新抗肿瘤化合物8-氯腺苷在大鼠体内的药代动力学研究
窦桂芳 楼雅卿 邹安庆
摘要 目的：探讨一次静注8-氯腺苷在大鼠体内药代动力学的规律及特点，为临床实验提供理论依据。方法：给大鼠单次静注4种剂量8-氯腺苷后，应用HPLC测定在体液和组织中原形物8-氯腺苷的含量。结果:8-氯腺苷在大鼠体内迅速转化为代谢产物，其消除半衰期为1h左右。除脂肪、脑、睾丸组织外，8-氯腺苷在体内分布广泛，药物血浆蛋白结合率在10～40μg/ml浓度范围内约为37%,主要以代谢物形式从尿及胆汁中排泄。结论：8-氯腺苷的药代动力学为一级动力学二室模型，AUC在25～100mg/kg的剂量范围时按比例增加，当剂量增加至150mg/kg时，则AUC不成比例地增加，药物在体内的消除可能转入了零级动力学，8-氯腺苷在大鼠体内迅速代谢，从血中消除并从尿中排泄。
关键词：8-氯腺苷 药代动力学
8-氯腺苷(8-chloro-adenosine,8-Cl-A)为一创新的具抗肿瘤活性的化合物，药理学研究表明，它对小鼠肝癌实体瘤及人白血病HL-60和K562细胞等有明显抑制生长作用，对MOLT-4细胞具有诱导凋亡的作用[1，2]。毒理学研究表明，该化合物毒性较小[3]，故具有开发价值。为了解8-Cl-A在体内的药代动力学规律，并为临床药理研究提供理论依据，我们应用高效液相色谱法检测了大鼠单次静注8-Cl-A后血清中及各组织中8-Cl-A的含量，研究该化合物在生物体内分布代谢及排泄的规律和特点。
, 百拇医药
材料和方法
1 药品
8-Cl-A(批号950424)，由北京医科大学药学院科研组合成和提供。
2 动物
雄性SD大鼠，体重200～300g，由北京医科大学实验动物研究所提供，禁食12h后静脉给药。
3 生物样品制备
血清：单次静注8-Cl-A并于给药前及给药后不同时间点从大鼠眼眶取血，离心，分离血清,-20℃保存。组织：于给药后5，15和60min分3批处死大鼠，摘取心、肝、脾、肺、肾、肠、脂肪、脑、睾丸、肌肉、骨髓、雌性动物的子宫和卵巢(合并)共13种组织样品，所取部位尽量一致和对称,以生理盐水按一定比例制备匀浆。粪：分段收集后干燥、称重，用生理盐水按一定比例制备匀浆。尿和胆汁：于给药后分段收集。所有样品取样后立即保存到-20℃待测。
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4 药物测定方法
利用本实验室建立的测定生物样品中8-Cl-A含量的HPLC[4]。色谱条件为：国产YGWC18(25cm×4.6mm),10μm；流动相为：甲醇∶1%HAc(含0.1%四丁基溴化胺)水溶液(20∶80)；紫外检测波长为263nm。8-Cl-A血清标准曲线在0.1～20μg/ml范围，r=0.9963～0.9995,其回收率在73%～95%范围内，日内和日间精密度(RSD)在3.4%～9.6%范围内，样品最低检测浓度为0.1μg/ml。样品萃取方法为取各种待测样品0.2ml，置于1.5ml离心管中，加入0.4ml乙腈沉淀蛋白，混匀振荡5min，15000r/min离心5min，将上清液转移至另一1.5ml离心管中，加入0.4ml二氯甲烷，振荡混匀5min，超声10min，15000r/min离心5min，取上层水层20μl进样分析。每次样品测定均用随行标准曲线计算样品中药物的含量。
结 果
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1 8-Cl-A的药代动力学研究
将大鼠分成4组，每组分别单次舌静注8-Cl-A25，50，100和150mg/kg4个剂量，于给药后不同时间取血(每时间点为5只大鼠)，分离血清测定8-Cl-A的浓度。见图1。
图1 单次静滴8-Cl-A不同剂量后的药时曲线(n=5)
8-Cl-A血药浓度迅速下降，并迅速出现2种代谢产物8-氯嘌呤和8-氯肌苷[5]。以3P87实用药代动力学程序进行模拟，判定8-Cl-A在大鼠体内的代谢符合一级动力学二室模型，见表1。
表1 单次静注8-Cl-A不同剂量的药代动力学参数[WT〗
参 数
剂量(mg/kg)
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25
50
100
150
A(μg/ml)
32.50
64.89
188.94
396.72
α(μ1/min)
0.8347
0.7544
0.5909
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0.4448
B(μg/ml)
0.70
1.51
2.04
7.49
β(min-1)
0.0091
0.0092
0.0109
0.0134
V(c)(L/kg)
, http://www.100md.com
0.0301
0.0151
0.0524
0.0371
t1/2α(min)
0.83
0.92
1.17
1.56
t1/2β(min)
76.03
75.56
, http://www.100md.com
63.84
51.85
k21(min-1)
0.0264
0.0261
0.0170
0.0214
k10(min-1)
0.2881
0.2655
0.3765
, http://www.100md.com
0.2783
k12(min-1)
0.5293
0.4720
0.2083
0.1582
AUC((g.min)/ml)
115.22
250.09
507.30
1452.49
, 百拇医药
CL(s)(L/(kg.min))
0.0087
0.0040
0.0197
0.0103
2 8-Cl-A的组织分布研究
大鼠舌静注8-Cl-A100mg/kg后，分别于给药后5，15和60min处死动物，每时间点5只大鼠，取各脏器组织测定原形药的含量，见图2。8-Cl-A在各组织中的分布含量顺序为：肝、肾、心>肌肉、骨髓、子宫卵巢>血清、肺>肠、脾、胃。在脂肪、睾丸和脑组织中均未测到8-Cl-A的量。
图2 大鼠舌静注8-Cl-A100mg/kg后
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各组织中原形药的含量(n=5)
3 8-Cl-A与血浆蛋白结合率的测定
首先用lowry法测定空白大鼠血浆中蛋白含量，结果表明本实验所用血浆蛋白含量为126mg/ml。再以平衡透析法测定8-Cl-A与大鼠血浆蛋白结合率,结果表明3种浓度(10，20，40μg/ml)血浆蛋白结合率分别为36.76%，39.10%，34.18%。
4 8-Cl-A的排泄研究
取5只禁食大鼠，单次静注给予8-Cl-A100mg/kg，分别于给药后分段收集48h尿、粪，并测定其8-Cl-A的药物浓度。给药后12h中从尿中排出原形物累积量仅相当于给药量的0.83%,且大都在8h内排出。粪中未检测到原形物。
另取5只禁食大鼠，腹腔注射10%乌拉坦(1g/kg)麻醉，打开腹腔分离胆总管做插管，单次静注8-Cl-A100mg/kg，于给药后不同时间分段收集胆汁，测定药物浓度，给药12h从胆汁中排出的原形药相当于给药量的0.11%，见表2。
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表2 大鼠单次舌静注8-Cl-A100mg/kg后在尿和胆汁中的排泄(n=5)
时间(h)
累计排泄量(剂量%)
胆汁
尿
0～2
0.03±0.01
0.66±0.29
0～4
0.06±0.01
0.78±0.26
0～6
, 百拇医药
0.82±0.26
0～8
0.09±0.02
0.83±0.27
0～12
0.11±0.03
未监测到
排泄的结果表明，药物以原形从尿和胆汁中排出体外的比例不到1%。讨 论
大鼠单次静注4种不同剂量的8-Cl-A后，8-Cl-A在体内血药浓度消除迅速，t1/2β为1h左右(63～76min),CL为0.004～0.019L/kg，Vc在0.0151～0.0504L/kg。在25，50和100mg/kg的剂量时，AUC值随剂量的增加而增加。但在150mg/kg的剂量时，大鼠血药浓度，特别是AUC值不成比例地明显升高，这可能是8-Cl-A剂量过大时，药物的消除规律转入了零级动力学所致。
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大鼠单次静注8-Cl-A后迅速被代谢，实验已证明药物在体内主要生成2种代谢产物8-氯嘌呤和8-氯肌苷[5]。
8-Cl-A分布于多种组织，但在脂溶性高的脑、脂肪、睾丸组织中未检测到，在肝、肾、心组织中原形物的浓度较高。此种分布特点可能与化合物高水溶性低脂溶性的理化性质及不易透过血脑屏障有关。
8-Cl-A的血浆蛋白结合率较低，在10～40μg/ml浓度范围内平均约为37%左右，结合率不随浓度变化而变化。
从8-Cl-A的胆汁及尿排泄结果来看，肾脏为药物的主要排泄器官，主要以代谢物形式排泄体外。粪中未检测到原形物，胆汁中能检测到原形药，粪便中似应有药物存在，考虑到药物在胃肠道不吸收或吸收极少的情况，因而推测，从胆汁中排到粪便的少量药物可能低于最低检测限而未能检测到。大鼠一次静注8-Cl-A100mg/kg后原型物从尿中和胆汁中(12h内)排泄共计为给药剂量的0.94%，根据腺苷、嘌呤及肌苷在体内代谢的规律[6]及我们对8-Cl-A代谢物的药代动力学的研究证实了以上推测[5,7]，其余药物已在体内进一步代谢消除。
, 百拇医药
作者单位:北京医科大学基础医学院药理学系，北京100083
参考文献
1 方家椿,石永进,彭静,等.8-氯腺苷的抗肿瘤作用研究.中华肿瘤杂志1995,17(9)∶48
2 詹京辉,方家椿,石永进,等.8-氯腺苷对小鼠肝癌H22细胞的抑瘤作用研究.中国药理学通报,1996,12(1)∶71
3 彭静,刘影,管玖萍,等.新抗癌药8-氯腺苷的毒理学研究.中国药理学通报，1996,12(6)∶548
4 孙丽丽,窦桂芳,邹安庆,等.高效液相色谱法测定8-氯腺嘌呤核苷及其代谢物的血药浓度.药物分析杂志，1995,15(增刊)∶148
5 窦桂芳,楼雅卿,邹安庆.8-氯腺苷在大鼠体内代谢途径及其代谢产物的鉴定.中国药理与毒理学杂志，1999,13(2)∶141
6 沈同,王境岩.生物化学.下册.第2版.北京:高等教育出版社,1990.299～300
7 窦桂芳,楼雅卿,邹安庆.抗癌新药8-氯腺苷代谢产物8-氯肌苷和8-氯嘌呤的药代动力学研究.中国药理学通讯，1997,14(3)∶15, 百拇医药
摘要 目的：探讨一次静注8-氯腺苷在大鼠体内药代动力学的规律及特点，为临床实验提供理论依据。方法：给大鼠单次静注4种剂量8-氯腺苷后，应用HPLC测定在体液和组织中原形物8-氯腺苷的含量。结果:8-氯腺苷在大鼠体内迅速转化为代谢产物，其消除半衰期为1h左右。除脂肪、脑、睾丸组织外，8-氯腺苷在体内分布广泛，药物血浆蛋白结合率在10～40μg/ml浓度范围内约为37%,主要以代谢物形式从尿及胆汁中排泄。结论：8-氯腺苷的药代动力学为一级动力学二室模型，AUC在25～100mg/kg的剂量范围时按比例增加，当剂量增加至150mg/kg时，则AUC不成比例地增加，药物在体内的消除可能转入了零级动力学，8-氯腺苷在大鼠体内迅速代谢，从血中消除并从尿中排泄。
关键词：8-氯腺苷 药代动力学
8-氯腺苷(8-chloro-adenosine,8-Cl-A)为一创新的具抗肿瘤活性的化合物，药理学研究表明，它对小鼠肝癌实体瘤及人白血病HL-60和K562细胞等有明显抑制生长作用，对MOLT-4细胞具有诱导凋亡的作用[1，2]。毒理学研究表明，该化合物毒性较小[3]，故具有开发价值。为了解8-Cl-A在体内的药代动力学规律，并为临床药理研究提供理论依据，我们应用高效液相色谱法检测了大鼠单次静注8-Cl-A后血清中及各组织中8-Cl-A的含量，研究该化合物在生物体内分布代谢及排泄的规律和特点。
, 百拇医药
材料和方法
1 药品
8-Cl-A(批号950424)，由北京医科大学药学院科研组合成和提供。
2 动物
雄性SD大鼠，体重200～300g，由北京医科大学实验动物研究所提供，禁食12h后静脉给药。
3 生物样品制备
血清：单次静注8-Cl-A并于给药前及给药后不同时间点从大鼠眼眶取血，离心，分离血清,-20℃保存。组织：于给药后5，15和60min分3批处死大鼠，摘取心、肝、脾、肺、肾、肠、脂肪、脑、睾丸、肌肉、骨髓、雌性动物的子宫和卵巢(合并)共13种组织样品，所取部位尽量一致和对称,以生理盐水按一定比例制备匀浆。粪：分段收集后干燥、称重，用生理盐水按一定比例制备匀浆。尿和胆汁：于给药后分段收集。所有样品取样后立即保存到-20℃待测。
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4 药物测定方法
利用本实验室建立的测定生物样品中8-Cl-A含量的HPLC[4]。色谱条件为：国产YGWC18(25cm×4.6mm),10μm；流动相为：甲醇∶1%HAc(含0.1%四丁基溴化胺)水溶液(20∶80)；紫外检测波长为263nm。8-Cl-A血清标准曲线在0.1～20μg/ml范围，r=0.9963～0.9995,其回收率在73%～95%范围内，日内和日间精密度(RSD)在3.4%～9.6%范围内，样品最低检测浓度为0.1μg/ml。样品萃取方法为取各种待测样品0.2ml，置于1.5ml离心管中，加入0.4ml乙腈沉淀蛋白，混匀振荡5min，15000r/min离心5min，将上清液转移至另一1.5ml离心管中，加入0.4ml二氯甲烷，振荡混匀5min，超声10min，15000r/min离心5min，取上层水层20μl进样分析。每次样品测定均用随行标准曲线计算样品中药物的含量。
结 果
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1 8-Cl-A的药代动力学研究
将大鼠分成4组，每组分别单次舌静注8-Cl-A25，50，100和150mg/kg4个剂量，于给药后不同时间取血(每时间点为5只大鼠)，分离血清测定8-Cl-A的浓度。见图1。
图1 单次静滴8-Cl-A不同剂量后的药时曲线(n=5)
8-Cl-A血药浓度迅速下降，并迅速出现2种代谢产物8-氯嘌呤和8-氯肌苷[5]。以3P87实用药代动力学程序进行模拟，判定8-Cl-A在大鼠体内的代谢符合一级动力学二室模型，见表1。
表1 单次静注8-Cl-A不同剂量的药代动力学参数[WT〗
参 数
剂量(mg/kg)
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25
50
100
150
A(μg/ml)
32.50
64.89
188.94
396.72
α(μ1/min)
0.8347
0.7544
0.5909
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0.4448
B(μg/ml)
0.70
1.51
2.04
7.49
β(min-1)
0.0091
0.0092
0.0109
0.0134
V(c)(L/kg)
, http://www.100md.com
0.0301
0.0151
0.0524
0.0371
t1/2α(min)
0.83
0.92
1.17
1.56
t1/2β(min)
76.03
75.56
, http://www.100md.com
63.84
51.85
k21(min-1)
0.0264
0.0261
0.0170
0.0214
k10(min-1)
0.2881
0.2655
0.3765
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0.2783
k12(min-1)
0.5293
0.4720
0.2083
0.1582
AUC((g.min)/ml)
115.22
250.09
507.30
1452.49
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CL(s)(L/(kg.min))
0.0087
0.0040
0.0197
0.0103
2 8-Cl-A的组织分布研究
大鼠舌静注8-Cl-A100mg/kg后，分别于给药后5，15和60min处死动物，每时间点5只大鼠，取各脏器组织测定原形药的含量，见图2。8-Cl-A在各组织中的分布含量顺序为：肝、肾、心>肌肉、骨髓、子宫卵巢>血清、肺>肠、脾、胃。在脂肪、睾丸和脑组织中均未测到8-Cl-A的量。
图2 大鼠舌静注8-Cl-A100mg/kg后
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各组织中原形药的含量(n=5)
3 8-Cl-A与血浆蛋白结合率的测定
首先用lowry法测定空白大鼠血浆中蛋白含量，结果表明本实验所用血浆蛋白含量为126mg/ml。再以平衡透析法测定8-Cl-A与大鼠血浆蛋白结合率,结果表明3种浓度(10，20，40μg/ml)血浆蛋白结合率分别为36.76%，39.10%，34.18%。
4 8-Cl-A的排泄研究
取5只禁食大鼠，单次静注给予8-Cl-A100mg/kg，分别于给药后分段收集48h尿、粪，并测定其8-Cl-A的药物浓度。给药后12h中从尿中排出原形物累积量仅相当于给药量的0.83%,且大都在8h内排出。粪中未检测到原形物。
另取5只禁食大鼠，腹腔注射10%乌拉坦(1g/kg)麻醉，打开腹腔分离胆总管做插管，单次静注8-Cl-A100mg/kg，于给药后不同时间分段收集胆汁，测定药物浓度，给药12h从胆汁中排出的原形药相当于给药量的0.11%，见表2。
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表2 大鼠单次舌静注8-Cl-A100mg/kg后在尿和胆汁中的排泄(n=5)
时间(h)
累计排泄量(剂量%)
胆汁
尿
0～2
0.03±0.01
0.66±0.29
0～4
0.06±0.01
0.78±0.26
0～6
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0.82±0.26
0～8
0.09±0.02
0.83±0.27
0～12
0.11±0.03
未监测到
排泄的结果表明，药物以原形从尿和胆汁中排出体外的比例不到1%。讨 论
大鼠单次静注4种不同剂量的8-Cl-A后，8-Cl-A在体内血药浓度消除迅速，t1/2β为1h左右(63～76min),CL为0.004～0.019L/kg，Vc在0.0151～0.0504L/kg。在25，50和100mg/kg的剂量时，AUC值随剂量的增加而增加。但在150mg/kg的剂量时，大鼠血药浓度，特别是AUC值不成比例地明显升高，这可能是8-Cl-A剂量过大时，药物的消除规律转入了零级动力学所致。
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大鼠单次静注8-Cl-A后迅速被代谢，实验已证明药物在体内主要生成2种代谢产物8-氯嘌呤和8-氯肌苷[5]。
8-Cl-A分布于多种组织，但在脂溶性高的脑、脂肪、睾丸组织中未检测到，在肝、肾、心组织中原形物的浓度较高。此种分布特点可能与化合物高水溶性低脂溶性的理化性质及不易透过血脑屏障有关。
8-Cl-A的血浆蛋白结合率较低，在10～40μg/ml浓度范围内平均约为37%左右，结合率不随浓度变化而变化。
从8-Cl-A的胆汁及尿排泄结果来看，肾脏为药物的主要排泄器官，主要以代谢物形式排泄体外。粪中未检测到原形物，胆汁中能检测到原形药，粪便中似应有药物存在，考虑到药物在胃肠道不吸收或吸收极少的情况，因而推测，从胆汁中排到粪便的少量药物可能低于最低检测限而未能检测到。大鼠一次静注8-Cl-A100mg/kg后原型物从尿中和胆汁中(12h内)排泄共计为给药剂量的0.94%，根据腺苷、嘌呤及肌苷在体内代谢的规律[6]及我们对8-Cl-A代谢物的药代动力学的研究证实了以上推测[5,7]，其余药物已在体内进一步代谢消除。
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作者单位:北京医科大学基础医学院药理学系，北京100083
参考文献
1 方家椿,石永进,彭静,等.8-氯腺苷的抗肿瘤作用研究.中华肿瘤杂志1995,17(9)∶48
2 詹京辉,方家椿,石永进,等.8-氯腺苷对小鼠肝癌H22细胞的抑瘤作用研究.中国药理学通报,1996,12(1)∶71
3 彭静,刘影,管玖萍,等.新抗癌药8-氯腺苷的毒理学研究.中国药理学通报，1996,12(6)∶548
4 孙丽丽,窦桂芳,邹安庆,等.高效液相色谱法测定8-氯腺嘌呤核苷及其代谢物的血药浓度.药物分析杂志，1995,15(增刊)∶148
5 窦桂芳,楼雅卿,邹安庆.8-氯腺苷在大鼠体内代谢途径及其代谢产物的鉴定.中国药理与毒理学杂志，1999,13(2)∶141
6 沈同,王境岩.生物化学.下册.第2版.北京:高等教育出版社,1990.299～300
7 窦桂芳,楼雅卿,邹安庆.抗癌新药8-氯腺苷代谢产物8-氯肌苷和8-氯嘌呤的药代动力学研究.中国药理学通讯，1997,14(3)∶15, 百拇医药