内质网和滑面内质网未见明显改变，可见大量初、次级溶酶体，以后者更为多见(图6)。
图1 扫描电镜观察对照组巨噬细胞×9600
, 百拇医药
图2 扫描电镜观察LBPS组巨噬细胞×9600
图3 扫描电镜观察AGPS组巨噬细胞×9600
图4 透射电镜观察对照组巨噬细胞×10000
图5 透射电镜观察LBPS组巨噬细胞×10000
图6 透射电镜观察AGPS组巨噬细胞×10000
3 讨论
巨噬细胞是人体内吞噬作用最强的细胞，是免疫应答中的效应细胞，受到刺激的巨噬细胞进一步分化成熟，成为活化巨噬细胞，使细胞体积增大，活力增强。糖氧化作用增强，溶酶体大量增多，吞噬功能增强，能有效地执行其功能[4]。腹腔注射枸杞多糖、红毛五加多糖可激活巨噬细胞。超微结构显示细胞极度活跃，细胞表面微绒毛增多、增长、增粗，甚至出现伪足。细胞内糖原颗粒增多，为能量的需求增多提供充分原料；线粒体的增加，其内酶含量相对增多，加速分解ATP，促进三羧酸循环，以提供更多的能量，适应更多的能量代谢、细胞运动、吞噬、物质转运，致巨噬细胞运动和吞噬功能提高。
, 百拇医药
细胞内溶酶体是人体防御系统的重要组成部分，能消除细胞内的外源性异物和内源性残杂物，内有特异的标志酶，并以标志酶活力强弱来表示巨噬细胞的活化能力大小。本实验溶酶体数目增多，体积增大，各种形态均出现，为其功能活跃的形态学表现。
两种中药多糖均有激活小鼠腹腔巨噬细胞活性
功能，尤以LBP为明显。
参考文献：
[1] 张明军，胡庆和，贾本立.枸杞多糖对小鼠腹腔巨噬细胞作用的定量细胞化学研究[J].宁夏医学院学报，1994，16(4)：307
[2] 胡庆和，谢锦云，张位峡，等.红毛五加多糖对巨噬细胞细胞化学和超微结构的影响[J].中国组织化学和细胞化学杂志，1994，3(4)：366
[3] 洪 涛，等.生物医学超微结构与电子显微镜技术[M].北京科学出版社，1980.103-194
[4] 成令忠.组织学[M].第二版.北京：人民卫生出版社，1993.230
收稿日期：2000-04-24, 百拇医药
单位：(宁夏医学院中心实验室，银川 740004)
关键词：枸杞多糖(LBPS)；红毛五加(AGPS)；超微结构
宁夏医学院学报000502 摘要：目的：分析枸杞多糖(LBPS)和红毛五加多糖(AGPS)对小鼠腹腔巨噬细胞超微结构影响。方法：LBPS、AGPS分别腹腔注射于BALB/C小鼠体内，120h后取出腹腔液，分离巨噬细胞。常规扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)标本制作，置JSM—35G扫描电镜和H—600透射电镜下观察。结果：LBPS、AGPS组巨噬细胞表面微绒毛数目增多、增长、增粗，胞质内糖原颗粒增多，线粒体增大；出现大量初、次级溶酶体，与对照组形成明显差异，尤以LBPS组为明显。结论：LBPS、AGPS增强小鼠腹腔巨噬细胞功能的形态学改变是一致的。
中图分类号：R329.2+4 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1005-8486(2000)05-0316-03
Effect of Polysaccharides of Two Chinese Medicines
on the Ultrastructure of Macrophage
WANG Shu-jin,YANG Jian-jun,ZHANG Yan
(Central Laboratory of Ningxia Med.Coll.Yinchuan 750004)
Abstract:Objective:Analyzing the effect of lycium barbarum polysaccharide (LBPS) and Acanthopanax Giraldilarms Polysaccharide (AGPS) on the ultramicrostructure of macrophage from mouse peritoneal cavity.Methods:Injecting LBPS and AGPS respectively into the BALB/C mice peritoneal cavity,taking out the fluid 120 hours later,isolating the macrophage and making samples for scanning electron microscopy and TEM observing under the JSM-35G and H-600.Results:The tiny villi on the surface of macrophage were increased,lengthened and thickened.The glycogen particles in LBPS and AGPS gorup were increased and chondriosome became large and lots of elementary and secondary lysosome appeared,being quite different from those of the control group,especially in the LBPS group.Conclusion:The morphology transformations of mouse macrophage potentiated with LBPS or with AGPS show basically similar.
, 百拇医药
Key words:lycium barbarum polysaccharide;acanthopanax giraldilarms polysaccharide (AGPS);ultrastructure
中药枸杞、红毛五加经现代医学技术均已提得纯度较高的多糖成份。已有报道，二者均可使巨噬细胞数量增加，体积增大，伪足增多，吞噬活力显著增强，细胞内DNA、RNA、糖原体、多种酶活性显著增强[1，2]。其细胞化学改变的形态学基础是否一致，乃是本文的旨意。
1 材料与方法
1.1 18～20g雄性健康BALB/C小鼠，购于北京市肿瘤防治研究所。
1.2 药品
1.2.1 枸杞多糖：宁夏中药厂提取纯品，按1mg/ml浓度生理盐水配制，8磅10min高压灭菌，现用现配。
, 百拇医药
1.2.2 红毛五加多糖：中国中医研究院基础所提取纯品，按5mg/ml浓度生理盐水配制，8磅10min高压灭菌，现用现配。
1.3 分组
1.3.1 对照组：小鼠8只，腹腔注射无菌生理盐水0.2ml/只/d。
1.3.2 枸杞多糖(LBPS)组：小鼠8只，腹腔注射LBPS?0.2ml/只/d[1]。
1.3.3 红毛五加多糖(AGPS)组：小鼠8只腹腔注射AGPS?1mg/0.2ml/只/d[2]。
1.4 实验方法 三组动物，每日按时腹腔注射，连用5d?120h后断颈放血，腹腔立即注射Hanks液2ml，轻揉腹部；剖腹吸取腹腔液0.5ml，用于制作标
, 百拇医药
本。
1.5 扫描电镜的标本制作 腹腔液0.5ml置离心管，加等量2%戊二醛4℃固定2h后，常规缓冲液换洗[3]，系列酒精脱水。临界点干燥、喷金，JSM—35G型扫描电镜观察。
1.6 透射电镜的标本制作 同上步骤缓冲液换洗后，1%OSO4后固定，系列酒精脱水；环氧树脂包埋，超薄切片。醋酸铀、硝酸铅双重染色，置H—600电镜下详细观察，并留照比较。
2 结果
2.1 扫描电镜观察结果
2.1.1 对照组：巨噬细胞呈圆形、椭圆形，表面布满微绒毛。显得平坦，多呈小短杆状突起，偶有交错重叠现象，或突起稍粗大(图1)。
, 百拇医药 2.1.2 LBPS组：巨噬细胞体积增大，呈圆形/棱形/长形/不规则形。表面微绒毛增多、增长、增粗，甚或融成云片状，重叠交错或呈簇，显得密集杂乱，还可见较长的伪足(图2)。
2.1.3 AGPS组：巨噬细胞体积增大，呈椭圆/棱形/不规则形，表面微绒毛增多、增长、增粗，亦见融成较薄云片状，重叠交错(图3)。
2.2 透射电镜观察结果
2.2.1 对照组：巨噬细胞表面可见较小、较细的突起，细胞核呈圆形或椭圆形，局部略有凹陷，双层核膜清晰，核孔存在，核仁可见，染色质分布无异常。细胞质内糖原颗粒较少，核蛋白体可见；线粒体界线清楚，双层膜完整；崤突向腔内，崤间隙存在，粗面内质网发达，滑面内质网散在，溶酶体少见。
2.2.2 LBPS组：巨噬细胞处于极度活跃状态，细胞表面突起增多、增粗、增长，交错重叠。核呈圆或椭圆形，局部有凹陷，核膜清晰，核孔可见，核仁易见，常染色质丰富，未见异常。粗面内质网丰富，未见脱粒、扩大现象；滑面内质网增多。但溶酶体增多更明显，尤以次级溶酶体为明显，且可见其多种状态(图5)。
, 百拇医药
2.2.3 红毛五加组：巨噬细胞显极度活跃状态，细胞表面突增多、增长，交错重叠。核呈圆/椭圆形，局部凹陷，双层核膜清晰，核孔存在，核仁易见，常染色质丰富。细胞质内糖原颗粒增多，核蛋白体可见，线粒体丰富。结构未见异常。粗面内质网和滑面内质网未见明显改变，可见大量初、次级溶酶体，以后者更为多见(图6)。
图1 扫描电镜观察对照组巨噬细胞×9600
, 百拇医药
图2 扫描电镜观察LBPS组巨噬细胞×9600
图3 扫描电镜观察AGPS组巨噬细胞×9600
图4 透射电镜观察对照组巨噬细胞×10000
图5 透射电镜观察LBPS组巨噬细胞×10000
图6 透射电镜观察AGPS组巨噬细胞×10000
3 讨论
巨噬细胞是人体内吞噬作用最强的细胞，是免疫应答中的效应细胞，受到刺激的巨噬细胞进一步分化成熟，成为活化巨噬细胞，使细胞体积增大，活力增强。糖氧化作用增强，溶酶体大量增多，吞噬功能增强，能有效地执行其功能[4]。腹腔注射枸杞多糖、红毛五加多糖可激活巨噬细胞。超微结构显示细胞极度活跃，细胞表面微绒毛增多、增长、增粗，甚至出现伪足。细胞内糖原颗粒增多，为能量的需求增多提供充分原料；线粒体的增加，其内酶含量相对增多，加速分解ATP，促进三羧酸循环，以提供更多的能量，适应更多的能量代谢、细胞运动、吞噬、物质转运，致巨噬细胞运动和吞噬功能提高。
, 百拇医药
细胞内溶酶体是人体防御系统的重要组成部分，能消除细胞内的外源性异物和内源性残杂物，内有特异的标志酶，并以标志酶活力强弱来表示巨噬细胞的活化能力大小。本实验溶酶体数目增多，体积增大，各种形态均出现，为其功能活跃的形态学表现。
两种中药多糖均有激活小鼠腹腔巨噬细胞活性
功能，尤以LBP为明显。
参考文献：
[1] 张明军，胡庆和，贾本立.枸杞多糖对小鼠腹腔巨噬细胞作用的定量细胞化学研究[J].宁夏医学院学报，1994，16(4)：307
[2] 胡庆和，谢锦云，张位峡，等.红毛五加多糖对巨噬细胞细胞化学和超微结构的影响[J].中国组织化学和细胞化学杂志，1994，3(4)：366
[3] 洪 涛，等.生物医学超微结构与电子显微镜技术[M].北京科学出版社，1980.103-194
[4] 成令忠.组织学[M].第二版.北京：人民卫生出版社，1993.230
收稿日期：2000-04-24, 百拇医药