当前位置: 首页 > 期刊 > 《中草药》 > 2000年第6期
编号:10499724
3种饮片中川芎嗪含量的测定
http://www.100md.com 《中草药》 2000年第6期
     作者:袁伯勇 袁慧 赵铭

    单位:袁伯勇(泰山医学院 泰安 271000);袁慧(泰山医学院附属医院);赵铭(泰山医学院第一教学医院)

    关键词:

    中草药000615 川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort. 的干燥根茎,能 活 血行气、祛风止痛。国内对该中药在心血管系统的作用有较多的研究,临床上使用的川芎有 生品、酒炙品、炒品3 种饮片[1,2]。川芎嗪是川芎中主要有活性的生物碱,制剂 中川芎嗪含量的测定已有报道[3,4]。为了探讨川芎炮制前后川芎嗪的变化,用RP -HPLC法测定了3 种饮片中川芎嗪的含量。

    1 试药与仪器

    川芎:购于滕州市药材公司,经本院中医教研室秦庆云鉴定为Ligusticum chuanxi ong Hort. 的干燥根茎。洗净处理后备用。
, 百拇医药
    川芎炒品、酒炙品:参照文献[1,5]制备。上述各样品均粉碎过40 目筛。

    试剂:盐酸川芎嗪对照品由中国药品生物制品检定所提供,试剂均为分析纯;重蒸水。

    仪器:岛津LC-6A 高效液相色谱系统;SCL-6A系统控制器,7125型进样阀,LC-6A溶剂 泵,CTO-6A色谱柱箱,SPD-6AV可见-紫外检测器,C-R3A数据处理机。岛津UV-265 型紫外分光光度计。

    2 实验方法和结果

    2.1 样品液的制备:精密称取样品粉末约0.6 g,置10 mL具塞试管中,加无水乙醇7 mL ,放置12 h以上,超声提取25 min,离心5 min (4 000 r/min),上清液移到25 mL量瓶中 。按上法将残渣用无水乙醇再提取2 次,上清液转入量瓶中,用无水乙醇定容。精取6 mL样品的提取液置50 mL烧杯中,加1 moL/L的盐酸甲醇溶液适量,混匀,pH=1.2, 置恒温水浴45 ℃蒸干。加1 moL/L盐酸9 mL溶解残渣,过滤。滤液用浓氨水(7.5 moL/L) 调 pH=9~10 后,再用二氯甲烷提取2 次(9 mL、7 mL)。将二氯甲烷提取液置50 mL烧杯中,用 1 moL/L盐酸甲醇液调pH=1.2,置恒温水浴上45 ℃蒸干。精加甲醇5 mL溶解残渣,将溶解 液转入5 mL具塞离心试管中,离心5 min(4 000r/min),得待测样品液。
, 百拇医药
    2.2 色谱条件:岛津Shim-Pack CLC-ODS(150 mm×6 mm,5μm)柱,流动相甲醇-0.1 moL/L醋酸、醋酸钠缓冲液=32∶68(pH4.0,比较实验确定),流速1.0 mL/min,检测波长2 78 nm,灵敏度0.08AUFS,纸速2 mm/min,柱温室温。

    2.3 对照品纯度检查:取对照品甲醇溶液(18.30 μg/mL)4.5 μL,按上色谱条件测峰 面积,除去溶剂峰后,用归一化法计算盐酸川芎嗪的含量为100%(n=5), 对照品符合该色谱分析的要求。

    2.4 标准曲线:称对照品3.66 mg,置10 mL量瓶中,用甲醇定容为A液(含川芎嗪288.6 μg/mL)。取A液1.25 mL,置25 mL量瓶中,用甲醇定容,为B液。分别取B液0.25,0.75 ,1.25,1.75,2.25 mL置于5 个10 mL量瓶中,用甲醇定容后混匀,在前述色谱条件下 进样20 μL,得进样量在0.007 22~0.064 9 μg间川芎嗪量(Y)和峰高(X)呈良 好的线性关系,回归方程为:Y=1.080 5×10-3+0.019 829X,r=0.999 8。
, 百拇医药
    2.5 回收率及精密度试验:取盐酸川芎嗪甲醇液(A液)1.5 mL,用甲醇稀释到10 mL,取 该液0.3 mL加入已精密称取的川芎生品粉末约0.3 g中,用2.1项的方法制备样品液,进 样20 μL,测定回收率为99.1%,RSD=1.66%(n=5)。

    制备炒品样品液,进样20 μL,在2.2项的色谱条件下重复进样8 次,样品中川芎嗪的含 量(μg/g)分别为44.93,44.07,44.07,44.93,44.93,44.93,44.93,44.93, 计算川芎嗪含量的RSD为0.89%。

    2.6 检测限:称取酒炙品粉末约0.3 g 4 份,按2.1项方法制备样品液,进样20 μL, 取信噪比为4 时川芎嗪量作为检测限,结果为5.07 ng,样品液中川芎嗪最 低检测浓度为0.255 μg/mL。

    2.7 样品分析:分别取3 种饮片样品液进样20 μL,按前述色谱条件进行定量分析,结果 见表1,色谱图见图1,川芎嗪的保留时间为23.318 min。
, http://www.100md.com
    3 讨论

    3.1 溶剂的极性及pH值对碱性物质的紫外光谱影响比较大。用流动相配制盐酸川芎嗪对照 品溶液(含盐酸川芎嗪 12.81 μg/mL), 在波长200 nm ~400 nm处扫描,紫外光谱图见图2。λmax=278 nm,故本研究选择278 nm检测川芎嗪。

    表1 3 种饮片中川芎嗪的含量(μg/g) 样 品

    含 量

    x

    RSD

    (%)

    P*

    生品
, 百拇医药
    60.40

    59.60

    59.77

    59.80

    60.28

    59.97

    0.58

    酒炙品

    54.30

    55.22

    55.69

    54.81

    59.74
, 百拇医药
    55.15

    1.11

    <0.001

    炒 品

    44.92

    44.72

    44.23

    45.27

    45.37

    44.90

    1.0 2

    <0.001

    *炒品、酒炙品分别与生品作t检验
, 百拇医药
    3.2 分别对生品的第3,4,5次提取液进川芎嗪含量测定,第3 次提取液中川芎嗪含量 在LC-6A检测限以上,第4、第5 次提取液中川芎嗪含量在LC-6A检测限以下。第4、第5 次 提取从每克川芎生品中提出的川芎嗪量占5 次提取总量的百分比 小于4.0%,说明提取3 次生品中96.0%以上的川芎嗪已被提取出。故本法采用样品粉末 加入无水乙醇放置12 h以上后超声提3 次,每次25 min的方法。

    A-对照品 B-生品 C-炒品 D-酒炙品 T-川芎嗪

    图1 3 种饮片和对照品色谱图

    图2 盐酸川芎嗪紫外光谱

    3.3 由结果知,和生品相比, 酒炙品川芎嗪含量降低8.04%,炒品中川芎嗪含量降低25. 13%,3 种饮片川芎嗪含量之间有显著差异。生品酒炙或炒后,川芎嗪含量下降,说明川芎 炮制前后川芎中部分川芎嗪分子发生了变化。
, 百拇医药
    3.4 根据对病人的辨证诊断选择适宜的中药饮片组方调剂,才会有好的疗效。川芎中的 川芎嗪、挥发油有抗血小板聚集、扩张动脉、改善微循环脑血流、溶栓、止痛等作用,故发 挥 川芎祛风除湿止痛的功效时宜用生品。酒炙时加入的黄酒有活血通络的作用,故发挥川芎活 血止痛的功效时宜用酒炙品,但在酒炙时温度以低为好,尽量减少川芎嗪的损失。

    参 考 文 献

    1,颜正华.中药学.北京:人民卫生出版社,1991:529

    2,成都中医学院主编.中药学.上海:上海科学技术出版社,1978:247

    3,赵志春,等.中国中药杂志,1991,16(12):729

    4,蒋芝荣.中草药,1994,25(9):459

    5,国家药政管理局编.全国中药炮制规范.北京:人民卫生出版社,1988:14,42 0

    (1999-03-02收稿), 百拇医药