HSP71在抗癌药物足草乙甙致成人肝细胞凋亡中的作用
HSP71在抗癌药物足草乙甙致成人肝细胞凋亡中的作用
肖成峰 陈胜 高雅娟 王瑞波 贺涵贞 邬堂春
摘要 目的：探讨HSP71在抗癌药物足叶乙甙(eto poside,VP-16)导致的成人肝细胞(L-02)凋亡中的作用。方法：采用Western blot、流式细胞术等方法。结果：L-02细胞在热应 激处理后HSP71表达增加，且与温度、受热时间及恢复时间有关。接受预热应激(41 ℃1 h,3 7 ℃2 h)的细胞经50 μg/ml和100 μg/ml VP-16处理4 h后细胞凋亡百分比为4.99% 和9.55%，较未受热应激组(8.72%和17.86%)明显降低。结论：HSP71 对VP -16导致的L-02细胞凋亡有一定抑制作用。
关键词：热应激蛋白 足叶乙甙 成人肝细胞 细胞凋 亡
凋亡(apoptosis)又称程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)，是一 种由基因调控的自主性细胞死亡方式[1]。机体内各种不利因素如缺氧、高温、辐 射及化疗药物等均可导致凋亡的发生。细胞凋亡的途径有很多种，其中由于DNA损伤而引发 凋亡的途径最为重要[2]。机体接触缺氧、高温等刺激因素诱导凋亡的同时又产生 一组被称为热应激蛋白(heat stress proteins,HSPs)的蛋白质[3，4]。HSPs具有 重要的细胞保护功能。作为“分子伴侣”，HSPs促进蛋白质的合成、折叠、装配和运输，还 参与变性蛋白质的清除等，这种重要功能可能与热耐受、毒物耐受有关[3]。HSPs 分为许多家族，其中最为重要、诱导产生最强的是HSP71[3]。但如此重要的HSP71 对细胞内重要遗传物质DNA的作用仍不太清楚。为此，本研究通过体外培养正常成人肝细胞 ，来探讨HSP71在抗癌药物足叶乙甙(etoposide,VP-16)所导致的细胞DNA损伤及凋亡中的作 用，为进一步了解HSPs的生物学功能和预防职业性毒物危害提供科学依据。
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材料与方法
1.试剂及仪器：VP-16(Sigma公司)、兔抗人HSP71(加拿大Laval大学Robort Tang uay教授惠赠)、辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔IgG(Sigma产品，武汉公司博士德公司分 装)、流式细胞仪(美国Beckon Dickenson公司)。
2.细胞培养：实验用成人正常肝细胞(L-02)由武汉大学中国典型培养物收藏中心(CCTCC)购 进。L-02细胞用DMEM培养基培养，其中含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素(80万单位)、100 μg/ml链霉素，37 ℃培养箱中培养。隔天更换培养基，细胞密度不超过5×105 个/ml。
3.细胞受热及染毒处理：同批接种后24 h半量更换培养基，12 h后取细胞置于电热恒温水温 箱中受热，然后于各时间点收集细胞，用Western blot检测HSP71水平。设立未受热应 激组作对照。
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细胞染毒处理：更换培养基12 h后取细胞于41 ℃受热1 h，置37 ℃恢复2 h后，接受 不同剂量VP-16作用4 h。0.25%胰酶消化，收集的细胞分为两份，分别用于细胞存活率 检测及流式细胞仪分析。设立未受热应激组作对照。
4.细胞存活率检测：取4份0.2%台盼蓝与1份体积分数为4.25%的NaCl混 合。再用1份台盼蓝盐水溶液加到1份细胞悬液中(1∶2稀释)。然后立即滴加到计数板上并分 别计数未染色的细数及染色的细胞数。计算细胞存活率[细胞存活率=未染色的细胞 数/(未染色的细胞数+染色的细胞数)×100%]。
5.Western blot检测HSP71表达：收集细胞，调整至总数一致，按Sambrook等[5]报 道的Western blot方法检测HSP71水平。其中一抗用兔抗人HSP71(1∶5 000)37 ℃孵育1 h，PBS洗10 min，重复3次，HRP标记羊抗兔IgG(1∶5 000)37 ℃1 h，PBS洗3次，DAB 显色，3 7 ℃PBS终止，拍片保存结果。
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6.流式细胞仪分析HSP71水平及细胞凋亡：适时收集足量细胞(1×106～2×106个)，以 2 000 r/min离心4 min，0.5 ml乙醇-20℃固定过夜，离心，PBS洗一次。以后按照He等 [6]的方法用异硫氰酸荧光素(FITC)间接标记HSP71，用碘化丙啶(PI)染DNA，流式细 胞仪分析。
结 果
1.热应激后L-02细胞HSP71表达：L-02细胞在39 ℃受热时，HSP71 表达增加不明显，40 ℃以后显著增高(图1A)。在恢复时间相同(3 h)的情况下，细胞在42 ℃随受热时间的延长，HSP71表达亦增加，呈时间依赖关系(图1B)。当细胞接受同一受热 条件(42 ℃1 h)，HSP71先表达增多，后逐渐恢复至正常水平，表达高峰在4～6 h内出现(图1C)。
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图1 Western blot检测L-02细胞HSP71表达情况
A:L-02细胞在不同温度下受热1 h后，37 ℃恢复3 h； B:细胞在42 ℃受热0～180 min 后，37 ℃恢复3 h； C:细胞42 ℃受热1 h，37 ℃恢复不同时间HSP71表达情况; c：正常对照
2.VP-16对L-02细胞的毒性作用：图2表明VP-16急性作用4 h后，细胞存活率随 剂量的增加而降低，未受热处理组细胞接触100 μg/ml和200 μg/ml VP-16时存活率 较低(81.6%和72.7%)，热处理(41 ℃1 h,37 ℃2 h)后细胞存活率则可明显提高(87.0 %和83.8 %)。
图2 接触不同剂量VP-16时L-02细 胞存活率
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3.HSP71表达增高对L-02细胞凋亡的抑制：图3表明，50 μg/ml或100 μg/ml VP-16处 理细胞时，预热处理组凋亡百分率分别为4.99%和9.55%，明显低于未经受热处理组(8. 72%和17.82%)。细胞热应激后未经VP-16处理时凋亡百分率为4.68%，与正常对照( 3.62%)比较，变化不大。
图3 流式细胞术分析L-02细胞凋亡情况
A、B、C：细胞接触VP-16作用4 h，剂量分别为0、50、100 μg/ml； D、E、F：细胞经41 ℃1 h、37 ℃2 h后，接触0、50、100 μg/ml VP-16作用4 h；M1：凋亡百分率
4.凋亡细胞HSP71水平与正常细胞比较：凋亡细胞由于DNA 含量减少，呈“亚二倍体”现象，其细胞内HPS71水平较正常二倍体或四倍体细胞低得多(图 4三角区)。同时，受热组细胞HSP71表达比未受热组高(图4)，与Western blot结果一致。
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图4 流式细胞术检测L-0 2细胞HSP71水平及DNA含量
A、B：L-02细胞接触0、50 μg/ml VP-16作用4 h； C、D： 细胞经41 ℃1 h,37 ℃2 h后，接触0、50 μg/ml VP-16作用4 h结果； HSP71用FITC间接 标记，DNA用PI染色； Ap：凋亡细胞
讨 论
VP-16导致细胞凋亡是由于抑制DNA拓朴异构酶Ⅱ的活力，阻止DNA复制而产生 [7]。本研究发现，L-02细胞接触VP-16作用4 h后，细胞存活率降低，流式细胞术 则检出明显的“亚G1峰”，表明细胞发生凋亡。其凋亡百分率有剂量依赖关系。
细胞通过适应性改变对外界环境作出反应。大量资料表明，当组织、细胞受到 高温、缺氧和药物损伤时，均伴随HSPs含量的增加。HSPs表达增加与热耐受和毒物耐受有关 [4]。
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本研究发现，L-02细胞在42 ℃受热1 h、37 ℃恢复4～6 h，HSP71表达显著增 加；在41 ℃受热时，HPS71表达已很明显。为了尽量减少高温与VP-16对L-02细胞DNA损伤 的联合作用，我们用VP-16处理时受热应激组采用41 ℃受热1 h。
本研究表明，受热应激的细胞比未受热应激组细胞存活率高(图2)。说明受热应激的细胞已 经产生药物耐受。流式细胞术进一步研究发现，50 μg/ml和100 μg/ml VP-16均可导致L -02细胞“亚G1峰”出现，即发生凋亡，且经41 ℃1 h处理后的细胞凋亡百分比明显较对照 组低(图3)。HSP71-DNA双变量图则表明凋亡细胞HSP71含量明显低于正常的二倍体或四倍体 细胞(图4)，提示HSP71含量减少，不足以保护VP-16所致的DNA损伤，因而发生凋亡。同时 ，受热应激组细胞HSP71水平高于对照组(图4)，与Western blot结果一致，说明HS P71可以抑制抗癌药物导致的细胞凋亡，在保护机体内重要的遗传物质DNA中发挥重要作用 。
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有关HSP71如何保护DNA受损从而抑制细胞凋亡这一课题尚不够深入。但已有文献从以下几个 方面报道HSPs与DNA之间的关系：(1)HSPs在受热时合成，恢复期转移至胞浆，第2次应激时 再分布于细胞核[3]；(2)各种因素诱导HSPs表达的同时，又可导致DNA片段化并发 生凋亡[8，9]；(3)热应激抑制DNA外显子的拼接和mRNA翻译，而热耐受细胞则可拮 抗这种抑制作用[10]等等。近年又发现HSPs可以与抑癌基因如p53表达产物、凋亡 调节基因bax等相互作用来调节细胞凋亡[11，12]，这些均为以后深入研究HSPs与 细胞凋亡之间的关系提供了有利依据。
研究HSP71与成人肝细胞DNA损伤进而发生凋亡之间的关系有重要意义。一方面，它可以为肿 瘤的治疗提供全新的途径，尽管肿瘤细胞较正常肝细胞有较强的药物耐受能力。资料表明， HSP71参与机体细胞热耐受或药物耐受的形成，肿瘤细胞的这种异乎寻常的适应能力与其 胞浆内HSPs表达升高高度相关。因此，如果能找到某种物质特异性地抑制HSPs的表达，将极 大地提高肿瘤细胞对化疗或热疗的敏感性。另一方面，而且也是最重要的，由于各种职业性 有害因素直接作用于正常机体，导致功能性或器质性病变，部分有害因素(如苯)甚至可以引 起遗传物质DNA的损伤，因此，探讨HSP71与DNA之间的关系，通过某种预刺激因素使细胞内H SP71表达增加，产生较强的毒物耐受能力，从而就可达到预防苯等职业性有害因素危害的目的。
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基金项目：国家自然科学基金青年基金资助项目(39700118)
作者单位：肖成峰(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
陈 胜(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
高雅娟(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
王瑞波(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
贺涵贞(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
邬堂春(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
参考文献
[1]Kerr JFR,Wyllie AH,Gurrie AR.Apoptosis:a basic biological phenome non with wide ranging implications in tissue kinetics.Br J Cancer,1972,26:239-2 57.
, http://www.100md.com
[2]Saini KS,Walker NI.Biochemical and molecular mechanisms regulatin g apoptosis.Mol Cell Biochem,1998,178:9-25.
[3]Morimoto RI,Tissieres A,Georgopoulos C.Progress and perspectives on the biology of heat shock proteins and molecular chaperones.In:The biology of heat shock proteins and molecular chaperones.Morimoto RI,et al.eds.Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,1994.l-30.
[4]Lindquist S,Craig EA.The heat-shock protein.Ann Rev Genet,1988, 22:631-677.
, 百拇医药
[5]Sambrook J,Fritsch EF,Maniatis T.分子克隆实验指南.金冬雁，黎孟枫 译.第二版.北京：科学出版社，1993.880-898.
[6]He LS,Fox MH.Variation of heat shock protein 70 through the cell cycle in HL-60 cells and its relationship to apoptosis.Exp Cell Res,1997,232:64 -71.
[7]Dal Pra I,Whitfield JF,Chiarini A,et al.Changes in nuclear prote in kinase C-delta holoenzyme,its catalytic fragments,and its activity in polyom avirus-transformed pyF111 rat fibroblasts while proliferating and following exp osure to apoptogenic topoisomerase-Ⅱ inhibitors.Exp Cell Res,1999,249(1):147- 160.
, 百拇医药
[8]Baxter GD,Lavin MF.Specific protein dephosphorylation in apoptosi s induced by ionizing radiation and heat shock in human lymphoid tumor lines.J I mmunol,1992,148:1946-1954.
[9]Lennon SV,Martin SJ,Cotter TG.Induction of apoptosis (programmed cell death) in tumor cell lines by widely diverging stimuli.Biochem Soc Trans,19 90,18:343-345.
[10]Mivecchi NF,Ogilvie PE.Effect of heat shock proteins(Mr 70 00 0) on protein and DNA synthesis at elevated temperatures.Cancer Res,1989,49:14 92-1496.
[11]张永幸，贺涵贞，邬堂春，等.职业性肺癌中HSP70，HSP27与p53表达的 相关性研究.中华劳动卫生职业病杂志，1998，16：78-80.
[12]Gordon SA,Hoffman RA,Simmons RL,et al.Induction of heat shock p rotein 70 protects thymocytes against radiation-induced apoptosis.Arch Surg,199 7,132:1277-1282., 百拇医药
肖成峰 陈胜 高雅娟 王瑞波 贺涵贞 邬堂春
摘要 目的：探讨HSP71在抗癌药物足叶乙甙(eto poside,VP-16)导致的成人肝细胞(L-02)凋亡中的作用。方法：采用Western blot、流式细胞术等方法。结果：L-02细胞在热应 激处理后HSP71表达增加，且与温度、受热时间及恢复时间有关。接受预热应激(41 ℃1 h,3 7 ℃2 h)的细胞经50 μg/ml和100 μg/ml VP-16处理4 h后细胞凋亡百分比为4.99% 和9.55%，较未受热应激组(8.72%和17.86%)明显降低。结论：HSP71 对VP -16导致的L-02细胞凋亡有一定抑制作用。
关键词：热应激蛋白 足叶乙甙 成人肝细胞 细胞凋 亡
凋亡(apoptosis)又称程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)，是一 种由基因调控的自主性细胞死亡方式[1]。机体内各种不利因素如缺氧、高温、辐 射及化疗药物等均可导致凋亡的发生。细胞凋亡的途径有很多种，其中由于DNA损伤而引发 凋亡的途径最为重要[2]。机体接触缺氧、高温等刺激因素诱导凋亡的同时又产生 一组被称为热应激蛋白(heat stress proteins,HSPs)的蛋白质[3，4]。HSPs具有 重要的细胞保护功能。作为“分子伴侣”，HSPs促进蛋白质的合成、折叠、装配和运输，还 参与变性蛋白质的清除等，这种重要功能可能与热耐受、毒物耐受有关[3]。HSPs 分为许多家族，其中最为重要、诱导产生最强的是HSP71[3]。但如此重要的HSP71 对细胞内重要遗传物质DNA的作用仍不太清楚。为此，本研究通过体外培养正常成人肝细胞 ，来探讨HSP71在抗癌药物足叶乙甙(etoposide,VP-16)所导致的细胞DNA损伤及凋亡中的作 用，为进一步了解HSPs的生物学功能和预防职业性毒物危害提供科学依据。
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材料与方法
1.试剂及仪器：VP-16(Sigma公司)、兔抗人HSP71(加拿大Laval大学Robort Tang uay教授惠赠)、辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔IgG(Sigma产品，武汉公司博士德公司分 装)、流式细胞仪(美国Beckon Dickenson公司)。
2.细胞培养：实验用成人正常肝细胞(L-02)由武汉大学中国典型培养物收藏中心(CCTCC)购 进。L-02细胞用DMEM培养基培养，其中含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素(80万单位)、100 μg/ml链霉素，37 ℃培养箱中培养。隔天更换培养基，细胞密度不超过5×105 个/ml。
3.细胞受热及染毒处理：同批接种后24 h半量更换培养基，12 h后取细胞置于电热恒温水温 箱中受热，然后于各时间点收集细胞，用Western blot检测HSP71水平。设立未受热应 激组作对照。
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细胞染毒处理：更换培养基12 h后取细胞于41 ℃受热1 h，置37 ℃恢复2 h后，接受 不同剂量VP-16作用4 h。0.25%胰酶消化，收集的细胞分为两份，分别用于细胞存活率 检测及流式细胞仪分析。设立未受热应激组作对照。
4.细胞存活率检测：取4份0.2%台盼蓝与1份体积分数为4.25%的NaCl混 合。再用1份台盼蓝盐水溶液加到1份细胞悬液中(1∶2稀释)。然后立即滴加到计数板上并分 别计数未染色的细数及染色的细胞数。计算细胞存活率[细胞存活率=未染色的细胞 数/(未染色的细胞数+染色的细胞数)×100%]。
5.Western blot检测HSP71表达：收集细胞，调整至总数一致，按Sambrook等[5]报 道的Western blot方法检测HSP71水平。其中一抗用兔抗人HSP71(1∶5 000)37 ℃孵育1 h，PBS洗10 min，重复3次，HRP标记羊抗兔IgG(1∶5 000)37 ℃1 h，PBS洗3次，DAB 显色，3 7 ℃PBS终止，拍片保存结果。
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6.流式细胞仪分析HSP71水平及细胞凋亡：适时收集足量细胞(1×106～2×106个)，以 2 000 r/min离心4 min，0.5 ml乙醇-20℃固定过夜，离心，PBS洗一次。以后按照He等 [6]的方法用异硫氰酸荧光素(FITC)间接标记HSP71，用碘化丙啶(PI)染DNA，流式细 胞仪分析。
结 果
1.热应激后L-02细胞HSP71表达：L-02细胞在39 ℃受热时，HSP71 表达增加不明显，40 ℃以后显著增高(图1A)。在恢复时间相同(3 h)的情况下，细胞在42 ℃随受热时间的延长，HSP71表达亦增加，呈时间依赖关系(图1B)。当细胞接受同一受热 条件(42 ℃1 h)，HSP71先表达增多，后逐渐恢复至正常水平，表达高峰在4～6 h内出现(图1C)。
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图1 Western blot检测L-02细胞HSP71表达情况
A:L-02细胞在不同温度下受热1 h后，37 ℃恢复3 h； B:细胞在42 ℃受热0～180 min 后，37 ℃恢复3 h； C:细胞42 ℃受热1 h，37 ℃恢复不同时间HSP71表达情况; c：正常对照
2.VP-16对L-02细胞的毒性作用：图2表明VP-16急性作用4 h后，细胞存活率随 剂量的增加而降低，未受热处理组细胞接触100 μg/ml和200 μg/ml VP-16时存活率 较低(81.6%和72.7%)，热处理(41 ℃1 h,37 ℃2 h)后细胞存活率则可明显提高(87.0 %和83.8 %)。
图2 接触不同剂量VP-16时L-02细 胞存活率
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3.HSP71表达增高对L-02细胞凋亡的抑制：图3表明，50 μg/ml或100 μg/ml VP-16处 理细胞时，预热处理组凋亡百分率分别为4.99%和9.55%，明显低于未经受热处理组(8. 72%和17.82%)。细胞热应激后未经VP-16处理时凋亡百分率为4.68%，与正常对照( 3.62%)比较，变化不大。
图3 流式细胞术分析L-02细胞凋亡情况
A、B、C：细胞接触VP-16作用4 h，剂量分别为0、50、100 μg/ml； D、E、F：细胞经41 ℃1 h、37 ℃2 h后，接触0、50、100 μg/ml VP-16作用4 h；M1：凋亡百分率
4.凋亡细胞HSP71水平与正常细胞比较：凋亡细胞由于DNA 含量减少，呈“亚二倍体”现象，其细胞内HPS71水平较正常二倍体或四倍体细胞低得多(图 4三角区)。同时，受热组细胞HSP71表达比未受热组高(图4)，与Western blot结果一致。
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图4 流式细胞术检测L-0 2细胞HSP71水平及DNA含量
A、B：L-02细胞接触0、50 μg/ml VP-16作用4 h； C、D： 细胞经41 ℃1 h,37 ℃2 h后，接触0、50 μg/ml VP-16作用4 h结果； HSP71用FITC间接 标记，DNA用PI染色； Ap：凋亡细胞
讨 论
VP-16导致细胞凋亡是由于抑制DNA拓朴异构酶Ⅱ的活力，阻止DNA复制而产生 [7]。本研究发现，L-02细胞接触VP-16作用4 h后，细胞存活率降低，流式细胞术 则检出明显的“亚G1峰”，表明细胞发生凋亡。其凋亡百分率有剂量依赖关系。
细胞通过适应性改变对外界环境作出反应。大量资料表明，当组织、细胞受到 高温、缺氧和药物损伤时，均伴随HSPs含量的增加。HSPs表达增加与热耐受和毒物耐受有关 [4]。
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本研究发现，L-02细胞在42 ℃受热1 h、37 ℃恢复4～6 h，HSP71表达显著增 加；在41 ℃受热时，HPS71表达已很明显。为了尽量减少高温与VP-16对L-02细胞DNA损伤 的联合作用，我们用VP-16处理时受热应激组采用41 ℃受热1 h。
本研究表明，受热应激的细胞比未受热应激组细胞存活率高(图2)。说明受热应激的细胞已 经产生药物耐受。流式细胞术进一步研究发现，50 μg/ml和100 μg/ml VP-16均可导致L -02细胞“亚G1峰”出现，即发生凋亡，且经41 ℃1 h处理后的细胞凋亡百分比明显较对照 组低(图3)。HSP71-DNA双变量图则表明凋亡细胞HSP71含量明显低于正常的二倍体或四倍体 细胞(图4)，提示HSP71含量减少，不足以保护VP-16所致的DNA损伤，因而发生凋亡。同时 ，受热应激组细胞HSP71水平高于对照组(图4)，与Western blot结果一致，说明HS P71可以抑制抗癌药物导致的细胞凋亡，在保护机体内重要的遗传物质DNA中发挥重要作用 。
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有关HSP71如何保护DNA受损从而抑制细胞凋亡这一课题尚不够深入。但已有文献从以下几个 方面报道HSPs与DNA之间的关系：(1)HSPs在受热时合成，恢复期转移至胞浆，第2次应激时 再分布于细胞核[3]；(2)各种因素诱导HSPs表达的同时，又可导致DNA片段化并发 生凋亡[8，9]；(3)热应激抑制DNA外显子的拼接和mRNA翻译，而热耐受细胞则可拮 抗这种抑制作用[10]等等。近年又发现HSPs可以与抑癌基因如p53表达产物、凋亡 调节基因bax等相互作用来调节细胞凋亡[11，12]，这些均为以后深入研究HSPs与 细胞凋亡之间的关系提供了有利依据。
研究HSP71与成人肝细胞DNA损伤进而发生凋亡之间的关系有重要意义。一方面，它可以为肿 瘤的治疗提供全新的途径，尽管肿瘤细胞较正常肝细胞有较强的药物耐受能力。资料表明， HSP71参与机体细胞热耐受或药物耐受的形成，肿瘤细胞的这种异乎寻常的适应能力与其 胞浆内HSPs表达升高高度相关。因此，如果能找到某种物质特异性地抑制HSPs的表达，将极 大地提高肿瘤细胞对化疗或热疗的敏感性。另一方面，而且也是最重要的，由于各种职业性 有害因素直接作用于正常机体，导致功能性或器质性病变，部分有害因素(如苯)甚至可以引 起遗传物质DNA的损伤，因此，探讨HSP71与DNA之间的关系，通过某种预刺激因素使细胞内H SP71表达增加，产生较强的毒物耐受能力，从而就可达到预防苯等职业性有害因素危害的目的。
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基金项目：国家自然科学基金青年基金资助项目(39700118)
作者单位：肖成峰(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
陈 胜(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
高雅娟(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
王瑞波(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
贺涵贞(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
邬堂春(430030 武汉，同济医科大学职业医学研究所)
参考文献
[1]Kerr JFR,Wyllie AH,Gurrie AR.Apoptosis:a basic biological phenome non with wide ranging implications in tissue kinetics.Br J Cancer,1972,26:239-2 57.
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[3]Morimoto RI,Tissieres A,Georgopoulos C.Progress and perspectives on the biology of heat shock proteins and molecular chaperones.In:The biology of heat shock proteins and molecular chaperones.Morimoto RI,et al.eds.Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,1994.l-30.
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[5]Sambrook J,Fritsch EF,Maniatis T.分子克隆实验指南.金冬雁，黎孟枫 译.第二版.北京：科学出版社，1993.880-898.
[6]He LS,Fox MH.Variation of heat shock protein 70 through the cell cycle in HL-60 cells and its relationship to apoptosis.Exp Cell Res,1997,232:64 -71.
[7]Dal Pra I,Whitfield JF,Chiarini A,et al.Changes in nuclear prote in kinase C-delta holoenzyme,its catalytic fragments,and its activity in polyom avirus-transformed pyF111 rat fibroblasts while proliferating and following exp osure to apoptogenic topoisomerase-Ⅱ inhibitors.Exp Cell Res,1999,249(1):147- 160.
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[8]Baxter GD,Lavin MF.Specific protein dephosphorylation in apoptosi s induced by ionizing radiation and heat shock in human lymphoid tumor lines.J I mmunol,1992,148:1946-1954.
[9]Lennon SV,Martin SJ,Cotter TG.Induction of apoptosis (programmed cell death) in tumor cell lines by widely diverging stimuli.Biochem Soc Trans,19 90,18:343-345.
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[11]张永幸，贺涵贞，邬堂春，等.职业性肺癌中HSP70，HSP27与p53表达的 相关性研究.中华劳动卫生职业病杂志，1998，16：78-80.
[12]Gordon SA,Hoffman RA,Simmons RL,et al.Induction of heat shock p rotein 70 protects thymocytes against radiation-induced apoptosis.Arch Surg,199 7,132:1277-1282., 百拇医药