葛根素注射液上市后产品质量比较
甄健存 陈志刚
摘要 目的：对国内4个厂家葛根素注射液的质量进行考察，为控制产品质量提供科学依据。方法：采用RP-HPLC法，紫外检测器(λ=250 nm)测定葛根素含量，色谱柱为Luna 5 μm C18 150 mm×4.6 mm，流动相为甲醇-水(28∶72)，葛根素在0.01～0.13 mg/ml内线形良好(γ=0.9992,n=6)，RSD为1.60%(n=6)。结果：4种产品在含量和色泽方面存在差异。结论：为保证葛根素注射液的质量和疗效，进一步提高产品质量并且规范质量标准势在必行。
关键词：葛根素 HPLC
葛根是中医常用的祛风解表药，其有效成分是异黄酮类化合物，以葛根为主要原料开发的制剂主要有愈风宁心片和葛根素注射剂。葛根素注射剂中主要成分是水溶性的葛根素，对视网膜动脉和静脉阻塞、突发性耳聋、冠心病、高血压都有较好疗效[1,2]。但是，目前上市的葛根素注射液其质量标准各异，我们对国内4个厂家的葛根素注射剂分别比较了外观质量和内在质量，以期为药剂科优选药品、严格质量控制提供科学依据。
, 百拇医药
材料与方法
1 仪器与试剂
岛津LC-4A高效液相色谱仪，岛津SPD-2AS紫外检测器；葛根素标准品(中国药品生物制品检定所)，注射剂A(100 mg/2ml,批号：980113,970606,961017)，注射剂B(100 mg/2ml,批号：9803131,9705141,9610241),注射剂C(100 mg/2ml,批号：980109,970318 ,950727)，注射剂D(50 mg/2ml 批号：970104)，甲醇(色谱纯,北京精密化学试剂厂)，蒸馏水(四效蒸馏水，自产)。
2 标准溶液的配制
称取葛根素标准品约10 mg，精密称量，用流动相定溶于100 ml的量瓶中，精取25 ml，置于50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度。
, 百拇医药 3 样品溶液的配制
精取注射液原液1ml(相当于含葛根素标示量50 mg)，用流动相定溶于10 ml量瓶中，再精取0.5 ml，用流动相定溶于50 ml量瓶中，超声脱气5 min。进样量5μl，外标法测定。
4 色谱条件[3]
色谱柱Luna 5 μm C18 150 mm×4.6 mm不锈钢柱 (美国Phenomenex公司)；流动相:甲醇-水(28∶72);流速：1 ml/min;检测波长：250 nm;柱温：30℃。
5 标准曲线
称取葛根素标准品约15 mg，精密称量，用流动相定溶于25 ml的量瓶中，分别精取0.2，0.6，1.0，1.4，1.8，2.2 ml，用流动相定溶于10 ml的量瓶中，进样5 μl，以峰面积对浓度进行回归分析。
, http://www.100md.com
6 回收率
精密称取葛根素标准品，用流动相配制成浓度分别为0.036，0.072，0.108 mg/ml的溶液，进样测定。
7 精密度测定
取浓度为0.072 mg/ml 的标准品溶液，1 d内连续进样6次，计算相对标准偏差。在配制后0，12，24 h时测定，得日内差，在配制后0，1，2 d时测定，得日间差。
8 稳定性
标准品在配制后0，1，2 d时进样测定，计算相对标准偏差。
9 系统适应性
分离度R=1.6，色谱柱的理论塔板数n=3 500，对称因子T=0.98。
, 百拇医药
结 果
1 色谱行为
见图1。
图1 葛根素色谱行为
A 溶剂 B 葛根素 C 杂质
2 标准曲线
结果表明在0.01～0.13 mg/ml范围内峰面积与浓度呈线形关系，γ=0.999?2。
3 回收率
结果见表1。平均回收率为(99.83±5.59)%。
表1 葛根素回收率测定结果 (单位：mg/ml)
, 百拇医药 加入量(ml)
理论值
测定值
回收率(%)
Ⅰ 0.6
0.036
0.0340
94.44
Ⅱ 1.2
0.072
0.0716
99.44
Ⅲ 2.4
, http://www.100md.com
0.108
0.1140
105.60
4 精密度
连续测定6次，RSD为1.60%，日内RSD为1.40%，日间RSD为2.73%。
5 稳定性
在4 d内，RSD为2.73%，表明葛根素在配制后3 d内稳定。
6 含量测定
分别取样品溶液按所定条件进样，用外标法计算样品含量，结果见表2。表2 葛根素注射剂含量测定结果 (x±s)
批号
, 百拇医药
含量
(μg/ml)
相当标示量
(%)
A
980113
48.66±0.74
97.34±1.50
970606
45.83±0.26
91.66±0.53
961017
, 百拇医药
44.60±0.71
89.19±1.42
B
9803131
40.66±0.50
81.32±1.00
9705141
40.63±0.49
81.27±0.98
9610241
39.74±0.88
79.48±1.76
, http://www.100md.com
C
980109
39.90±0.26
79.80±0.52
970318
41.16±0.51
82.33±1.02
950727
31.65±0.16
63.31±0.32
D
970104
, 百拇医药
36.45±0.50
72.90±1.00
7 外观
见表3。表3 葛根素注射剂澄明度比较
产品时间(年)
A
B
C
D
1998
无色澄明溶液(-)
无色澄明溶液(-)
, http://www.100md.com
淡黄色澄明溶液(+)
1997
几乎无色澄明溶液(-)
无色澄明溶液(-)
淡黄色澄明溶液(+)
淡黄色澄明溶液(+)
1996/1995
淡黄色澄明溶液(+)
淡黄色澄明溶液(+)
橙黄色澄明溶液(95)(++)
澄明度用“-”和“+”表示无差异。 由表3可见同期A和B厂家的产品其澄明度优于C和D厂家的产品，另外在2年保质期内A和B厂家的产品色泽稳定。
, 百拇医药
讨 论
1 葛根素注射剂来讲，目前尚无统一的质量标准，各厂家均采用厂内标准，本实验结果显示，不同厂家的产品其含量和稳定性均有较大差异。
2 中药制剂特别是中药的注射剂，其原药的产地、品种、采集期、药用部位、提取方法均对成品质量有较大影响，需要有统一的质量标准检验。这4个厂家的产品，如果按照各自提供的厂内标准检验，均属合格产品，但统一方法后其质量差异很大，这点值得生产厂家、药政药检部门和医疗单位注意。
3 葛根素在水中溶解度低，目前的注射剂中加入高浓度的丙二醇以提高浓度，致使成品粘稠性大，成本高且大剂量丙二醇进入人体应予以限制。
作者单位：北京积水潭医院药剂科，北京 100035
参考文献
1 朱庆磊，吕欣然.葛根素的药理学和临床应用研究进展.中草药，1997，28(11)∶693
2 方起程，林茂，邵国贤.葛根.见：宋振玉主编.中草药现代研究.北京：北京医科大学-中国协和医科大学联合出版社，1995.258～270
3 梁洁怡，刘军，冯毅凡，等.HPLC法测定心舒宁片中葛根素的含量.广东药学院学报，1997，13(4)∶242, http://www.100md.com
摘要 目的：对国内4个厂家葛根素注射液的质量进行考察，为控制产品质量提供科学依据。方法：采用RP-HPLC法，紫外检测器(λ=250 nm)测定葛根素含量，色谱柱为Luna 5 μm C18 150 mm×4.6 mm，流动相为甲醇-水(28∶72)，葛根素在0.01～0.13 mg/ml内线形良好(γ=0.9992,n=6)，RSD为1.60%(n=6)。结果：4种产品在含量和色泽方面存在差异。结论：为保证葛根素注射液的质量和疗效，进一步提高产品质量并且规范质量标准势在必行。
关键词：葛根素 HPLC
葛根是中医常用的祛风解表药，其有效成分是异黄酮类化合物，以葛根为主要原料开发的制剂主要有愈风宁心片和葛根素注射剂。葛根素注射剂中主要成分是水溶性的葛根素，对视网膜动脉和静脉阻塞、突发性耳聋、冠心病、高血压都有较好疗效[1,2]。但是，目前上市的葛根素注射液其质量标准各异，我们对国内4个厂家的葛根素注射剂分别比较了外观质量和内在质量，以期为药剂科优选药品、严格质量控制提供科学依据。
, 百拇医药
材料与方法
1 仪器与试剂
岛津LC-4A高效液相色谱仪，岛津SPD-2AS紫外检测器；葛根素标准品(中国药品生物制品检定所)，注射剂A(100 mg/2ml,批号：980113,970606,961017)，注射剂B(100 mg/2ml,批号：9803131,9705141,9610241),注射剂C(100 mg/2ml,批号：980109,970318 ,950727)，注射剂D(50 mg/2ml 批号：970104)，甲醇(色谱纯,北京精密化学试剂厂)，蒸馏水(四效蒸馏水，自产)。
2 标准溶液的配制
称取葛根素标准品约10 mg，精密称量，用流动相定溶于100 ml的量瓶中，精取25 ml，置于50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度。
, 百拇医药 3 样品溶液的配制
精取注射液原液1ml(相当于含葛根素标示量50 mg)，用流动相定溶于10 ml量瓶中，再精取0.5 ml，用流动相定溶于50 ml量瓶中，超声脱气5 min。进样量5μl，外标法测定。
4 色谱条件[3]
色谱柱Luna 5 μm C18 150 mm×4.6 mm不锈钢柱 (美国Phenomenex公司)；流动相:甲醇-水(28∶72);流速：1 ml/min;检测波长：250 nm;柱温：30℃。
5 标准曲线
称取葛根素标准品约15 mg，精密称量，用流动相定溶于25 ml的量瓶中，分别精取0.2，0.6，1.0，1.4，1.8，2.2 ml，用流动相定溶于10 ml的量瓶中，进样5 μl，以峰面积对浓度进行回归分析。
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6 回收率
精密称取葛根素标准品，用流动相配制成浓度分别为0.036，0.072，0.108 mg/ml的溶液，进样测定。
7 精密度测定
取浓度为0.072 mg/ml 的标准品溶液，1 d内连续进样6次，计算相对标准偏差。在配制后0，12，24 h时测定，得日内差，在配制后0，1，2 d时测定，得日间差。
8 稳定性
标准品在配制后0，1，2 d时进样测定，计算相对标准偏差。
9 系统适应性
分离度R=1.6，色谱柱的理论塔板数n=3 500，对称因子T=0.98。
, 百拇医药
结 果
1 色谱行为
见图1。
图1 葛根素色谱行为
A 溶剂 B 葛根素 C 杂质
2 标准曲线
结果表明在0.01～0.13 mg/ml范围内峰面积与浓度呈线形关系，γ=0.999?2。
3 回收率
结果见表1。平均回收率为(99.83±5.59)%。
表1 葛根素回收率测定结果 (单位：mg/ml)
, 百拇医药 加入量(ml)
理论值
测定值
回收率(%)
Ⅰ 0.6
0.036
0.0340
94.44
Ⅱ 1.2
0.072
0.0716
99.44
Ⅲ 2.4
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0.108
0.1140
105.60
4 精密度
连续测定6次，RSD为1.60%，日内RSD为1.40%，日间RSD为2.73%。
5 稳定性
在4 d内，RSD为2.73%，表明葛根素在配制后3 d内稳定。
6 含量测定
分别取样品溶液按所定条件进样，用外标法计算样品含量，结果见表2。表2 葛根素注射剂含量测定结果 (x±s)
批号
, 百拇医药
含量
(μg/ml)
相当标示量
(%)
A
980113
48.66±0.74
97.34±1.50
970606
45.83±0.26
91.66±0.53
961017
, 百拇医药
44.60±0.71
89.19±1.42
B
9803131
40.66±0.50
81.32±1.00
9705141
40.63±0.49
81.27±0.98
9610241
39.74±0.88
79.48±1.76
, http://www.100md.com
C
980109
39.90±0.26
79.80±0.52
970318
41.16±0.51
82.33±1.02
950727
31.65±0.16
63.31±0.32
D
970104
, 百拇医药
36.45±0.50
72.90±1.00
7 外观
见表3。表3 葛根素注射剂澄明度比较
产品时间(年)
A
B
C
D
1998
无色澄明溶液(-)
无色澄明溶液(-)
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淡黄色澄明溶液(+)
1997
几乎无色澄明溶液(-)
无色澄明溶液(-)
淡黄色澄明溶液(+)
淡黄色澄明溶液(+)
1996/1995
淡黄色澄明溶液(+)
淡黄色澄明溶液(+)
橙黄色澄明溶液(95)(++)
澄明度用“-”和“+”表示无差异。 由表3可见同期A和B厂家的产品其澄明度优于C和D厂家的产品，另外在2年保质期内A和B厂家的产品色泽稳定。
, 百拇医药
讨 论
1 葛根素注射剂来讲，目前尚无统一的质量标准，各厂家均采用厂内标准，本实验结果显示，不同厂家的产品其含量和稳定性均有较大差异。
2 中药制剂特别是中药的注射剂，其原药的产地、品种、采集期、药用部位、提取方法均对成品质量有较大影响，需要有统一的质量标准检验。这4个厂家的产品，如果按照各自提供的厂内标准检验，均属合格产品，但统一方法后其质量差异很大，这点值得生产厂家、药政药检部门和医疗单位注意。
3 葛根素在水中溶解度低，目前的注射剂中加入高浓度的丙二醇以提高浓度，致使成品粘稠性大，成本高且大剂量丙二醇进入人体应予以限制。
作者单位：北京积水潭医院药剂科，北京 100035
参考文献
1 朱庆磊，吕欣然.葛根素的药理学和临床应用研究进展.中草药，1997，28(11)∶693
2 方起程，林茂，邵国贤.葛根.见：宋振玉主编.中草药现代研究.北京：北京医科大学-中国协和医科大学联合出版社，1995.258～270
3 梁洁怡，刘军，冯毅凡，等.HPLC法测定心舒宁片中葛根素的含量.广东药学院学报，1997，13(4)∶242, http://www.100md.com