痢疾杆菌L型的生物学性状及致病性
李凤云 孙阳 唐素兰 汪万英 王朝夫 姚敏
摘要 人工诱导痢疾杆菌D15为稳定L型，比较原菌、L型菌生物学性状及致病性的差异。发现L型菌除形态、染色、生长特性与原菌不同外，尚伴有部分生化反应的消失、对药物的敏感性下降、对小鼠的致病力减弱，回复菌则与原菌相同。结果表明痢疾杆菌D15L型的生物学性状及致病性与原菌均有差异。
关键词：痢痢杆菌 L型菌 生物学性状 致病性
细菌在体内外一定条件下可失去或部分失去细胞壁成为L型，L型菌许多性状均与原菌不同，了解细菌L型的生物学性状有助于识别这种变异菌，以防感染漏诊。本文将肠道中最常见的致病菌——痢疾杆菌人工诱导为稳定的L型，观察其生物学性状及致病性，现将结果报告如下。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 菌种 痢疾杆菌D15由福建医科大学提供。D15L型由本室参照文献[1]诱导稳定与回复。
1.2 培养基 中国兰平板、自制的肠道杆菌L型平板及增菌肉汤。
1.3 生物学性状观察 原菌的生化反应按常规法进行，L型菌生化反应管由本室配制。药敏试验采用K-B法。
1.4 致病性研究 将原菌、L型菌分别配制成10亿/ml菌液，用灌胃法感染C57BL/6小鼠。实验动物分为三组：A组10只，每次每只灌入原菌0.5ml；B组10只，每次每只灌入L型菌0.5ml；C组10只，每次灌入生理盐水0.5ml。感染后每天观察动物的发病情况，于第10天将动物全部处死，取死亡小鼠的肠、胃、心、肝、肺、肾、胆囊等组织做病理学检查。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 原菌、L型菌、回复菌生物学性状的比较 痢疾杆菌D15在羧氨苄青霉素作用下24代基本稳定，稳定L型株经肉汤增菌传代4次回复为原菌称回复株。三者的生化反应、药物敏感性及抗原性结果见表1、2。
表1 原菌、L型菌及回复菌生化反应结果
原菌
L型菌
回复菌
葡萄糖
+
-
+
, 百拇医药
乳糖
-
-
-
甲基红
+
-
+
靛基质
-
-
-
硝酸盐还原
+
, 百拇医药
+
+
尿素分解
-
-
-
表2 原菌、L型菌及回复菌药敏结果
原菌
L型菌
回复菌
链霉素
14
-*
, 百拇医药
14
氯霉素
16
-
-
痢特灵
28
16
24
丁氨卡那
26
14
20
诺氟沙星
, 百拇医药
26
17
22
环丙沙星
40
24
32
氨苄青霉素
40
-
38
注：*为无抑菌环
上述结果显示痢疾杆菌变为L型后，其生化性状、对药物的敏感性均发生改变，而回复株性状则与原菌基本相同。
, 百拇医药
2.2 致病性观察 原菌、L型菌灌胃感染小鼠后24h相继出现精神不振、耸毛、畏缩不食等全身症状，B组较A组症状出现稍晚，症状较轻，A、B两组均未出现腹泻。C组无异常。
感染后48hA组小鼠开始死亡，B组于72h开始死亡，至第10天，A组死亡6只，B组死亡4只，C组无一死亡。死亡小鼠解剖可见肠充血水肿、积液。A组2只，B组1只见有肝充血。
取死亡小鼠的心、肝、脑、肺、肾、肠组织切片病理检查，见A、B两组均有肠粘膜下间质性炎，淋巴细胞、单核细胞浸润，淋巴结节形成(图1)。B组一例见有胆囊上皮细胞瘤样增生。A、B两组其他器官未见明显的组织学改变。
图1 痢疾杆菌L型感染小鼠表现
(有肠粘膜下间质性炎，淋巴细胞、单核细
胞浸润，淋巴结节形成 HE染色 10×20)
, 百拇医药
3 讨 论
3.1 菌痢是一种常见的肠道传染病，治疗不当常转为慢性，慢性菌痢反复发作，给病人带来极大的痛苦。研究表明慢性菌痢的发生可能与细菌在抗生素等作用下转为L型有关。本文结过果显示痢疾杆菌L型变后生物学性状亦发生改变，按常规方法难以分离与鉴定，这是慢性菌痢不易找到病原的原因之一。
3.2 动物实验表明痢疾杆菌原菌及L型均有致病性，以全身中毒症状为主，肠道为粘膜下间质性炎，无腹泻症状，说明这些症状主要是内毒素所致。从两组动物的发病、症状及死亡时间上看，L型的致病性较原菌弱，亦即L型菌产毒量较原菌少，这与国内外许多学者的研究结果相似。[2，3]
3.3 肿瘤的病因十分复杂，目前公认的许多病毒与肿瘤的发生有关。近年来，随着细菌L型研究的深入，已发现L型菌的许多特点与病毒相似，如缺壁或无壁、引起间质性炎等。更有人用免疫组化或DNA杂交法证实了某些肿瘤的DNA中整合有某些细菌L型的DNA，因此提出细菌L型可能亦是致癌的原因之一。本文用细菌型及L型同时等量感染小鼠，结果L型组有一只小鼠发生胆囊上皮细胞瘤样增生，这为细菌L型与肿瘤关系的研究又提供了一个证据，今后将进一步深入研究，寻找更有力的证据。
, 百拇医药
基金项目：本科题受安徽省教委资助,基金编号：95JL0102
作者简介：李凤云(1948-)，女，微生物教研室副主任，副教授，硕导，从事细菌L型致病机理的研究。
作者单位：李凤云(蚌埠医学院 微生物教研室，安徽 蚌埠 233003)
孙 阳(蚌埠医学院 微生物教研室，安徽 蚌埠 233003)
唐素兰(蚌埠医学院 微生物教研室，安徽 蚌埠 233003)
汪万英(病理学教研室)
王朝夫(病理学教研室)
姚 敏(病理学教研室)
参考文献
, 百拇医药
[1]黄谷良，林特夫，郭秉兰，等.细菌L型与疾病[M].北京：学苑出版社，1991.
[2]夏佩莹，李凤云.致病性大肠杆菌L型生物学性状及致病性研究[J].中华微生物和免疫学杂志，1985，5：188.
[3]宋秀宇，林特夫，黄谷良.伤寒杆菌L型致病性研究[J].蚌埠医学院学报，1989，14：225.
[4]徐淑秀，张世馥，蒋玉梅.鼻咽癌与抗酸菌L型感染及癌基因表达的关系[J].中国微生态学杂志，1998，10(4A)：35.
[5]汪万英，何杰，姚敏，等.原位杂交检测子宫内膜中金葡菌L型DNA[J].中国微生态学杂志，1998，(4A)：37., 百拇医药
摘要 人工诱导痢疾杆菌D15为稳定L型，比较原菌、L型菌生物学性状及致病性的差异。发现L型菌除形态、染色、生长特性与原菌不同外，尚伴有部分生化反应的消失、对药物的敏感性下降、对小鼠的致病力减弱，回复菌则与原菌相同。结果表明痢疾杆菌D15L型的生物学性状及致病性与原菌均有差异。
关键词：痢痢杆菌 L型菌 生物学性状 致病性
细菌在体内外一定条件下可失去或部分失去细胞壁成为L型，L型菌许多性状均与原菌不同，了解细菌L型的生物学性状有助于识别这种变异菌，以防感染漏诊。本文将肠道中最常见的致病菌——痢疾杆菌人工诱导为稳定的L型，观察其生物学性状及致病性，现将结果报告如下。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 菌种 痢疾杆菌D15由福建医科大学提供。D15L型由本室参照文献[1]诱导稳定与回复。
1.2 培养基 中国兰平板、自制的肠道杆菌L型平板及增菌肉汤。
1.3 生物学性状观察 原菌的生化反应按常规法进行，L型菌生化反应管由本室配制。药敏试验采用K-B法。
1.4 致病性研究 将原菌、L型菌分别配制成10亿/ml菌液，用灌胃法感染C57BL/6小鼠。实验动物分为三组：A组10只，每次每只灌入原菌0.5ml；B组10只，每次每只灌入L型菌0.5ml；C组10只，每次灌入生理盐水0.5ml。感染后每天观察动物的发病情况，于第10天将动物全部处死，取死亡小鼠的肠、胃、心、肝、肺、肾、胆囊等组织做病理学检查。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 原菌、L型菌、回复菌生物学性状的比较 痢疾杆菌D15在羧氨苄青霉素作用下24代基本稳定，稳定L型株经肉汤增菌传代4次回复为原菌称回复株。三者的生化反应、药物敏感性及抗原性结果见表1、2。
表1 原菌、L型菌及回复菌生化反应结果
原菌
L型菌
回复菌
葡萄糖
+
-
+
, 百拇医药
乳糖
-
-
-
甲基红
+
-
+
靛基质
-
-
-
硝酸盐还原
+
, 百拇医药
+
+
尿素分解
-
-
-
表2 原菌、L型菌及回复菌药敏结果
原菌
L型菌
回复菌
链霉素
14
-*
, 百拇医药
14
氯霉素
16
-
-
痢特灵
28
16
24
丁氨卡那
26
14
20
诺氟沙星
, 百拇医药
26
17
22
环丙沙星
40
24
32
氨苄青霉素
40
-
38
注：*为无抑菌环
上述结果显示痢疾杆菌变为L型后，其生化性状、对药物的敏感性均发生改变，而回复株性状则与原菌基本相同。
, 百拇医药
2.2 致病性观察 原菌、L型菌灌胃感染小鼠后24h相继出现精神不振、耸毛、畏缩不食等全身症状，B组较A组症状出现稍晚，症状较轻，A、B两组均未出现腹泻。C组无异常。
感染后48hA组小鼠开始死亡，B组于72h开始死亡，至第10天，A组死亡6只，B组死亡4只，C组无一死亡。死亡小鼠解剖可见肠充血水肿、积液。A组2只，B组1只见有肝充血。
取死亡小鼠的心、肝、脑、肺、肾、肠组织切片病理检查，见A、B两组均有肠粘膜下间质性炎，淋巴细胞、单核细胞浸润，淋巴结节形成(图1)。B组一例见有胆囊上皮细胞瘤样增生。A、B两组其他器官未见明显的组织学改变。
图1 痢疾杆菌L型感染小鼠表现
(有肠粘膜下间质性炎，淋巴细胞、单核细
胞浸润，淋巴结节形成 HE染色 10×20)
, 百拇医药
3 讨 论
3.1 菌痢是一种常见的肠道传染病，治疗不当常转为慢性，慢性菌痢反复发作，给病人带来极大的痛苦。研究表明慢性菌痢的发生可能与细菌在抗生素等作用下转为L型有关。本文结过果显示痢疾杆菌L型变后生物学性状亦发生改变，按常规方法难以分离与鉴定，这是慢性菌痢不易找到病原的原因之一。
3.2 动物实验表明痢疾杆菌原菌及L型均有致病性，以全身中毒症状为主，肠道为粘膜下间质性炎，无腹泻症状，说明这些症状主要是内毒素所致。从两组动物的发病、症状及死亡时间上看，L型的致病性较原菌弱，亦即L型菌产毒量较原菌少，这与国内外许多学者的研究结果相似。[2，3]
3.3 肿瘤的病因十分复杂，目前公认的许多病毒与肿瘤的发生有关。近年来，随着细菌L型研究的深入，已发现L型菌的许多特点与病毒相似，如缺壁或无壁、引起间质性炎等。更有人用免疫组化或DNA杂交法证实了某些肿瘤的DNA中整合有某些细菌L型的DNA，因此提出细菌L型可能亦是致癌的原因之一。本文用细菌型及L型同时等量感染小鼠，结果L型组有一只小鼠发生胆囊上皮细胞瘤样增生，这为细菌L型与肿瘤关系的研究又提供了一个证据，今后将进一步深入研究，寻找更有力的证据。
, 百拇医药
基金项目：本科题受安徽省教委资助,基金编号：95JL0102
作者简介：李凤云(1948-)，女，微生物教研室副主任，副教授，硕导，从事细菌L型致病机理的研究。
作者单位：李凤云(蚌埠医学院 微生物教研室，安徽 蚌埠 233003)
孙 阳(蚌埠医学院 微生物教研室，安徽 蚌埠 233003)
唐素兰(蚌埠医学院 微生物教研室，安徽 蚌埠 233003)
汪万英(病理学教研室)
王朝夫(病理学教研室)
姚 敏(病理学教研室)
参考文献
, 百拇医药
[1]黄谷良，林特夫，郭秉兰，等.细菌L型与疾病[M].北京：学苑出版社，1991.
[2]夏佩莹，李凤云.致病性大肠杆菌L型生物学性状及致病性研究[J].中华微生物和免疫学杂志，1985，5：188.
[3]宋秀宇，林特夫，黄谷良.伤寒杆菌L型致病性研究[J].蚌埠医学院学报，1989，14：225.
[4]徐淑秀，张世馥，蒋玉梅.鼻咽癌与抗酸菌L型感染及癌基因表达的关系[J].中国微生态学杂志，1998，10(4A)：35.
[5]汪万英，何杰，姚敏，等.原位杂交检测子宫内膜中金葡菌L型DNA[J].中国微生态学杂志，1998，(4A)：37., 百拇医药