肺冲击伤对大鼠学习、记忆能力的影响及其机制
蒋建新** Ibolja Cernak 王正国 廖维宏 徐 红 刘大维 石 林 李晓炎 王克万
提 要 目的：探讨胸部局部冲击伤后大鼠神经行为功能改变，及肺冲击伤对中枢神经系统的影响。方法：致伤前，动物均在一计算机控制的双向穿梭箱内连续训练6 d，每天连续训练20次，以获得主动回避反射(AAR)。在最后2 d的训练中，AAR≥80%的大鼠被选用于冲击伤实验。采用BST-Ⅲ生物激波管致大鼠单纯肺冲击伤。脑组织内NO-2/NO-3、cGMP含量分别采用比色测定试剂盒和酶免疫测定试剂盒进行测定。结果：①肺冲击伤后，大鼠AAR和ER明显下降，主动回避反应潜伏期(AARL)明显延长。②肺冲击伤后3、24 h和5 d，海马和脑干组织内NO-2/NO-3、cGMP含量明显升高。③海马和脑干组织内NO-2/NO-3水平变化分别与肺冲击伤伤情、AAR、ER和AARL值呈显著相关性。结论：单纯肺冲击伤可引起远隔器官-中枢神经系统功能损害，其机制可能与海马和脑干组织内NO释放增多有关。
, 百拇医药
关键词：肺冲击伤 神经创伤
肺脏是冲击波作用的主要靶器官，因而肺损伤往往是决定冲击伤伤情发展、转归及预后的主要因素[1]。临床观察发现[2]，冲击伤伤员也常常出现意识障碍、昏睡、眩晕、头痛、近事遗忘等症状。这种中枢神经系统损害是否为肺冲击伤的继发性改变，迄今尚未得到阐明。
近年研究表明[3～5]，一氧化氮(nitric oxide,NO)在神经、免疫、心血管等多个系统中具有广泛而复杂的生理与病理作用。然而，关于冲击伤时脑组织内NO的变化及其与神经行为功能改变的关系，迄今尚未见文献报道。本研究采用我室自行设计的BST-Ⅲ型生物激波管，以主动回避反应(Active avoidance response,AAR)作为学习和记忆的指标，探讨了单纯肺冲击伤后神经行为功能改变、海马和脑干组织内NO的变化及其相互关系，为阐明肺冲击伤对中枢神经系统功能的影响及其机制提供实验依据。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 实验动物 研究选用雄性Wistar大鼠20只，体重220～270 g。致伤前，所有动物均进行AAR训练。实验选用经训练后AAR≥80%的动物。随机将动物分为冲击伤后3 h(n=6)、24 h(n=8)和5 d(n=6)3组。
1.2 胸部局部冲击伤模型
用BST-Ⅲ型生物激波管致伤。 氯胺酮肌注麻醉(35 mg/kg)后，将大鼠侧放入盒内(铺有海绵)，使激波管口正对着右侧胸部中央，同时用一铁板保护身体其它部位。管口距离胸部6.25m，入射超压峰值为440 kPa，正压作用时间为50 ms。
1.3 AAR训练
采用自行设计、计算机控制的光信号刺激的双向穿梭箱(Two-way shuttle box)，大小为48 cm×22 cm×22.5 cm，两室之间有拱形小门相通。箱底由铜棒组成，可通交流电(5 mA，持续5s)产生足电震(foot shock)。两室内各装一小灯泡，以灯光作为条件刺激，建立条件性穿梭反应，即AAR。其方法是：先让大鼠在箱内适应环境5min，然后呈现灯光(为条件刺激，约40 1ux，持续5s)，如果大鼠在灯亮后不逃至暗室，5s后则自动给予电击(为非条件刺激，5mA，持续5s)，使大鼠学会见到灯光即跑到暗室的条件反应。若动物见灯亮后自行跑到暗室则为AAR，所需时间为主动回避反应潜伏期(Active avoidance response latency,AARL)，若动物见灯亮后仍需电刺激才跑到暗室则为逃避反应(Escape response,ER)，所需时间为逃避反应潜伏期(Escape response latency,ERL)。依此方法动物每天连续训练20次，每次间隔为30 s，连续训练6d，以AAR次数占训练次数的百分比即为AAR习得率(Acquisition)，反映其学习能力。然后选取最后2d内习得率均≥80%的动物用于冲击伤实验。分别在冲击伤后3、24 h和5d，再测试动物AAR，检测其记忆保持能力。以上实验均在避光和安静的环境中进行。
, http://www.100md.com
1.4 冲击伤伤情评估
对冲击伤伤情同时进行定性和定量评估。伤情的定性评估标准为：无伤；轻伤：出血点呈点状或散在性分布，出血总面积小于全肺面积的10%；中度：较多的点状出血，有片状出血，出血总面积<全肺面积的50%；重度：较多片状出血，偶见大片出血，出血总面积约为50%的全肺表面积，肺切面有泡沫状水肿液溢出；极重度：较多大片状出血，甚至肺实变，出血面积大于50%肺表面积，气管中有较多的血性泡沫液。
冲击伤伤情的定量评估采用Yelverton记分法[6]。
1.5 亚硝酸盐/硝酸盐(NO-2/NO-3)含量测定
分别在冲击伤后3、24 h和5d，断头活杀动物，取海马和脑干组织，置液氮速冻，-70°C保存。脑组织于磷酸盐缓冲液(pH 7.4，1∶10，g/v)中匀浆，匀浆液置高速冷冻离心机中离心，10000×g，10 min，随后超高速离心，100000×g,15 min。应用0.45 μm滤器过滤，随后采用10 kDa分子量的滤器进行超滤。采用NO比色测定试剂盒(Cayman Chemical Company,USA)进行测定。
, 百拇医药
1.6 cGMP测定
将脑组织置磷酸缓冲液(0.05 mmol/L,pH7.4)-10%三氯乙酸中(1∶10，g/ml)匀浆，1500×g离心10 min，取上清，上清液经乙醚反复抽提3次(5份体积乙醚：1份体积样本)以去除三氯乙酸，然后70°C，加热5min，去除样本中剩余的乙醚。采用酶免疫测定试剂盒测定cGMP。
1.7 蛋白质测定
组织标本蛋白质含量测定采用Bradford法[7]。
1.8 统计学分析
数据以X±s表示。选用软件Staticica 5.0进行t检验和相关分析。
2 结果
, 百拇医药
2.1 冲击伤伤情
大体解剖结果显示，胸部局部暴露冲击波后，绝大多数动物肺脏呈较多的点状或片状出血，出血总面积占全肺面积的40%～50%，为中度肺损伤，仅少数动物肺脏呈散在的点状出血，出血总面积小于全肺面积的10%，为轻度肺损伤，其它脏器未见明显改变。
Yelverton评分结果显示，伤后3、24 h和第5天，肺冲击伤评分值分别为：35.6±12.5，23±8.9和7.2±6.3。
2.2 脑组织内NO-2/NO-3含量的变化
脑冲击伤后3h，海马和脑干组织内NO-2/NO-3含量即显著高于基础值，伤后24 h仍显著升高，脑干组织内NO-2/NO-3含量在伤后5 d仍明显高于伤前，见图1。
, http://www.100md.com
图1 胸部局部冲击伤后海马与脑干组织内NO-2/NO-3含量的变化与基础值比较，**：P<0.01,***：P<0.001
Fig 1 Changes of NO-2/NO-3 contents in hippocampus and brainstem tissues after local blast injury of chest **：P<0.01，***：P<0.001 vs baseline values
2.3 脑组织内cGMP含量的变化
肺冲击伤后，海马和脑干组织内cGMP含量均明显高于伤前，见图2。
图2 胸部局部冲击伤后海马与脑干组织内cGMP含量的变化与基础值比较，*:P<0.05,**：P<0.01
, 百拇医药
Fig 2 Changes of cGMP contents in hippocampus and brainstem tissues after local blast injury of chest *:P<0.05，**P<0.01 vs baseline values
2.4 ERL和AARL变化
肺冲击伤时，AARL分别在伤后3、24 h明显延长，ERL无明显变化，见表1。
表1 单纯肺冲击伤后ERL和AARL的变化
Tab 1 Changes of ERL and AARL after simple pulmonary blast injury
Baseline
, 百拇医药 3 h
Baseline
24 h
Baseline
5 d
ERL
5.68±0.36
6.28±0.57
5.58±0.35
5.86±0.56
5.71±0.18
5.50±0.17
, http://www.100md.com
AARL
2.46±0.47
3.66±0.99#
2.73±0.42
3.32±0.56#
3.10±0.19
3.02±0.30
#：P<0.05 vs baseline values
2.5 AAR和ER变化 肺冲击伤后，AAR均显著低于伤前，ER明显高于伤前，见表2。
表2 单纯肺冲击伤后AAR和ER的变化
, 百拇医药
Tab 2 Changes of AAR and ER after simple pulmonary blast injury
Baseline
3 h
Baseline
24 h
Baseline
5 d
AAR
80.8±14.2
39.2±22.7##
83.7±7.9
, http://www.100md.com
63.5±31.1#
84.2±8
75±10.9#
ER
20.8±15.6
59.2±22.2##
16.3±7.9
36.5±31.1#
15.8±8
25±10.9#
#：P<0.05，##：P<0.01 vs baseline values
, 百拇医药
2.6 NO变化与神经行为功能改变、冲击伤伤情的相关分析
肺冲击伤后，脑干组织内NO-2/NO-3含量变化也与冲击伤伤情、AAR、AARL、ERL呈显著的相关性(γ=0.87,-0.56,0.75,0.89,P<0.01)。
3 讨论
大体解剖结果显示，胸部局部暴露冲击波后，动物肺脏呈较多的点状或片状出因，出血总面积占全肺面积的40%～50%,为中度肺损伤，而其它脏器未见改变。说明胸部局部冲击波暴露仅造成单纯肺脏冲击伤。
神经行为功能检查显示，胸部局部冲击伤后，大鼠AAR明显下降，ER明显升高，AARL明显延长，提示大鼠学习和记忆能力下降，说明胸部局部暴露冲击波引起的肺冲击波可进一步造成远隔器官-中枢神经系统的损害。
, 百拇医药
研究结果进一步显示，肺冲击伤后，海马与脑干组织内NO-2/NO-3含量均显著升高，其中海马组织内NO-2/NO-3含量随伤后时间延长而递增。相关分析表明，脑组织内NO-2/NO-3含量变化与肺冲击伤伤情呈显著正相关。提示肺冲击伤后脑组织内NO生成明显增多，其机制可能与压力波传播、脑组织缺血缺氧以及神经内分泌反应有关。
现已研究证实[4]，正常情况下，在中枢神经系统内合成的NO是调节脑内信息传递、突触可逆性(学习与记忆)等方面的重要介质。然而，病理情况下，如脑缺血时，脑内NO产量显著增加，此时则产生细胞毒作用，因而又是神经系统损伤的重要机制[5]。相关分析显示，脑干组织内NO-2/NO-3含量变化与AAR、ER、AARL呈显著相关性。提示NO产生增加可能是肺冲击伤导致远隔器官-中枢神经系统损害的重要机制之一。
, 百拇医药
与其它介质不同，NO的各种活性不是通过细胞膜受体介导的，主要是通过激活细胞内可溶性鸟苷酸环化酶，使细胞内cGMP浓度迅速升高，cGMP随后调节蛋白激酶、磷酸二脂酶和离子通道等而产生不同的生物学作用[5]。本研究也发现，肺冲击伤后，海马与脑干组织内cGMP水平均显著升高。此外，NO诱导颅脑冲击伤的作用机制可能还与以下因素有关：(1)协同或增强氧自由基作用[8]；(2)使含巯基类蛋白硝基化[9]，影响信息传导；(3)促进谷氨酸等兴奋性氨基酸释放，介导兴奋毒性损伤[9]。
*全军“九五”指令性课题，No.96L040
**蒋建新，男，36岁，研究员，博士
*This project was supported by the "Ninth five" obligatory budget of PLA,No.96L040
, 百拇医药
作者单位：第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第四研究室 重庆，400042
参考文献
1 黎 鳌，盛志勇，王正国 主编.现代战伤外科.北京：人民军医出版社，1998.93～126
2 Clemedson C J. Blast injury. Physiol Rev,1956,36(2):336
3 Rosselli M, Keller P J, Dubey R K. Role of nitric oxide in the biology,physiology and pathophysiology of reproduction. Hum Reprod Update,1998,4(1):3
4 赵保路，陈惟昌.NO自由基的性质及其生理功能.生物化学与生物物理进展，1993，20(5)：409
, 百拇医药
5 Dawson T M, Dawson V L, Snyder S H. Molecular mechanisms of nitric oxide actions in the brain. Ann N Y Acad Sci,1995,Nov.17,738:76
6 Yeverton J T. Pathology scoring system for blast injuries. J Trauma,1996,40(Suppl):S111
7 Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem,1976,238(2):248
8 Bechman J S, Chen J, Crow J P, et al. Reactions of nitric oxide,superoxide and peroxynitrite with superoxide dismutase in neurodegeneration. Prog Brain Res,1994,103(2):371
9 Gross S S, Wolin M S. Nitric oxide:pathophysiological mechanism. Annu Rev Physiol,1995,57(3):737, http://www.100md.com(蒋建新** Ibolja Cernak 王正国 廖维宏 徐 红 刘大维 石 林 李晓炎 王克万)
提 要 目的：探讨胸部局部冲击伤后大鼠神经行为功能改变，及肺冲击伤对中枢神经系统的影响。方法：致伤前，动物均在一计算机控制的双向穿梭箱内连续训练6 d，每天连续训练20次，以获得主动回避反射(AAR)。在最后2 d的训练中，AAR≥80%的大鼠被选用于冲击伤实验。采用BST-Ⅲ生物激波管致大鼠单纯肺冲击伤。脑组织内NO-2/NO-3、cGMP含量分别采用比色测定试剂盒和酶免疫测定试剂盒进行测定。结果：①肺冲击伤后，大鼠AAR和ER明显下降，主动回避反应潜伏期(AARL)明显延长。②肺冲击伤后3、24 h和5 d，海马和脑干组织内NO-2/NO-3、cGMP含量明显升高。③海马和脑干组织内NO-2/NO-3水平变化分别与肺冲击伤伤情、AAR、ER和AARL值呈显著相关性。结论：单纯肺冲击伤可引起远隔器官-中枢神经系统功能损害，其机制可能与海马和脑干组织内NO释放增多有关。
, 百拇医药
关键词：肺冲击伤 神经创伤
肺脏是冲击波作用的主要靶器官，因而肺损伤往往是决定冲击伤伤情发展、转归及预后的主要因素[1]。临床观察发现[2]，冲击伤伤员也常常出现意识障碍、昏睡、眩晕、头痛、近事遗忘等症状。这种中枢神经系统损害是否为肺冲击伤的继发性改变，迄今尚未得到阐明。
近年研究表明[3～5]，一氧化氮(nitric oxide,NO)在神经、免疫、心血管等多个系统中具有广泛而复杂的生理与病理作用。然而，关于冲击伤时脑组织内NO的变化及其与神经行为功能改变的关系，迄今尚未见文献报道。本研究采用我室自行设计的BST-Ⅲ型生物激波管，以主动回避反应(Active avoidance response,AAR)作为学习和记忆的指标，探讨了单纯肺冲击伤后神经行为功能改变、海马和脑干组织内NO的变化及其相互关系，为阐明肺冲击伤对中枢神经系统功能的影响及其机制提供实验依据。
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1 材料和方法
1.1 实验动物 研究选用雄性Wistar大鼠20只，体重220～270 g。致伤前，所有动物均进行AAR训练。实验选用经训练后AAR≥80%的动物。随机将动物分为冲击伤后3 h(n=6)、24 h(n=8)和5 d(n=6)3组。
1.2 胸部局部冲击伤模型
用BST-Ⅲ型生物激波管致伤。 氯胺酮肌注麻醉(35 mg/kg)后，将大鼠侧放入盒内(铺有海绵)，使激波管口正对着右侧胸部中央，同时用一铁板保护身体其它部位。管口距离胸部6.25m，入射超压峰值为440 kPa，正压作用时间为50 ms。
1.3 AAR训练
采用自行设计、计算机控制的光信号刺激的双向穿梭箱(Two-way shuttle box)，大小为48 cm×22 cm×22.5 cm，两室之间有拱形小门相通。箱底由铜棒组成，可通交流电(5 mA，持续5s)产生足电震(foot shock)。两室内各装一小灯泡，以灯光作为条件刺激，建立条件性穿梭反应，即AAR。其方法是：先让大鼠在箱内适应环境5min，然后呈现灯光(为条件刺激，约40 1ux，持续5s)，如果大鼠在灯亮后不逃至暗室，5s后则自动给予电击(为非条件刺激，5mA，持续5s)，使大鼠学会见到灯光即跑到暗室的条件反应。若动物见灯亮后自行跑到暗室则为AAR，所需时间为主动回避反应潜伏期(Active avoidance response latency,AARL)，若动物见灯亮后仍需电刺激才跑到暗室则为逃避反应(Escape response,ER)，所需时间为逃避反应潜伏期(Escape response latency,ERL)。依此方法动物每天连续训练20次，每次间隔为30 s，连续训练6d，以AAR次数占训练次数的百分比即为AAR习得率(Acquisition)，反映其学习能力。然后选取最后2d内习得率均≥80%的动物用于冲击伤实验。分别在冲击伤后3、24 h和5d，再测试动物AAR，检测其记忆保持能力。以上实验均在避光和安静的环境中进行。
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1.4 冲击伤伤情评估
对冲击伤伤情同时进行定性和定量评估。伤情的定性评估标准为：无伤；轻伤：出血点呈点状或散在性分布，出血总面积小于全肺面积的10%；中度：较多的点状出血，有片状出血，出血总面积<全肺面积的50%；重度：较多片状出血，偶见大片出血，出血总面积约为50%的全肺表面积，肺切面有泡沫状水肿液溢出；极重度：较多大片状出血，甚至肺实变，出血面积大于50%肺表面积，气管中有较多的血性泡沫液。
冲击伤伤情的定量评估采用Yelverton记分法[6]。
1.5 亚硝酸盐/硝酸盐(NO-2/NO-3)含量测定
分别在冲击伤后3、24 h和5d，断头活杀动物，取海马和脑干组织，置液氮速冻，-70°C保存。脑组织于磷酸盐缓冲液(pH 7.4，1∶10，g/v)中匀浆，匀浆液置高速冷冻离心机中离心，10000×g，10 min，随后超高速离心，100000×g,15 min。应用0.45 μm滤器过滤，随后采用10 kDa分子量的滤器进行超滤。采用NO比色测定试剂盒(Cayman Chemical Company,USA)进行测定。
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1.6 cGMP测定
将脑组织置磷酸缓冲液(0.05 mmol/L,pH7.4)-10%三氯乙酸中(1∶10，g/ml)匀浆，1500×g离心10 min，取上清，上清液经乙醚反复抽提3次(5份体积乙醚：1份体积样本)以去除三氯乙酸，然后70°C，加热5min，去除样本中剩余的乙醚。采用酶免疫测定试剂盒测定cGMP。
1.7 蛋白质测定
组织标本蛋白质含量测定采用Bradford法[7]。
1.8 统计学分析
数据以X±s表示。选用软件Staticica 5.0进行t检验和相关分析。
2 结果
, 百拇医药
2.1 冲击伤伤情
大体解剖结果显示，胸部局部暴露冲击波后，绝大多数动物肺脏呈较多的点状或片状出血，出血总面积占全肺面积的40%～50%，为中度肺损伤，仅少数动物肺脏呈散在的点状出血，出血总面积小于全肺面积的10%，为轻度肺损伤，其它脏器未见明显改变。
Yelverton评分结果显示，伤后3、24 h和第5天，肺冲击伤评分值分别为：35.6±12.5，23±8.9和7.2±6.3。
2.2 脑组织内NO-2/NO-3含量的变化
脑冲击伤后3h，海马和脑干组织内NO-2/NO-3含量即显著高于基础值，伤后24 h仍显著升高，脑干组织内NO-2/NO-3含量在伤后5 d仍明显高于伤前，见图1。
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图1 胸部局部冲击伤后海马与脑干组织内NO-2/NO-3含量的变化与基础值比较，**：P<0.01,***：P<0.001
Fig 1 Changes of NO-2/NO-3 contents in hippocampus and brainstem tissues after local blast injury of chest **：P<0.01，***：P<0.001 vs baseline values
2.3 脑组织内cGMP含量的变化
肺冲击伤后，海马和脑干组织内cGMP含量均明显高于伤前，见图2。
图2 胸部局部冲击伤后海马与脑干组织内cGMP含量的变化与基础值比较，*:P<0.05,**：P<0.01
, 百拇医药
Fig 2 Changes of cGMP contents in hippocampus and brainstem tissues after local blast injury of chest *:P<0.05，**P<0.01 vs baseline values
2.4 ERL和AARL变化
肺冲击伤时，AARL分别在伤后3、24 h明显延长，ERL无明显变化，见表1。
表1 单纯肺冲击伤后ERL和AARL的变化
Tab 1 Changes of ERL and AARL after simple pulmonary blast injury
Baseline
, 百拇医药 3 h
Baseline
24 h
Baseline
5 d
ERL
5.68±0.36
6.28±0.57
5.58±0.35
5.86±0.56
5.71±0.18
5.50±0.17
, http://www.100md.com
AARL
2.46±0.47
3.66±0.99#
2.73±0.42
3.32±0.56#
3.10±0.19
3.02±0.30
#：P<0.05 vs baseline values
2.5 AAR和ER变化 肺冲击伤后，AAR均显著低于伤前，ER明显高于伤前，见表2。
表2 单纯肺冲击伤后AAR和ER的变化
, 百拇医药
Tab 2 Changes of AAR and ER after simple pulmonary blast injury
Baseline
3 h
Baseline
24 h
Baseline
5 d
AAR
80.8±14.2
39.2±22.7##
83.7±7.9
, http://www.100md.com
63.5±31.1#
84.2±8
75±10.9#
ER
20.8±15.6
59.2±22.2##
16.3±7.9
36.5±31.1#
15.8±8
25±10.9#
#：P<0.05，##：P<0.01 vs baseline values
, 百拇医药
2.6 NO变化与神经行为功能改变、冲击伤伤情的相关分析
肺冲击伤后，脑干组织内NO-2/NO-3含量变化也与冲击伤伤情、AAR、AARL、ERL呈显著的相关性(γ=0.87,-0.56,0.75,0.89,P<0.01)。
3 讨论
大体解剖结果显示，胸部局部暴露冲击波后，动物肺脏呈较多的点状或片状出因，出血总面积占全肺面积的40%～50%,为中度肺损伤，而其它脏器未见改变。说明胸部局部冲击波暴露仅造成单纯肺脏冲击伤。
神经行为功能检查显示，胸部局部冲击伤后，大鼠AAR明显下降，ER明显升高，AARL明显延长，提示大鼠学习和记忆能力下降，说明胸部局部暴露冲击波引起的肺冲击波可进一步造成远隔器官-中枢神经系统的损害。
, 百拇医药
研究结果进一步显示，肺冲击伤后，海马与脑干组织内NO-2/NO-3含量均显著升高，其中海马组织内NO-2/NO-3含量随伤后时间延长而递增。相关分析表明，脑组织内NO-2/NO-3含量变化与肺冲击伤伤情呈显著正相关。提示肺冲击伤后脑组织内NO生成明显增多，其机制可能与压力波传播、脑组织缺血缺氧以及神经内分泌反应有关。
现已研究证实[4]，正常情况下，在中枢神经系统内合成的NO是调节脑内信息传递、突触可逆性(学习与记忆)等方面的重要介质。然而，病理情况下，如脑缺血时，脑内NO产量显著增加，此时则产生细胞毒作用，因而又是神经系统损伤的重要机制[5]。相关分析显示，脑干组织内NO-2/NO-3含量变化与AAR、ER、AARL呈显著相关性。提示NO产生增加可能是肺冲击伤导致远隔器官-中枢神经系统损害的重要机制之一。
, 百拇医药
与其它介质不同，NO的各种活性不是通过细胞膜受体介导的，主要是通过激活细胞内可溶性鸟苷酸环化酶，使细胞内cGMP浓度迅速升高，cGMP随后调节蛋白激酶、磷酸二脂酶和离子通道等而产生不同的生物学作用[5]。本研究也发现，肺冲击伤后，海马与脑干组织内cGMP水平均显著升高。此外，NO诱导颅脑冲击伤的作用机制可能还与以下因素有关：(1)协同或增强氧自由基作用[8]；(2)使含巯基类蛋白硝基化[9]，影响信息传导；(3)促进谷氨酸等兴奋性氨基酸释放，介导兴奋毒性损伤[9]。
*全军“九五”指令性课题，No.96L040
**蒋建新，男，36岁，研究员，博士
*This project was supported by the "Ninth five" obligatory budget of PLA,No.96L040
, 百拇医药
作者单位：第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第四研究室 重庆，400042
参考文献
1 黎 鳌，盛志勇，王正国 主编.现代战伤外科.北京：人民军医出版社，1998.93～126
2 Clemedson C J. Blast injury. Physiol Rev,1956,36(2):336
3 Rosselli M, Keller P J, Dubey R K. Role of nitric oxide in the biology,physiology and pathophysiology of reproduction. Hum Reprod Update,1998,4(1):3
4 赵保路，陈惟昌.NO自由基的性质及其生理功能.生物化学与生物物理进展，1993，20(5)：409
, 百拇医药
5 Dawson T M, Dawson V L, Snyder S H. Molecular mechanisms of nitric oxide actions in the brain. Ann N Y Acad Sci,1995,Nov.17,738:76
6 Yeverton J T. Pathology scoring system for blast injuries. J Trauma,1996,40(Suppl):S111
7 Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem,1976,238(2):248
8 Bechman J S, Chen J, Crow J P, et al. Reactions of nitric oxide,superoxide and peroxynitrite with superoxide dismutase in neurodegeneration. Prog Brain Res,1994,103(2):371
9 Gross S S, Wolin M S. Nitric oxide:pathophysiological mechanism. Annu Rev Physiol,1995,57(3):737, http://www.100md.com(蒋建新** Ibolja Cernak 王正国 廖维宏 徐 红 刘大维 石 林 李晓炎 王克万)