沙赛普肽注射液的细菌内毒素检测
作者：杨宁莲 任力
单位：杨宁莲(宁夏自治区人民医院 银川 750021)；任力(宁夏自治区中医院)
关键词：沙赛普肽注射液；鲎试剂；细菌内毒素
中国现代应用药学000622 摘要 目的：用鲎试剂检测沙赛普肽注射液中的细菌内毒素。方法：采用鲎试法(LT)与家兔法(RT)对沙赛普肽注射液进行细菌内毒素检测。结果：两种方法检查结果一致，用直接稀释法排除细菌内毒素的干扰。结论：以鲎试法用于控制沙赛普肽注射液的热原方法可行。
The discussion on the endotoxin inspction method of cerebroprotein injection
Yang Ninlian(Yang NL),Ren Li(Ren L)
, http://www.100md.com
(Ningxia Region Hospital,Yingchuan 750021)
ABSTRACT OBJECTIVE：To test the bacterial endotoxin in cerebroprotein injection by tachypleas amebocyte lysate.METHODS:The experiment set were tested using limulus test and rabbit tests.RESULTS:The two methods can be used to determine bacterial endotoxin,the result shows that the interference elements can be excluded.CONCLUSION:The limulus test is effective method to control pyrogen of cerebroprotein injection.
, 百拇医药
KEY WORDS cerebroprotein injection,bacterial endotoxin,tachypleus amebocyte lysate
沙赛普肽是从动物脑组织中提取精制而得的无菌制剂。用于老年性痴呆、脑血栓、脑出血、脑外伤后遗症，动脉硬化引起的脑萎缩等症状。笔者就我院在临床用药过程中偶而出现热原反应引起的一些疑意，除对所用的输液按中国药典1995年版二部LT检测外，对沙赛普肽注射液进行了细菌内毒素实验考察。结果与家兔法一致，表明以鲎试法用于控制沙赛普肽注射液的热原方法是可行的。
1 药品与试剂
鲎试剂(批号:990106,λ=0.5EU/ml,0.1ml/支)；细菌内毒素标准品(批号:981020,效价:10EU/支)；鲎试剂溶解水(批号:980910,内毒素含量(0.03Eu/ml,10ml/支)；以上试剂均为厦门鲎试剂厂生产；沙赛普肽注射液(批号:9901141,9904221和9902251),宁夏沙赛制药有限公司;HH.S21-4电热恒温水浴锅(北京长安科学仪器厂);XW-80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；玻璃吸管，实验前经250℃干烤2h。
, http://www.100md.com
2 实验方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核实验 按中国药典95年版二部“细菌内毒素检查法”操作。根据所用鲎试剂灵敏度，将细菌内毒素标准品按1∶2等比系列，用鲎试剂溶解水将细菌内毒素标准品稀释成系列浓度为:1,0.5,0.25,0.125和0.06EU/ml。取每一浓度0.1ml，加入鲎试剂0.1ml中，每一稀释液平行做4管,37℃恒温水浴，保温60min。结果见表1。
表1 鲎试剂灵敏度复核实验 内毒素浓度/EU.ml-1
1.0
0.5
0.25
0.125
, 百拇医药 0.06
阴性对照
反应结果
1
+
+
-
-
-
-
2
+
+
-
, 百拇医药
-
-
-
3
+
+
-
-
-
-
4
+
+
-
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-
-
-
2.2 沙赛普肽注射液细菌内毒素限值确定 根据公式L=K/M,式中L为细菌内毒素限值，K为细菌内毒素标准品的致热阈值，即K=5EU/kg,M为热原检查剂量，根据沙赛普肽注射液静脉滴注每次最大用量为20ml,按人均体重60kg计算，应为:L=K/M=5(20/60)=15.02EU/ml。本品细菌内毒素理论限值为15.02EU/ml,沙赛普肽注射液最大有效稀释度(MVD)=L/λ=15.02/0.5=30.04。
2.3 干扰实验 用鲎试剂溶解水将沙赛普肽注射液按1∶2等比系列稀释成系列浓度:1∶2,1∶4,1∶8,1∶16和1∶32的溶液，将细菌内毒素标准品稀释成系列浓度溶液为1.0,0.5,0.25,0.125和0.06EU/ml,摇匀。取每一浓度样品溶液0.1ml,加入0.1ml鲎试剂中，每一浓度平行做4管,37℃水浴保温60min。结果沙赛普肽注射液在1∶32的稀释度时，对细菌内毒素检查无干扰。
, http://www.100md.com
2.4 样品的热原检查 将3批沙赛普肽注射液用鲎试剂溶解水稀释成1∶32溶液，用灵敏度为0.5EU/ml鲎试剂进行细菌内毒素检查，每批做4管，每管加0.1ml样品稀释液与0.1ml鲎试剂中。再各做一阴性对照和一阳性对照，封口，摇匀，置37℃恒温水浴箱，保温60min。对于3个不同批号的样品进行细菌内毒素检查，与家兔热原检查法对照，结果一致。见表2。表2 供试品的细菌内毒素检测结果 样品批号
管号
阴性对照
阳性对照
1
2
3
4
9901141
, http://www.100md.com
-
-
-
-
-
+
9904271
-
-
-
-
-
+
9902251
, http://www.100md.com
-
-
-
-
-
+
3 讨 论
根据对样品进行1∶2,1∶4,1∶8和1∶16的稀释测定结果看，可见均有明显的抑制作用，所以在此浓度下不适宜用鲎试剂进行细菌内毒素检测。由于样品的最大有效稀释度(MVD)与鲎试剂灵敏度成反比关系，MVD的计算值和该实验在进行方法研究时可知，供试品浓度越大，存在干扰的可能性也越大。为减小其供试品的抑制效应，提高鲎试剂的灵敏度，当用0.5EU/ml灵敏度的鲎试剂时，供试品稀释成1∶32的稀释度时可消除其干扰作用。所以只要选择适当灵敏度的鲎试剂，将样品作适当稀释处理，就可用鲎试剂检查法作为沙赛普肽注射液细菌内毒素限度的内控方法。此法简便快捷、准确。在医院用LT代替RT对日常临床在沙赛普肽静脉用药过程中出现的热原反应可做快速的检查。
参考文献
1，中国药典.二部.1995∶附录76.
2，黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计.中国药学杂志，1997，32(2)∶72.
收稿日期：1999-11-30, http://www.100md.com
单位：杨宁莲(宁夏自治区人民医院 银川 750021)；任力(宁夏自治区中医院)
关键词：沙赛普肽注射液；鲎试剂；细菌内毒素
中国现代应用药学000622 摘要 目的：用鲎试剂检测沙赛普肽注射液中的细菌内毒素。方法：采用鲎试法(LT)与家兔法(RT)对沙赛普肽注射液进行细菌内毒素检测。结果：两种方法检查结果一致，用直接稀释法排除细菌内毒素的干扰。结论：以鲎试法用于控制沙赛普肽注射液的热原方法可行。
The discussion on the endotoxin inspction method of cerebroprotein injection
Yang Ninlian(Yang NL),Ren Li(Ren L)
, http://www.100md.com
(Ningxia Region Hospital,Yingchuan 750021)
ABSTRACT OBJECTIVE：To test the bacterial endotoxin in cerebroprotein injection by tachypleas amebocyte lysate.METHODS:The experiment set were tested using limulus test and rabbit tests.RESULTS:The two methods can be used to determine bacterial endotoxin,the result shows that the interference elements can be excluded.CONCLUSION:The limulus test is effective method to control pyrogen of cerebroprotein injection.
, 百拇医药
KEY WORDS cerebroprotein injection,bacterial endotoxin,tachypleus amebocyte lysate
沙赛普肽是从动物脑组织中提取精制而得的无菌制剂。用于老年性痴呆、脑血栓、脑出血、脑外伤后遗症，动脉硬化引起的脑萎缩等症状。笔者就我院在临床用药过程中偶而出现热原反应引起的一些疑意，除对所用的输液按中国药典1995年版二部LT检测外，对沙赛普肽注射液进行了细菌内毒素实验考察。结果与家兔法一致，表明以鲎试法用于控制沙赛普肽注射液的热原方法是可行的。
1 药品与试剂
鲎试剂(批号:990106,λ=0.5EU/ml,0.1ml/支)；细菌内毒素标准品(批号:981020,效价:10EU/支)；鲎试剂溶解水(批号:980910,内毒素含量(0.03Eu/ml,10ml/支)；以上试剂均为厦门鲎试剂厂生产；沙赛普肽注射液(批号:9901141,9904221和9902251),宁夏沙赛制药有限公司;HH.S21-4电热恒温水浴锅(北京长安科学仪器厂);XW-80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；玻璃吸管，实验前经250℃干烤2h。
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2 实验方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核实验 按中国药典95年版二部“细菌内毒素检查法”操作。根据所用鲎试剂灵敏度，将细菌内毒素标准品按1∶2等比系列，用鲎试剂溶解水将细菌内毒素标准品稀释成系列浓度为:1,0.5,0.25,0.125和0.06EU/ml。取每一浓度0.1ml，加入鲎试剂0.1ml中，每一稀释液平行做4管,37℃恒温水浴，保温60min。结果见表1。
表1 鲎试剂灵敏度复核实验 内毒素浓度/EU.ml-1
1.0
0.5
0.25
0.125
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阴性对照
反应结果
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2.2 沙赛普肽注射液细菌内毒素限值确定 根据公式L=K/M,式中L为细菌内毒素限值，K为细菌内毒素标准品的致热阈值，即K=5EU/kg,M为热原检查剂量，根据沙赛普肽注射液静脉滴注每次最大用量为20ml,按人均体重60kg计算，应为:L=K/M=5(20/60)=15.02EU/ml。本品细菌内毒素理论限值为15.02EU/ml,沙赛普肽注射液最大有效稀释度(MVD)=L/λ=15.02/0.5=30.04。
2.3 干扰实验 用鲎试剂溶解水将沙赛普肽注射液按1∶2等比系列稀释成系列浓度:1∶2,1∶4,1∶8,1∶16和1∶32的溶液，将细菌内毒素标准品稀释成系列浓度溶液为1.0,0.5,0.25,0.125和0.06EU/ml,摇匀。取每一浓度样品溶液0.1ml,加入0.1ml鲎试剂中，每一浓度平行做4管,37℃水浴保温60min。结果沙赛普肽注射液在1∶32的稀释度时，对细菌内毒素检查无干扰。
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2.4 样品的热原检查 将3批沙赛普肽注射液用鲎试剂溶解水稀释成1∶32溶液，用灵敏度为0.5EU/ml鲎试剂进行细菌内毒素检查，每批做4管，每管加0.1ml样品稀释液与0.1ml鲎试剂中。再各做一阴性对照和一阳性对照，封口，摇匀，置37℃恒温水浴箱，保温60min。对于3个不同批号的样品进行细菌内毒素检查，与家兔热原检查法对照，结果一致。见表2。表2 供试品的细菌内毒素检测结果 样品批号
管号
阴性对照
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3 讨 论
根据对样品进行1∶2,1∶4,1∶8和1∶16的稀释测定结果看，可见均有明显的抑制作用，所以在此浓度下不适宜用鲎试剂进行细菌内毒素检测。由于样品的最大有效稀释度(MVD)与鲎试剂灵敏度成反比关系，MVD的计算值和该实验在进行方法研究时可知，供试品浓度越大，存在干扰的可能性也越大。为减小其供试品的抑制效应，提高鲎试剂的灵敏度，当用0.5EU/ml灵敏度的鲎试剂时，供试品稀释成1∶32的稀释度时可消除其干扰作用。所以只要选择适当灵敏度的鲎试剂，将样品作适当稀释处理，就可用鲎试剂检查法作为沙赛普肽注射液细菌内毒素限度的内控方法。此法简便快捷、准确。在医院用LT代替RT对日常临床在沙赛普肽静脉用药过程中出现的热原反应可做快速的检查。
参考文献
1，中国药典.二部.1995∶附录76.
2，黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计.中国药学杂志，1997，32(2)∶72.
收稿日期：1999-11-30, http://www.100md.com