盐酸培他啶氯化钠注射液细菌内毒素检查法的建立
作者：范文涛 钱丙坤 董华
单位：山东冠县人民医院 冠县 252500
关键词：
中国现代应用药学000625 盐酸培他啶氯化钠注射液收载于《山东省药品标准》(1986年版)下篇第486页，规格500ml:盐酸倍他啶0.02g+氯化钠4.5g,家兔法热原检查剂量为10ml/kg。由于细菌内毒素检查法具有简便、快捷、灵敏度高等优点，越来越多的药品品种原来规定的热原检查项，将逐渐被细菌内毒素检查项所取代。
1 实验材料
鲎试剂(批号990106,灵敏度0.5Eu/ml,厦门鲎试剂厂；批号980305,灵敏度0.25Eu/ml,湛江海洋生物制品厂)。鲎试剂溶解水(批号980510,规格2ml/支，厦门鲎试剂厂；批号970425,规格2ml/支，湛江海洋生物制品厂)。细菌内毒素工作标准品(批号970201,效价10Eu/支，厦门鲎试剂厂)。DH-3电子旋涡混合器(天津光学仪器厂)。1ml注射器、针头、试管、刻度吸管若干，均经250℃干烤1h。盐酸培他啶氯化钠注射液(批号990507,990508,990510和990511,本院灭菌制剂室)。
, 百拇医药
2 实验方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核 用鲎试剂溶解水将细菌内毒素工作标准品溶解，在旋涡混合器上混匀15min,然后等比稀释成系列浓度溶液，即1.0,0.5,0.25,0.125和0.0625Eu/ml,每稀释一步，均在旋涡混合器上混合30s，与鲎试剂进行凝胶化反应，结果见表1。
表1 鲎试剂灵敏度复核 鲎试剂灵敏
度/Eu.ml-1
细菌内毒素浓度/Eu.ml-1
阴性
对照
1.0
, 百拇医药
0.5
0.25
0.125
0.0625
0.5
++++--------------
0.25
++++--------------
2.2 细菌内毒素限值(L)和最大有效稀释倍数(D)的计算[1] 根据静脉用药细菌内毒素致热阀K为5.0Eu/kg,盐酸培他啶氯化钠注射液的致热原检查剂量M为10ml/kg,则L=K/M=5Eu/kg/10ml/kg=0.5Eu/ml。最大有效稀释倍数(D)，灵敏度λ=0.5Eu/ml的鲎试剂，D=L/λ=0.5/0.5=1;对灵敏度λ=0.25Eu/ml的鲎试剂,D=L/λ=0.5/0.25=2。
, 百拇医药
2.3 干扰试验[2] 将盐酸培他啶氯化钠注射液原液和2倍稀释液分别溶解细菌内毒素工作标准品，在旋涡混合器上混匀15min,然后等比稀释成系列浓度溶液，每稀释一步均在旋涡混合器上混合30s，与鲎试剂进行凝胶化反应，结果见表2。表2 盐酸培他啶氯化钠注射液干扰试验 供试品批号
鲎试剂灵敏度
/Eu.ml-1
细菌内毒素浓度/Eu.ml-1
供试品阴
性对照
阴性对照
1.0
, 百拇医药
0.5
0.25
0.125
0.0625
990507(原液)
0.5
++++
++++------------
990508(原液)
0.5
++++
++++------------
, 百拇医药
990510(2倍稀释)
0.25
++++
++++------------
990511(2倍稀释)
0.25
++++
++++------------
2.4 细菌内毒素检查法和家兔法检查测盐酸培他啶氯化钠注射液结果对比，见表3。表3 细菌内毒素检查法与家兔法结果对比 供试品批号
细菌内毒素检查结果
, 百拇医药
家兔法检查结果
990507
-
-
990508
-
-
990510
-
-
990511
-
-
, 百拇医药
3 讨 论
3.1 我们采用不同批号的盐酸培他啶氯化钠注射液，对不同厂家的鲎试剂进行干扰试验，结果显示，均无干扰作用，且细菌内毒素检查法与家兔致热原检查结果一致，临床无热原反应，因此，作为医院制剂的盐酸培他啶氯化钠注射液，建立细菌内毒素检查项代替原来的致热原检查是可行的。
3.2 盐酸培他啶氯化钠注射液的细菌内毒素检查项为：取本品，依法检查[2]，每1ml中含内毒素量不得过0.5Eu/ml。可用灵敏度为0.5Eu/ml的鲎试剂直接进行检测；或用灵敏度为0.25Eu/ml的鲎试剂检测本品的2倍稀释液。
参考文献
1，黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计.中国药学杂志，1997，32(2)∶72.
2，中国药典.二部.1995∶附录ⅪE 76.
收稿日期：1999-12-13, 百拇医药
单位：山东冠县人民医院 冠县 252500
关键词：
中国现代应用药学000625 盐酸培他啶氯化钠注射液收载于《山东省药品标准》(1986年版)下篇第486页，规格500ml:盐酸倍他啶0.02g+氯化钠4.5g,家兔法热原检查剂量为10ml/kg。由于细菌内毒素检查法具有简便、快捷、灵敏度高等优点，越来越多的药品品种原来规定的热原检查项，将逐渐被细菌内毒素检查项所取代。
1 实验材料
鲎试剂(批号990106,灵敏度0.5Eu/ml,厦门鲎试剂厂；批号980305,灵敏度0.25Eu/ml,湛江海洋生物制品厂)。鲎试剂溶解水(批号980510,规格2ml/支，厦门鲎试剂厂；批号970425,规格2ml/支，湛江海洋生物制品厂)。细菌内毒素工作标准品(批号970201,效价10Eu/支，厦门鲎试剂厂)。DH-3电子旋涡混合器(天津光学仪器厂)。1ml注射器、针头、试管、刻度吸管若干，均经250℃干烤1h。盐酸培他啶氯化钠注射液(批号990507,990508,990510和990511,本院灭菌制剂室)。
, 百拇医药
2 实验方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核 用鲎试剂溶解水将细菌内毒素工作标准品溶解，在旋涡混合器上混匀15min,然后等比稀释成系列浓度溶液，即1.0,0.5,0.25,0.125和0.0625Eu/ml,每稀释一步，均在旋涡混合器上混合30s，与鲎试剂进行凝胶化反应，结果见表1。
表1 鲎试剂灵敏度复核 鲎试剂灵敏
度/Eu.ml-1
细菌内毒素浓度/Eu.ml-1
阴性
对照
1.0
, 百拇医药
0.5
0.25
0.125
0.0625
0.5
++++--------------
0.25
++++--------------
2.2 细菌内毒素限值(L)和最大有效稀释倍数(D)的计算[1] 根据静脉用药细菌内毒素致热阀K为5.0Eu/kg,盐酸培他啶氯化钠注射液的致热原检查剂量M为10ml/kg,则L=K/M=5Eu/kg/10ml/kg=0.5Eu/ml。最大有效稀释倍数(D)，灵敏度λ=0.5Eu/ml的鲎试剂，D=L/λ=0.5/0.5=1;对灵敏度λ=0.25Eu/ml的鲎试剂,D=L/λ=0.5/0.25=2。
, 百拇医药
2.3 干扰试验[2] 将盐酸培他啶氯化钠注射液原液和2倍稀释液分别溶解细菌内毒素工作标准品，在旋涡混合器上混匀15min,然后等比稀释成系列浓度溶液，每稀释一步均在旋涡混合器上混合30s，与鲎试剂进行凝胶化反应，结果见表2。表2 盐酸培他啶氯化钠注射液干扰试验 供试品批号
鲎试剂灵敏度
/Eu.ml-1
细菌内毒素浓度/Eu.ml-1
供试品阴
性对照
阴性对照
1.0
, 百拇医药
0.5
0.25
0.125
0.0625
990507(原液)
0.5
++++
++++------------
990508(原液)
0.5
++++
++++------------
, 百拇医药
990510(2倍稀释)
0.25
++++
++++------------
990511(2倍稀释)
0.25
++++
++++------------
2.4 细菌内毒素检查法和家兔法检查测盐酸培他啶氯化钠注射液结果对比，见表3。表3 细菌内毒素检查法与家兔法结果对比 供试品批号
细菌内毒素检查结果
, 百拇医药
家兔法检查结果
990507
-
-
990508
-
-
990510
-
-
990511
-
-
, 百拇医药
3 讨 论
3.1 我们采用不同批号的盐酸培他啶氯化钠注射液，对不同厂家的鲎试剂进行干扰试验，结果显示，均无干扰作用，且细菌内毒素检查法与家兔致热原检查结果一致，临床无热原反应，因此，作为医院制剂的盐酸培他啶氯化钠注射液，建立细菌内毒素检查项代替原来的致热原检查是可行的。
3.2 盐酸培他啶氯化钠注射液的细菌内毒素检查项为：取本品，依法检查[2]，每1ml中含内毒素量不得过0.5Eu/ml。可用灵敏度为0.5Eu/ml的鲎试剂直接进行检测；或用灵敏度为0.25Eu/ml的鲎试剂检测本品的2倍稀释液。
参考文献
1，黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计.中国药学杂志，1997，32(2)∶72.
2，中国药典.二部.1995∶附录ⅪE 76.
收稿日期：1999-12-13, 百拇医药