胎盘解脲脲原体感染与妊娠的关系
孙红妹 郭章溉 吴广琴 张景华 王斌 谢晓桦 任桂珍 陈树新
关键词；胎盘 解脲脲原体 感染 妊娠
解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum 简称Uu)是人类泌尿生殖道较常见的病原体，妊娠期Uu感染可引起不良的妊娠结局。本文主要探讨胎盘Uu感染与胎膜早破、早产、羊水性状、新生儿感染等的关系。
1 材料与方法
1.1 检测对象 1997年6～12月在北京天坛医院产科分娩的产妇304例，产妇年龄为20～38岁，平均年龄为26岁。孕周为36～42周。其中剖宫产分娩58例，自然分娩246例。产妇无吸烟史及糖尿病史。
1.2 标本的收集 产妇分娩出胎盘后，立即取1.0cm3的胎盘组织，放入装有2ml胎盘运输液的无菌塑料管中，4℃冰箱保存24～48h内送研究室进行胎盘Uu培养及PCR检测。
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1.3 胎盘标本的Uu分离培养 将胎盘标本放入无菌玻璃研磨器中研磨后，吸取0、2ml匀浆加入1.8ml Uu液体培养基(本室自配)后，再进行一次10倍稀释。将此两个稀释度的试管置37℃孵育18～48h,当培养基逐渐由黄色变为粉红色时,将其转种于Uu固体培养基,37℃孵育24～48h,观察菌落生长情况。Uu菌落为黄褐色、圆形或不太规则的圆形,大小不等,内部有布纹样结构,有的菌落周围可见很薄的透明区环绕,似煎蛋样。出现Uu菌落者为Uu阳性,未见菌落者为阴性。
1.4 胎盘Uu培养液的PCR检测 采用Cybersyn公司提供的U4、U5两条引物，引物核酸序列如下：
U4：5-CAA TCT GCT CGT GAA GTA TTA C-3
U5：5-ACG ACG TCC ATA AGC AAC T-3
PCR循环程序为：95℃预变性5min后，进行95℃变性1min、55℃复性1min、72℃延伸1min，共35个循环后，72℃延伸7min。TaqDNA聚合酶、dNTP等由华美生物工程公司提供，以U8标准株为阳性对照模板(首都儿科研究所)，对116例胎盘培养液进行PCR检测，其阳性扩增产物应为429bp[1]。
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2 结果
2.1 Uu培养结果 304例胎盘标本中，93例分离培养出Uu，阳性率为30.59%。Uu阳性的胎盘中，剖宫产占15%，Uu阴性的胎盘中，剖宫产占20%，自然分娩和剖宫产之Uu感染率无显著性差异(P>0.05)。
2.2 PCR灵敏度试验 采用本实验所用PCR系统对U8标准菌株进行检测，U8标准菌株培养物变色单位(CCU)为10-4，对其进行10-1、10-2、10-3、10-4稀释，用此PCR法可检测出10-3稀释度的U8培养液。
2.3 PCR检测胎盘培养液的Uu 用PCR法共检测胎盘标本116例，其中Uu阳性者89例(含1例培养过程中有污染标本)，检测阴性标本27例。
, http://www.100md.com 2.4 PCR与培养法的符合率 89例PCR阳性标本中有88例胎盘培养阳性，1例因标本污染，培养未出结果；27例PCR阴性标本中有2例胎盘培养阳性，25例胎盘培养阴性。PCR与培养法的符合率为97%。
2.5 妊娠结果 随机取前155例孕妇进行临床观察，其中胎盘Uu培养阳性组53例,阴性组102例。
2.5.1 胎膜早破 胎膜在产程开始之前破裂者，称为胎膜早破。本组病例中胎膜早破18例，其中Uu阳性12例，占Uu阳性组22.64%，含剖宫产6例。Uu阴性6例，占Uu阴性组5.88%。两组相比有极其显著性差异(P<0.01)。
2.5.2 羊水性状 155例中有29例羊水呈黄绿色或混有胎粪。Uu阳性组占13例(24.53%)，Uu阴性组占16例(15.69%)，两者无显著性差异(P>0.05)。
2.5.3 早产 妊娠在28～37周之间终止者为早产。本组病例共有早产16例，Uu阳性组9例(17%)，阴性组7例(6.86%)，两组差异无显著性(P>0.05)。
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2.5.4 新生儿感染 对出生42天的新生儿进行随访，Uu阳性组共随访44例，有各种感染者8例，占18.18%。其中生后不明原因发热2例，体温37.5～38.5℃，持续48h以上；脐炎1例；生后20天左右患新生儿肺炎3例，均入院治疗7～10天好转；上呼吸道感染1例；新生儿重度黄染1例，总胆红素366μmol/L，20天后好转。阴性组随访83例，有各种感染者4例，占4.82%。其中发热1例、上感1例、肺炎1例、新生儿黄疸1例。Uu阳性组与阴性组感染率相比有显著性差异(P<0.05)。
另外，Uu阳性组还有生后42天内发育营养差、生长缓慢者2例；多发畸形1例，表现为狼咽、睾丸未降、反应低下、不能吸吮等。阴性组未出现此种病例。
3 讨论与结论
Uu被认为是引起妊娠感染的病因之一，可导致不良的妊娠结局。国外报道，Uu在胎盘中的出现与胎膜早破、自然流产、早产、低出生体重、宫内发育迟缓及围产期发病率和死亡率有关[2]。
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3.1 胎盘Uu感染的检测 本组胎盘标本Uu感染率为30.59%，与我们以往所测胎盘Uu阳性率[3]及国外报道胎盘Uu感染率基本相符。
传统的Uu检测方法为Uu培养法，Uu在液体培养基中生长速度较快，一般在48h内就可发生颜色改变，但Uu的阳性诊断要以看到Uu菌落为准，Uu在固体培养基上生长的菌落不易观察，且受液体培养时间及Uu生长的速度的影响较大，故有些标本较难鉴定。
本实验所用PCR法参考了国外文献，反复摸索条件，建立了较稳定的PCR检测Uu的方法。此方法的敏感性、特异性均可。除1例污染标本PCR检测出Uu外，其余PCR检测阳性，Uu胎盘培养均阳性。2例胎盘培养阳性的标本PCR未测出Uu，考虑为标本处理不够、DNA模板不能充分暴露所致。
由于本PCR法检测的Uu阳性率与培养法基本相符，借鉴这两种方法的优点，建议在进行组织培养检测时，采用Uu液体培养法与PCR法结合的方法，这样可以既迅速又准确地作出是否存在Uu感染的判断，以指导临床治疗。
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3.2 Uu感染与新生儿宫内感染 本组病例中剖宫产与自然分娩者的胎盘Uu阳性率之间无明显差异，与以往实验结果相同，支持分娩时产道污染对胎盘Uu感染不起决定作用，大多数胎盘在宫内已感染Uu的观点，即Uu在分娩前可通过胎盘屏障感染胎盘和胎儿。
3.3 胎盘Uu感染与胎膜早破 国外报道，胎膜早破和分娩间隔时间不同，胎膜的支原体分离率也不同。分娩前破膜48h以上的胎盘，其Uu的分离率为67%；分娩前24～48h内破膜的胎盘Uu分离率为23%(P<0.001)；而在破膜24h内分娩的胎盘的支原体分离率只有10%(P<0.001)[2]。
本组病例Uu阳性组之胎膜早破发生率较Uu阴性组明显升高(P<0.01)，说明胎膜早破大大增加了Uu由产道上行性感染的机会，也直接增加了Uu感染胎儿的机会。但Uu阳性组12例胎膜早破病例中有6例为破膜后立即行剖宫产手术者，不排除Uu已在宫内感染，且对胎膜起了一定的破坏作用。
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3.4 胎盘Uu感染与新生儿感染 国外近10年的报道表明，Uu是重要的新生儿病原，尤其在血流、呼吸道和中枢神经系统的感染较为突出。国外已从患肺炎的新生儿的血液、肺组织、肺分泌物、胸膜液等分离出Uu。
Stagno[4]等对生后2～12周的新生儿肺炎患者的鼻咽吸出物进行Uu培养，38例中有8例Uu阳性，阳性率21%，正常对照组新生儿49例中2例Uu阳性，阳性率4%，两组差异较大。
Quinn PA[5]等对正常新生儿和呼吸系统疾病患儿用代谢抑制试验进行Uu抗体检测。正常组Uu阳性率2.6%(滴度≥1∶32为阳性)，呼吸道感染组Uu阳性率55.6%(P<0.01)。
本研究Uu阳性患儿新生儿感染率较Uu阴性组为高，且发现2例生后42天内发育营养不良、生长缓慢病例及1例多发畸形均在Uu阳性组，说明胎盘Uu感染对新生儿可产生一定的不良影响，可通过对感染新生儿进行血清学和培养方面的检测，来进一步证明。
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3.5 胎盘Uu感染与早产 国外报道，随胎儿胎龄的增加，Uu在胎盘中的分离逐渐减少。Embree研究表明，孕38周以下分娩的胎盘Uu分离率为32%，对照组大于38周的分离率为9%(P<0.001)。还有人报道孕龄28周以下新生儿80%Uu阳性，28～36周17.9%Uu阳性，因此认为Uu分离率与孕龄有密切关系。本研究中Uu阳性组早产儿占17%，阴性组占6.86%，阳性组比阴性组高，但无显著性差异，考虑为病例较少的缘故。
此外，Uu感染与羊水性状、产妇年龄、新儿性别等无明显关系。
3.6 本研究表明，胎盘Uu感染(上行或/和下行)的存在，与胎膜早破、新生儿感染、早产等有一定相关性。为了搞好优生优育， 特别是在治疗新生儿感染时，一定要注意Uu感染的存在。可以用Uu液体培养加PCR的方法，对Uu感染进行快速有效的早期诊断，以指导临床治疗。
孙红妹(首都儿科研究所北京，100020)
, http://www.100md.com
郭章溉(首都儿科研究所北京，100020)
吴广琴(北京天坛医院)
张景华(北京天坛医院)
王斌(首都儿科研究所北京，100020)
谢晓桦(首都儿科研究所北京，100020)
任桂珍(首都儿科研究所北京，100020)
陈树新(首都儿科研究所北京，100020)
参考文献
1，Blanchard A,Hentschel J,Duffy L,et al.Detection of Ureaplasma urealyticum by PCR in theuregenital tract of adults,in amniotic fluid,and in the respiratory tract of newborns[J].Clin Infect Dis,1993，17 (Suppl 1)∶S148.
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2，Embree JE,Krause VW,Embil JA, et al.Placental infection with Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum：Clinical correlation[J].Obstet Gynecol,1980,56∶475.
3，孙红妹，郭章溉，张景华，等.胎盘解脲支原体感染与新生儿出生体重的关系[J].中华妇产科杂志，1995，30(6)∶340.
4，Stagno S,Brasfield DM,Brown MB,et al.Infant pneumonitis associated with Cytomegaalovirus,Chlamydia,Pneeummocystis,and Ureaplasma：a prospective study[J].Pediatrics,1981,68(3)∶322.
5，Quinn PA,Rubin S,Li HCS,et al.Serological evidence of Ureaplasm urealyticum infection in neonatal respiratory disease[J].The Yale J Biol Med,1983,56(5-6),565., http://www.100md.com
关键词；胎盘 解脲脲原体 感染 妊娠
解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum 简称Uu)是人类泌尿生殖道较常见的病原体，妊娠期Uu感染可引起不良的妊娠结局。本文主要探讨胎盘Uu感染与胎膜早破、早产、羊水性状、新生儿感染等的关系。
1 材料与方法
1.1 检测对象 1997年6～12月在北京天坛医院产科分娩的产妇304例，产妇年龄为20～38岁，平均年龄为26岁。孕周为36～42周。其中剖宫产分娩58例，自然分娩246例。产妇无吸烟史及糖尿病史。
1.2 标本的收集 产妇分娩出胎盘后，立即取1.0cm3的胎盘组织，放入装有2ml胎盘运输液的无菌塑料管中，4℃冰箱保存24～48h内送研究室进行胎盘Uu培养及PCR检测。
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1.3 胎盘标本的Uu分离培养 将胎盘标本放入无菌玻璃研磨器中研磨后，吸取0、2ml匀浆加入1.8ml Uu液体培养基(本室自配)后，再进行一次10倍稀释。将此两个稀释度的试管置37℃孵育18～48h,当培养基逐渐由黄色变为粉红色时,将其转种于Uu固体培养基,37℃孵育24～48h,观察菌落生长情况。Uu菌落为黄褐色、圆形或不太规则的圆形,大小不等,内部有布纹样结构,有的菌落周围可见很薄的透明区环绕,似煎蛋样。出现Uu菌落者为Uu阳性,未见菌落者为阴性。
1.4 胎盘Uu培养液的PCR检测 采用Cybersyn公司提供的U4、U5两条引物，引物核酸序列如下：
U4：5-CAA TCT GCT CGT GAA GTA TTA C-3
U5：5-ACG ACG TCC ATA AGC AAC T-3
PCR循环程序为：95℃预变性5min后，进行95℃变性1min、55℃复性1min、72℃延伸1min，共35个循环后，72℃延伸7min。TaqDNA聚合酶、dNTP等由华美生物工程公司提供，以U8标准株为阳性对照模板(首都儿科研究所)，对116例胎盘培养液进行PCR检测，其阳性扩增产物应为429bp[1]。
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2 结果
2.1 Uu培养结果 304例胎盘标本中，93例分离培养出Uu，阳性率为30.59%。Uu阳性的胎盘中，剖宫产占15%，Uu阴性的胎盘中，剖宫产占20%，自然分娩和剖宫产之Uu感染率无显著性差异(P>0.05)。
2.2 PCR灵敏度试验 采用本实验所用PCR系统对U8标准菌株进行检测，U8标准菌株培养物变色单位(CCU)为10-4，对其进行10-1、10-2、10-3、10-4稀释，用此PCR法可检测出10-3稀释度的U8培养液。
2.3 PCR检测胎盘培养液的Uu 用PCR法共检测胎盘标本116例，其中Uu阳性者89例(含1例培养过程中有污染标本)，检测阴性标本27例。
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2.5 妊娠结果 随机取前155例孕妇进行临床观察，其中胎盘Uu培养阳性组53例,阴性组102例。
2.5.1 胎膜早破 胎膜在产程开始之前破裂者，称为胎膜早破。本组病例中胎膜早破18例，其中Uu阳性12例，占Uu阳性组22.64%，含剖宫产6例。Uu阴性6例，占Uu阴性组5.88%。两组相比有极其显著性差异(P<0.01)。
2.5.2 羊水性状 155例中有29例羊水呈黄绿色或混有胎粪。Uu阳性组占13例(24.53%)，Uu阴性组占16例(15.69%)，两者无显著性差异(P>0.05)。
2.5.3 早产 妊娠在28～37周之间终止者为早产。本组病例共有早产16例，Uu阳性组9例(17%)，阴性组7例(6.86%)，两组差异无显著性(P>0.05)。
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2.5.4 新生儿感染 对出生42天的新生儿进行随访，Uu阳性组共随访44例，有各种感染者8例，占18.18%。其中生后不明原因发热2例，体温37.5～38.5℃，持续48h以上；脐炎1例；生后20天左右患新生儿肺炎3例，均入院治疗7～10天好转；上呼吸道感染1例；新生儿重度黄染1例，总胆红素366μmol/L，20天后好转。阴性组随访83例，有各种感染者4例，占4.82%。其中发热1例、上感1例、肺炎1例、新生儿黄疸1例。Uu阳性组与阴性组感染率相比有显著性差异(P<0.05)。
另外，Uu阳性组还有生后42天内发育营养差、生长缓慢者2例；多发畸形1例，表现为狼咽、睾丸未降、反应低下、不能吸吮等。阴性组未出现此种病例。
3 讨论与结论
Uu被认为是引起妊娠感染的病因之一，可导致不良的妊娠结局。国外报道，Uu在胎盘中的出现与胎膜早破、自然流产、早产、低出生体重、宫内发育迟缓及围产期发病率和死亡率有关[2]。
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3.1 胎盘Uu感染的检测 本组胎盘标本Uu感染率为30.59%，与我们以往所测胎盘Uu阳性率[3]及国外报道胎盘Uu感染率基本相符。
传统的Uu检测方法为Uu培养法，Uu在液体培养基中生长速度较快，一般在48h内就可发生颜色改变，但Uu的阳性诊断要以看到Uu菌落为准，Uu在固体培养基上生长的菌落不易观察，且受液体培养时间及Uu生长的速度的影响较大，故有些标本较难鉴定。
本实验所用PCR法参考了国外文献，反复摸索条件，建立了较稳定的PCR检测Uu的方法。此方法的敏感性、特异性均可。除1例污染标本PCR检测出Uu外，其余PCR检测阳性，Uu胎盘培养均阳性。2例胎盘培养阳性的标本PCR未测出Uu，考虑为标本处理不够、DNA模板不能充分暴露所致。
由于本PCR法检测的Uu阳性率与培养法基本相符，借鉴这两种方法的优点，建议在进行组织培养检测时，采用Uu液体培养法与PCR法结合的方法，这样可以既迅速又准确地作出是否存在Uu感染的判断，以指导临床治疗。
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3.2 Uu感染与新生儿宫内感染 本组病例中剖宫产与自然分娩者的胎盘Uu阳性率之间无明显差异，与以往实验结果相同，支持分娩时产道污染对胎盘Uu感染不起决定作用，大多数胎盘在宫内已感染Uu的观点，即Uu在分娩前可通过胎盘屏障感染胎盘和胎儿。
3.3 胎盘Uu感染与胎膜早破 国外报道，胎膜早破和分娩间隔时间不同，胎膜的支原体分离率也不同。分娩前破膜48h以上的胎盘，其Uu的分离率为67%；分娩前24～48h内破膜的胎盘Uu分离率为23%(P<0.001)；而在破膜24h内分娩的胎盘的支原体分离率只有10%(P<0.001)[2]。
本组病例Uu阳性组之胎膜早破发生率较Uu阴性组明显升高(P<0.01)，说明胎膜早破大大增加了Uu由产道上行性感染的机会，也直接增加了Uu感染胎儿的机会。但Uu阳性组12例胎膜早破病例中有6例为破膜后立即行剖宫产手术者，不排除Uu已在宫内感染，且对胎膜起了一定的破坏作用。
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3.4 胎盘Uu感染与新生儿感染 国外近10年的报道表明，Uu是重要的新生儿病原，尤其在血流、呼吸道和中枢神经系统的感染较为突出。国外已从患肺炎的新生儿的血液、肺组织、肺分泌物、胸膜液等分离出Uu。
Stagno[4]等对生后2～12周的新生儿肺炎患者的鼻咽吸出物进行Uu培养，38例中有8例Uu阳性，阳性率21%，正常对照组新生儿49例中2例Uu阳性，阳性率4%，两组差异较大。
Quinn PA[5]等对正常新生儿和呼吸系统疾病患儿用代谢抑制试验进行Uu抗体检测。正常组Uu阳性率2.6%(滴度≥1∶32为阳性)，呼吸道感染组Uu阳性率55.6%(P<0.01)。
本研究Uu阳性患儿新生儿感染率较Uu阴性组为高，且发现2例生后42天内发育营养不良、生长缓慢病例及1例多发畸形均在Uu阳性组，说明胎盘Uu感染对新生儿可产生一定的不良影响，可通过对感染新生儿进行血清学和培养方面的检测，来进一步证明。
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3.5 胎盘Uu感染与早产 国外报道，随胎儿胎龄的增加，Uu在胎盘中的分离逐渐减少。Embree研究表明，孕38周以下分娩的胎盘Uu分离率为32%，对照组大于38周的分离率为9%(P<0.001)。还有人报道孕龄28周以下新生儿80%Uu阳性，28～36周17.9%Uu阳性，因此认为Uu分离率与孕龄有密切关系。本研究中Uu阳性组早产儿占17%，阴性组占6.86%，阳性组比阴性组高，但无显著性差异，考虑为病例较少的缘故。
此外，Uu感染与羊水性状、产妇年龄、新儿性别等无明显关系。
3.6 本研究表明，胎盘Uu感染(上行或/和下行)的存在，与胎膜早破、新生儿感染、早产等有一定相关性。为了搞好优生优育， 特别是在治疗新生儿感染时，一定要注意Uu感染的存在。可以用Uu液体培养加PCR的方法，对Uu感染进行快速有效的早期诊断，以指导临床治疗。
孙红妹(首都儿科研究所北京，100020)
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郭章溉(首都儿科研究所北京，100020)
吴广琴(北京天坛医院)
张景华(北京天坛医院)
王斌(首都儿科研究所北京，100020)
谢晓桦(首都儿科研究所北京，100020)
任桂珍(首都儿科研究所北京，100020)
陈树新(首都儿科研究所北京，100020)
参考文献
1，Blanchard A,Hentschel J,Duffy L,et al.Detection of Ureaplasma urealyticum by PCR in theuregenital tract of adults,in amniotic fluid,and in the respiratory tract of newborns[J].Clin Infect Dis,1993，17 (Suppl 1)∶S148.
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2，Embree JE,Krause VW,Embil JA, et al.Placental infection with Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum：Clinical correlation[J].Obstet Gynecol,1980,56∶475.
3，孙红妹，郭章溉，张景华，等.胎盘解脲支原体感染与新生儿出生体重的关系[J].中华妇产科杂志，1995，30(6)∶340.
4，Stagno S,Brasfield DM,Brown MB,et al.Infant pneumonitis associated with Cytomegaalovirus,Chlamydia,Pneeummocystis,and Ureaplasma：a prospective study[J].Pediatrics,1981,68(3)∶322.
5，Quinn PA,Rubin S,Li HCS,et al.Serological evidence of Ureaplasm urealyticum infection in neonatal respiratory disease[J].The Yale J Biol Med,1983,56(5-6),565., http://www.100md.com