不同提取方法对红花黄色素含量的影响
作者：杨志福 文爱东 蒋永培 梅其炳 张三奇
单位：梅其炳(第四军医大学药理学教研室)；杨志福 文爱东 蒋永培 张三奇(第四军医大学西京医院药剂科 西安 710032)
关键词：红花黄色素；提取方法
西北药学杂志000611 摘要 采用分光光度法研究不同溶剂及提取方法对红花中红花黄素(saffron yellow, SY)含量的影响；结果发现水和70%甲醇对红花黄色素的提取效果很好，80%丙酮对红花黄色素的含量影响较大，使其提取率较小；提示对红花黄色素的提取采用水提方法效果较好、快速、便捷。
中图分类号：R284 文献标识码：A
红花(Carthamus tinctorius L.)为菊科植物红花属红花的干燥花，性味辛温，入心、肝经，具祛瘀止痛功效，是多种活血化瘀方剂的君药。以往研究表明：红花活血的有效成分主要集中在水溶性的红花黄色素。红花黄色素为查耳酮类化合物，具有扩张冠脉、抗氧化[1]、保护心肌[2]、降血压、免疫抑制和脑保护[3]等多种药理学功效。红花黄色素的含量是评价红花药效的主要指标之一。目前对红花黄色素的药理学研究报道较多，但不同文献报道红花黄色素的提取方法各异。本文通过测定红花黄色素的含量对不同提取方法进行比较，从中找出快速、便捷的提取方法。
, 百拇医药
1 仪器与试药
1.1 仪器 UV-756型分光光度计(上海第三仪器厂)；78HW-1型恒温磁力搅拌器(杭州仪表电机厂)。
1.2 试药 红花黄色素对照品(第二军医大学药理教研室郭美丽老师提供)；甲醇(色谱试剂，浙江黄岩化工实验厂，批号920426)；丙酮(分析纯，西安化学试剂厂，批号970910)；红花[经西北大学胡正海教授鉴定为菊科植物红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花]。
2 方法与结果
2.1 样品制备
①称取红花粉末0.5g，加80%丙酮溶液20ml，密塞，冷浸20min，时时振摇，滤过；残渣加20ml 80%丙酮浸泡2h，过滤；用80%丙酮溶液洗涤3次，滤液合并，定容至100ml，得供试品1[4]。
, 百拇医药
②称取红花粉末0.2g，加70%甲醇50ml浸泡过夜，滤过；残渣加70%甲醇20ml浸泡2h，滤过。用70%甲醇洗涤3次(每次5ml)，滤液合并，定容至100ml，得供试品2[5]。
③称取红花粉末0.2g，加纯化水50ml浸泡2h，残渣用纯化水洗涤4次，滤液定容至100ml，得供试品3[4]。
④称取红花粉末0.2g，加纯化水30ml室温搅拌60min，倾出提取液；药渣加同量纯化水室温搅拌60min，滤过，用纯化水洗涤3次，滤液合并，定容至100ml，得供试品4[1]。
2.2 对照品溶液的制备 称取红花黄色素对照品6.3mg，置5ml量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2.3 标准曲线的制备 精密吸取红花黄色素对照品溶液0.15，0.30，0.60，0.90，1.05，1.2ml，分置于5ml量瓶中，各加70%甲醇稀释至刻度，摇匀。按文献[5]在403nm处测定吸光度，以测定液中红花黄色素的含量(C)对吸光度(A)作线性回归，求得标准曲线，标准曲线回归方程为：
, 百拇医药
C＝0.48+223A(r＝0.9997，n＝6)。
2.4 样品的测定 分别精密量取供试品溶液0.5ml，置5ml量瓶中，加相应溶剂稀释至刻度，摇匀，按文献[5]在403nm处测定红花黄色素的吸光度并计算含量，见表1。
表1 不同提取液红花黄色素含量 样 品
1
2
3
x±s(%)
RSD(%)
样品1
35.5
, 百拇医药
34.2
34.0
34.6±0.8
2.3
样品2
43.6
48.7
45.3
45.9±2.6
5.6
样品3
45.6
44.1
, 百拇医药
46.1
45.3±1.0
2.2
样品4
43.7
45.0
41.9
43.5±1.5
3.5
2.5 稳定性试验 将对照品溶液室温放置，15min测定一次，发现在2h内红花黄色素吸光度无明显变化，说明2h内红花黄色素的稳定性良好。
2.6 精密度测定 精密吸取4份红花黄色素对照品溶液1ml，置5ml量瓶中，各加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，在403nm处测定吸光度，求得RSD＝1.15%。
, 百拇医药
2.7 回收率测定 精取3号供试品溶液0.5ml，5份，置于5ml量瓶中，分别加入一定量的红花黄色素对照品溶液，加纯化水至刻度，摇匀后在403nm处测定红花黄色素的含量，计算回收率，回收率为98.36%±2.40%。
3 讨论
①中国药典2000年版一部红花检查项下只规定红花黄色素的吸收度不得低于0.40，但对其含量没有进行阐述。文献[5]报道红花黄色素的含量为24.90%～40.31%。本实验结果红花黄色素的含量为34%～45%，可能与红花的产地和采摘季节有关。
②样品1红花黄色素含量与其他样品有显著的差异，说明80%丙酮不适宜作红花提取溶剂。其他三种方法均可行，但从简单、迅速着眼，应选择样品2的方法。
第四军医大学学校基金资助项目
, 百拇医药
参考文献
[1]金鸣，李金荣，蔡亚欣，等.红花水溶性成分抗氧化作用的研究.心脑血管病杂志，1998，17(4)：277
[2]李芳，娄延平，王孝铭，等.红花黄素对豚鼠心室乳头肌缺氧和复氧损伤的保护作用.哈尔滨医科大学学报，1999，33(1)：6
[3]胡书群，张光毅，赵文君，等.红花对脑缺血Ca/CaM-PKⅡ活性抑制作用的影响.徐州医学院学报，1995，15(3)：225
[4]中国药典2000年版.一部.2000：119
[5]郭美丽，付立波，张芝玉，等.UV，HPLC测定红花中黄色素、多糖和腺苷的含量.中国中药杂志，1999，34(8)：550
(收稿日期：2000-06-05), 百拇医药
单位：梅其炳(第四军医大学药理学教研室)；杨志福 文爱东 蒋永培 张三奇(第四军医大学西京医院药剂科 西安 710032)
关键词：红花黄色素；提取方法
西北药学杂志000611 摘要 采用分光光度法研究不同溶剂及提取方法对红花中红花黄素(saffron yellow, SY)含量的影响；结果发现水和70%甲醇对红花黄色素的提取效果很好，80%丙酮对红花黄色素的含量影响较大，使其提取率较小；提示对红花黄色素的提取采用水提方法效果较好、快速、便捷。
中图分类号：R284 文献标识码：A
红花(Carthamus tinctorius L.)为菊科植物红花属红花的干燥花，性味辛温，入心、肝经，具祛瘀止痛功效，是多种活血化瘀方剂的君药。以往研究表明：红花活血的有效成分主要集中在水溶性的红花黄色素。红花黄色素为查耳酮类化合物，具有扩张冠脉、抗氧化[1]、保护心肌[2]、降血压、免疫抑制和脑保护[3]等多种药理学功效。红花黄色素的含量是评价红花药效的主要指标之一。目前对红花黄色素的药理学研究报道较多，但不同文献报道红花黄色素的提取方法各异。本文通过测定红花黄色素的含量对不同提取方法进行比较，从中找出快速、便捷的提取方法。
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1 仪器与试药
1.1 仪器 UV-756型分光光度计(上海第三仪器厂)；78HW-1型恒温磁力搅拌器(杭州仪表电机厂)。
1.2 试药 红花黄色素对照品(第二军医大学药理教研室郭美丽老师提供)；甲醇(色谱试剂，浙江黄岩化工实验厂，批号920426)；丙酮(分析纯，西安化学试剂厂，批号970910)；红花[经西北大学胡正海教授鉴定为菊科植物红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花]。
2 方法与结果
2.1 样品制备
①称取红花粉末0.5g，加80%丙酮溶液20ml，密塞，冷浸20min，时时振摇，滤过；残渣加20ml 80%丙酮浸泡2h，过滤；用80%丙酮溶液洗涤3次，滤液合并，定容至100ml，得供试品1[4]。
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②称取红花粉末0.2g，加70%甲醇50ml浸泡过夜，滤过；残渣加70%甲醇20ml浸泡2h，滤过。用70%甲醇洗涤3次(每次5ml)，滤液合并，定容至100ml，得供试品2[5]。
③称取红花粉末0.2g，加纯化水50ml浸泡2h，残渣用纯化水洗涤4次，滤液定容至100ml，得供试品3[4]。
④称取红花粉末0.2g，加纯化水30ml室温搅拌60min，倾出提取液；药渣加同量纯化水室温搅拌60min，滤过，用纯化水洗涤3次，滤液合并，定容至100ml，得供试品4[1]。
2.2 对照品溶液的制备 称取红花黄色素对照品6.3mg，置5ml量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2.3 标准曲线的制备 精密吸取红花黄色素对照品溶液0.15，0.30，0.60，0.90，1.05，1.2ml，分置于5ml量瓶中，各加70%甲醇稀释至刻度，摇匀。按文献[5]在403nm处测定吸光度，以测定液中红花黄色素的含量(C)对吸光度(A)作线性回归，求得标准曲线，标准曲线回归方程为：
, 百拇医药
C＝0.48+223A(r＝0.9997，n＝6)。
2.4 样品的测定 分别精密量取供试品溶液0.5ml，置5ml量瓶中，加相应溶剂稀释至刻度，摇匀，按文献[5]在403nm处测定红花黄色素的吸光度并计算含量，见表1。
表1 不同提取液红花黄色素含量 样 品
1
2
3
x±s(%)
RSD(%)
样品1
35.5
, 百拇医药
34.2
34.0
34.6±0.8
2.3
样品2
43.6
48.7
45.3
45.9±2.6
5.6
样品3
45.6
44.1
, 百拇医药
46.1
45.3±1.0
2.2
样品4
43.7
45.0
41.9
43.5±1.5
3.5
2.5 稳定性试验 将对照品溶液室温放置，15min测定一次，发现在2h内红花黄色素吸光度无明显变化，说明2h内红花黄色素的稳定性良好。
2.6 精密度测定 精密吸取4份红花黄色素对照品溶液1ml，置5ml量瓶中，各加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，在403nm处测定吸光度，求得RSD＝1.15%。
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2.7 回收率测定 精取3号供试品溶液0.5ml，5份，置于5ml量瓶中，分别加入一定量的红花黄色素对照品溶液，加纯化水至刻度，摇匀后在403nm处测定红花黄色素的含量，计算回收率，回收率为98.36%±2.40%。
3 讨论
①中国药典2000年版一部红花检查项下只规定红花黄色素的吸收度不得低于0.40，但对其含量没有进行阐述。文献[5]报道红花黄色素的含量为24.90%～40.31%。本实验结果红花黄色素的含量为34%～45%，可能与红花的产地和采摘季节有关。
②样品1红花黄色素含量与其他样品有显著的差异，说明80%丙酮不适宜作红花提取溶剂。其他三种方法均可行，但从简单、迅速着眼，应选择样品2的方法。
第四军医大学学校基金资助项目
, 百拇医药
参考文献
[1]金鸣，李金荣，蔡亚欣，等.红花水溶性成分抗氧化作用的研究.心脑血管病杂志，1998，17(4)：277
[2]李芳，娄延平，王孝铭，等.红花黄素对豚鼠心室乳头肌缺氧和复氧损伤的保护作用.哈尔滨医科大学学报，1999，33(1)：6
[3]胡书群，张光毅，赵文君，等.红花对脑缺血Ca/CaM-PKⅡ活性抑制作用的影响.徐州医学院学报，1995，15(3)：225
[4]中国药典2000年版.一部.2000：119
[5]郭美丽，付立波，张芝玉，等.UV，HPLC测定红花中黄色素、多糖和腺苷的含量.中国中药杂志，1999，34(8)：550
(收稿日期：2000-06-05), 百拇医药