福建宁化辛德毕斯热血清学调查
陈振光 陈娟 黄祥瑞 钟建平 张茂银 林荷 彭一平
摘 要 目的：血清学调查人群和野生动物感染辛德毕斯热情况。方法：间接免疫荧光试验。结果：人群、野兔、狐狸、狗存在SiN感染，抗体阳性率分别为12.86%、5.88%、14.29%、6.45%。结论：福建宁化林区可能存在辛德毕斯热自然疫源地。
关键词：辛德毕斯热 抗体 间接免疫荧光法
辛德毕斯热是由辛德毕斯病毒Sindbis Virus(SiN)引起的人兽共患虫媒病毒病。库蚊和伊蚊是传播媒介，鸟类和家畜等脊椎动物为其宿主。人因受被感染蚊虫叮咬而感染发病。辛德毕斯热在世界广泛分布，东半球绝大多数国家均有该病存在，1974年南非发生辛德毕斯热大流行。我国13个省、市、区血清学调查表明，新疆、宁夏、安徽等地存在SiN感染，1991年梁国栋等首次从新疆分离到SiN病毒〔1〕。福建1998年首次在宁化发现SiN阳性抗体，且感染率颇高〔2〕。为查清感染情况，我们在进行斑点热课题调研时，亦对林区部分人群、野生动物及不明热疑似病例进行SiN血清学调查。
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1 材料与方法
1.1 被检血清
1.1.1 人群血清 分别采自宁化林区所在曹坊乡、中沙乡、城郊乡人群及不明热疑似病人静脉血，无菌分离血清，冷冻待检。
1.1.2 野兔、狐狸血清 分别采自上述林区猎人捕获的野兔、狐狸心血，无菌分离血清，冷冻待检。
1.1.3 狗血清 采自当地屠宰场，分离血清后冷冻待检。
上述人群及野生动物血清均送军事医学科学院微生物流行病研究所病毒室检测。
1.2 检测方法
1.2.1 地理景观调查 调查宁化县地理位置、地形地貌、植被、野生动物、气候条件等。
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1.2.2 间接免疫荧光试验(IFA) 按常规方法进行，即将上述待检血清56℃水浴30min灭活后，倍比稀释滴片，置37℃湿盒孵育45min后，用0.01mol/L pH7.4的PBS洗2次，每次2min，晾干后加FITC标记的羊抗人、羊抗兔、羊抗犬等荧光抗体，置37℃湿盒孵育45min后，按上法洗2次，晾干，75%甘油封片，荧光显微镜下观察、判定结果。
1.2.3 SiN病毒感染片、兔抗SiN免疫血清(工作浓度1∶32)及羊抗人、羊抗兔、羊抗犬等IgG荧光血清(工作浓度均为1∶10)，均由军事医科院微生物流行病研究所病毒室制备提供。待检血清1∶10稀释，感染细胞荧光强度以上者判为阳性。对部分阳性标本再进行升高滴度测定。
2 结果
2.1 自然景观 宁化县位于东经116°38′，北纬26°14′，海拔300～700m，年均降雨量1 750.1mm，年平均温度17.5℃，相对湿度81.1%，属亚热带湿润区。宁化山多林深，其中仍存在地广人稀的原始森林；山缘林间、河流冲积地带灌木杂草丛生；鼠类、野兔、狐狸等野生动物活动频繁；蚊虫种类多，密度高。上述生态自然景观给多种虫媒病毒提供良好生存条件，具备虫媒传染病自然疫源地特征。
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2.2 血清抗体检测
2.2.1 人群血清SiN IgG抗体检测 将待检血清1∶10稀释后进行初筛，1∶10阳性者再做抗体效价测定，结果检出阳性27例，阳性率12.86%(表1)。
表1 福建宁化林区人群及野生动物血清SiN抗体检测结果
人群
检测 数
阳性
数
阳性率
(%)
野生
动物
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检测
数
阳性
数
阳性率
(%)
男
92
8
6.69
野兔
34
2
5.88
, 百拇医药
女
118
19
16.10
狐狸
35
5
14.29
< 合计
210
27
12.86
犬
, http://www.100md.com 31
2
6.45
2.2.2 临床疑似病例检测 从18例不明热疑似病人血清(第2份血清)中检出1例SiN IgG阳性抗体，该病例有过发热、皮疹、肌肉酸疼等临床表现，表明曾有SiN中远期感染。提示重视不明热病人的检测，对发现SiN有重要意义。
2.2.3 野生动物血清SiN IgG抗体检测结果 见表1。
2.2.4 人群分布 27例SiN感染者和1例不明热SiN疑似病人，经查询属当地世居者，居住年限均在15年以上。职业分布显示农民高于学生。性别分布显示女性高于男性(1∶0.78)，但无统计学意义(χ2＝2.53，P>0.05)。
3 讨论
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3.1 本调查从宁化林区世居者中查出辛德毕斯热感染率达12.86%，野兔、狐狸、狗SiN感染率分别为5.88%、14.29%和6.45%，表明宁化林区人群及野生动物中存在SiN感染，且可能呈隐性感染状态，一旦机体抵抗力下降，则可导致发病，应引起足够重视。本调查虽在血清学、临床表现方面提示宁化可能存在SiN自然疫源地，但最终仍需从病人中分离出SiN病原体予以确证。
3.2 辛德毕斯病毒属披膜病毒科甲病毒，是虫媒病毒之一。目前世界上已发现的虫媒病毒有500余种，其中120多种对人、畜有致病性，某些病毒还可以引起严重的疾病如脑炎等〔3〕。人的感染一般在蚊虫密度高的季节发生，多为散发。表现为发热、皮疹、关节炎、倦怠、淋巴结肿大等。皮疹常变成水泡，持续7d左右，留下褐色斑，多发生在手和足〔4〕。诊断主要依据抗体测定，结合临床表现；确诊则以病人中分离出SiN病原体。该病至今无特效疗法，多数病例的病情是自限性的，一般用支持疗法和对症治疗。目前尚无可供使用的疫苗。预防措施主要防蚊虫叮咬、灭蚊，改变环境卫生，消除蚊虫滋生场所。
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3.3 辛德毕斯病原体分离工作在我国起步较晚，梁国栋等1991年首次从新疆伊犁地区捕获的一组按蚊(Anopheles. sp)中分离出SiN病毒，并经血清学、细胞学、动物试验、电镜分析及该毒株1993年在美国疾病控制中心虫媒病毒实验室经空斑减数中心试验证实为辛德毕斯病毒〔1，5〕。我国虽已取得上述成果，但由于地域辽阔，地理景观复杂，存在多种虫媒病毒。为此，今后应加强对SiN等虫媒病毒的流行、分布、媒介、致病情况及双份血清的采集等流行病学资料收集，努力应用先进的分子生物学技术，不断发现和分离SiN等虫媒病毒，仍是病毒研究者的重要任务，以期迅速赶上国际研究水平。
* 福建省科技项目资金资助
作者简介：男，1942年出生，主任医师，享受国务院政府特殊津贴
作者单位：陈振光(福建省宁化县卫生防疫站(邮编 365400)；)
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陈娟(军事医学科学院微生物流行病研究所)
黄祥瑞(军事医学科学院微生物流行病研究所)
钟建平(福建省宁化县卫生防疫站(邮编 365400)；)
张茂银(福建省宁化县卫生防疫站(邮编 365400)；)
林荷(福建省宁化县卫生防疫站(邮编 365400)；)
参考文献
1 梁国栋，李其平，何英，等.我国首次分离到辛德毕斯病毒.病毒学报，1993，5(1)∶55.
2 陈振光，黄详瑞，林荷，等.福建省首次发现辛德毕斯病毒感染.海峡预防医学杂志，1998，4(2)∶12.
3 Karabatsos N. International Catalogue of Arboviruses Ineluding Certain other Viruses Vertebrates, San Antonio. Texas: Am Soc Trop Med Hyg,1985.
4 自登云，陈伯权，俞永新，主编.虫媒病毒与虫媒病毒病.昆明：云南科技出版社，1991，79-85.
5 梁国栋.我国虫媒病毒研究状况.中国人兽共患病杂志，1997，13(4)∶61., 百拇医药
摘 要 目的：血清学调查人群和野生动物感染辛德毕斯热情况。方法：间接免疫荧光试验。结果：人群、野兔、狐狸、狗存在SiN感染，抗体阳性率分别为12.86%、5.88%、14.29%、6.45%。结论：福建宁化林区可能存在辛德毕斯热自然疫源地。
关键词：辛德毕斯热 抗体 间接免疫荧光法
辛德毕斯热是由辛德毕斯病毒Sindbis Virus(SiN)引起的人兽共患虫媒病毒病。库蚊和伊蚊是传播媒介，鸟类和家畜等脊椎动物为其宿主。人因受被感染蚊虫叮咬而感染发病。辛德毕斯热在世界广泛分布，东半球绝大多数国家均有该病存在，1974年南非发生辛德毕斯热大流行。我国13个省、市、区血清学调查表明，新疆、宁夏、安徽等地存在SiN感染，1991年梁国栋等首次从新疆分离到SiN病毒〔1〕。福建1998年首次在宁化发现SiN阳性抗体，且感染率颇高〔2〕。为查清感染情况，我们在进行斑点热课题调研时，亦对林区部分人群、野生动物及不明热疑似病例进行SiN血清学调查。
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1 材料与方法
1.1 被检血清
1.1.1 人群血清 分别采自宁化林区所在曹坊乡、中沙乡、城郊乡人群及不明热疑似病人静脉血，无菌分离血清，冷冻待检。
1.1.2 野兔、狐狸血清 分别采自上述林区猎人捕获的野兔、狐狸心血，无菌分离血清，冷冻待检。
1.1.3 狗血清 采自当地屠宰场，分离血清后冷冻待检。
上述人群及野生动物血清均送军事医学科学院微生物流行病研究所病毒室检测。
1.2 检测方法
1.2.1 地理景观调查 调查宁化县地理位置、地形地貌、植被、野生动物、气候条件等。
, 百拇医药
1.2.2 间接免疫荧光试验(IFA) 按常规方法进行，即将上述待检血清56℃水浴30min灭活后，倍比稀释滴片，置37℃湿盒孵育45min后，用0.01mol/L pH7.4的PBS洗2次，每次2min，晾干后加FITC标记的羊抗人、羊抗兔、羊抗犬等荧光抗体，置37℃湿盒孵育45min后，按上法洗2次，晾干，75%甘油封片，荧光显微镜下观察、判定结果。
1.2.3 SiN病毒感染片、兔抗SiN免疫血清(工作浓度1∶32)及羊抗人、羊抗兔、羊抗犬等IgG荧光血清(工作浓度均为1∶10)，均由军事医科院微生物流行病研究所病毒室制备提供。待检血清1∶10稀释，感染细胞荧光强度以上者判为阳性。对部分阳性标本再进行升高滴度测定。
2 结果
2.1 自然景观 宁化县位于东经116°38′，北纬26°14′，海拔300～700m，年均降雨量1 750.1mm，年平均温度17.5℃，相对湿度81.1%，属亚热带湿润区。宁化山多林深，其中仍存在地广人稀的原始森林；山缘林间、河流冲积地带灌木杂草丛生；鼠类、野兔、狐狸等野生动物活动频繁；蚊虫种类多，密度高。上述生态自然景观给多种虫媒病毒提供良好生存条件，具备虫媒传染病自然疫源地特征。
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2.2 血清抗体检测
2.2.1 人群血清SiN IgG抗体检测 将待检血清1∶10稀释后进行初筛，1∶10阳性者再做抗体效价测定，结果检出阳性27例，阳性率12.86%(表1)。
表1 福建宁化林区人群及野生动物血清SiN抗体检测结果
人群
检测 数
阳性
数
阳性率
(%)
野生
动物
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检测
数
阳性
数
阳性率
(%)
男
92
8
6.69
野兔
34
2
5.88
, 百拇医药
女
118
19
16.10
狐狸
35
5
14.29
< 合计
210
27
12.86
犬
, http://www.100md.com 31
2
6.45
2.2.2 临床疑似病例检测 从18例不明热疑似病人血清(第2份血清)中检出1例SiN IgG阳性抗体，该病例有过发热、皮疹、肌肉酸疼等临床表现，表明曾有SiN中远期感染。提示重视不明热病人的检测，对发现SiN有重要意义。
2.2.3 野生动物血清SiN IgG抗体检测结果 见表1。
2.2.4 人群分布 27例SiN感染者和1例不明热SiN疑似病人，经查询属当地世居者，居住年限均在15年以上。职业分布显示农民高于学生。性别分布显示女性高于男性(1∶0.78)，但无统计学意义(χ2＝2.53，P>0.05)。
3 讨论
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3.1 本调查从宁化林区世居者中查出辛德毕斯热感染率达12.86%，野兔、狐狸、狗SiN感染率分别为5.88%、14.29%和6.45%，表明宁化林区人群及野生动物中存在SiN感染，且可能呈隐性感染状态，一旦机体抵抗力下降，则可导致发病，应引起足够重视。本调查虽在血清学、临床表现方面提示宁化可能存在SiN自然疫源地，但最终仍需从病人中分离出SiN病原体予以确证。
3.2 辛德毕斯病毒属披膜病毒科甲病毒，是虫媒病毒之一。目前世界上已发现的虫媒病毒有500余种，其中120多种对人、畜有致病性，某些病毒还可以引起严重的疾病如脑炎等〔3〕。人的感染一般在蚊虫密度高的季节发生，多为散发。表现为发热、皮疹、关节炎、倦怠、淋巴结肿大等。皮疹常变成水泡，持续7d左右，留下褐色斑，多发生在手和足〔4〕。诊断主要依据抗体测定，结合临床表现；确诊则以病人中分离出SiN病原体。该病至今无特效疗法，多数病例的病情是自限性的，一般用支持疗法和对症治疗。目前尚无可供使用的疫苗。预防措施主要防蚊虫叮咬、灭蚊，改变环境卫生，消除蚊虫滋生场所。
, 百拇医药
3.3 辛德毕斯病原体分离工作在我国起步较晚，梁国栋等1991年首次从新疆伊犁地区捕获的一组按蚊(Anopheles. sp)中分离出SiN病毒，并经血清学、细胞学、动物试验、电镜分析及该毒株1993年在美国疾病控制中心虫媒病毒实验室经空斑减数中心试验证实为辛德毕斯病毒〔1，5〕。我国虽已取得上述成果，但由于地域辽阔，地理景观复杂，存在多种虫媒病毒。为此，今后应加强对SiN等虫媒病毒的流行、分布、媒介、致病情况及双份血清的采集等流行病学资料收集，努力应用先进的分子生物学技术，不断发现和分离SiN等虫媒病毒，仍是病毒研究者的重要任务，以期迅速赶上国际研究水平。
* 福建省科技项目资金资助
作者简介：男，1942年出生，主任医师，享受国务院政府特殊津贴
作者单位：陈振光(福建省宁化县卫生防疫站(邮编 365400)；)
, http://www.100md.com
陈娟(军事医学科学院微生物流行病研究所)
黄祥瑞(军事医学科学院微生物流行病研究所)
钟建平(福建省宁化县卫生防疫站(邮编 365400)；)
张茂银(福建省宁化县卫生防疫站(邮编 365400)；)
林荷(福建省宁化县卫生防疫站(邮编 365400)；)
参考文献
1 梁国栋，李其平，何英，等.我国首次分离到辛德毕斯病毒.病毒学报，1993，5(1)∶55.
2 陈振光，黄详瑞，林荷，等.福建省首次发现辛德毕斯病毒感染.海峡预防医学杂志，1998，4(2)∶12.
3 Karabatsos N. International Catalogue of Arboviruses Ineluding Certain other Viruses Vertebrates, San Antonio. Texas: Am Soc Trop Med Hyg,1985.
4 自登云，陈伯权，俞永新，主编.虫媒病毒与虫媒病毒病.昆明：云南科技出版社，1991，79-85.
5 梁国栋.我国虫媒病毒研究状况.中国人兽共患病杂志，1997，13(4)∶61., 百拇医药