胃癌组织蛋白酶D表达的免疫组织化学研究
作者：蒋新卫 郭钟行 江文浩
单位：蒋新卫 江文浩(苏州市第二人民医院普外科，苏州，215002)；郭钟行(苏州医学院附属一院普外科)
关键词：胃癌；组织蛋白酶D；免疫组织化学
摘要 目的 研究胃癌组织中组织蛋白酶D 摘要 目的 研究胃癌组织中组织蛋白酶D(CD)的表达并探讨CD与胃癌生物学行为的相关性。方法 运用S-P免疫组化方法检测50例胃癌组织CD的表达，并分析与胃癌临床因素、临床病理分期间的关系。结果 CD阳性表达率72%(36/50)，CD阳性表达率在低分化组(23/26)明显高于分化组(13/24)；浆膜侵犯组(20/22)明显高于未侵犯组(16/28)；淋巴结转移阳性组(21/24)明显高于淋巴结转移阴性组(15/26)，且随着病理分期的提高，CD阳性率有逐渐升高趋势。结论 CD的表达与胃癌的分化程度、浆膜侵犯、淋巴结转移相关，CD是评估胃癌预后的有效参数。
, 百拇医药
中图法分类号 R735.02
The Immunohistochemistry Study of the Expression of Cathepsin D in Gastric Carcinoma
Jiang Xinwei, Guo Zhongxing, Jiang Wenhao, et al
(Department of General Surgery,Suzhou No.2 People's Hospital,Suzhou,215004)
Abstract Objective To study the expression of cathepsin D(CD) in gastric carcinoma and the relativity between CD and biological benhavior of gastric carcinoma.Methods To investigate expression of CD in fifty specimens resected from patients with gastric carcinoma by immunohistochemical S-P method,to analysis the relationship between the expression of CD and the clinic factors and pathologic stages.Results The positive expression rate of CD was 72% (36/50).The CD positivity in low differentiation group (23/26) was significantly higher than that in high differentiation group (13/24),the serosai invasion group (20/22) significantly higher than that in no invasion group (16/28),the lymphy node metastasis group (21/24) significantly higher than that in no lymphy node metastasis group (15/26) (P<0.05).Furthermore,the CD postivity was gradually increasing in accordance with pathologic stage.Conclusions The expression of CD is associated with the differentiation,serosal invasion and lympy node metastasis in gastric carcinoma.CD is a new efficient parameter for evaluation of the prognosis of patients with gastric carcinoma.
, 百拇医药
Key words gastric carcinoma;cathepsin D;immunohistochemistry
有关乳癌、结肠癌、肝癌等研究已表明，组织蛋白酶D(CD)的含量与它们的生物学行为密切相关。胃癌占恶性肿瘤死亡率的首位，而国内有关胃癌的CD表达的研究未见报道。本研究通过检测50例胃癌CD的表达，旨在探讨CD与胃癌生物学行为间的关系。结果报道于下。
1 材料与方法
1.1 标本 收集1997～1999年3月于我院胃癌根治性或姑息性切除术标本，病理证实为原发性胃癌50例。其中男31例，女19例，年龄45～78岁，中位年龄63岁。按国际抗癌联盟的胃癌临床病理分期(1988年)：Ⅰ期3例；Ⅱ期22例；Ⅲ期20例；Ⅳ期5例。所有标本取自原发灶，经10%福尔马林固定，石蜡包埋。
1.2 试剂 兔抗人CD多克隆抗体(美国Sigma公司)及S-P试剂盒(美国Maxim公司)购自福州迈新生物技术开发公司。
, 百拇医药
1.3 染色 按S-P试剂盒说明操作，以PBS代替一抗作阴性对照，以己知乳癌切片作阳性对照，设立10例正常胃粘膜作为正常对照组。显微镜下，棕黄色为阳性染色。
1.4 结果判断 根据切片中染色细胞数占全部肿瘤细胞的比例及染色强度分为：(1)(-)：无阳性细胞;(2)(+)：阳性细胞<20%;(3)(
)：阳性细胞占21%～50%、染色较深;(4)(
)：阳性细胞>50%，呈深棕色。将(-)、(+)判为CD阴性表达；()、()判为CD阳性表达。结果采用x2检验，α为0.05或0.01。
, 百拇医药
2 结果
2.1 正常对照组 正常胃粘膜上皮细胞呈弱阳性染色。
2.2 胃癌原发灶 CD主要在癌细胞、间质炎症细胞、某些血管内皮细胞浆内表达。且癌巢边缘癌细胞表达强于中央区。50例胃癌中，36例(72%)阳性表达。CD表达与胃癌分化程度、淋巴结转移、浆膜侵犯相关(P<0.05)，与生长方式无关(P>0.05)见表1；CD与各病理分期无关(P>0.05)，但随着分期的提高，表达有升高趋势见表2。
表1 CD表达与各临床病理因素间关系
因素
n
CD表达率(%)
P值
, 百拇医药
阳性(36)
阴性(14)
分化程度
分化
24
13(54.2)
11(45.8)
低分化
26
23(88.5)
3(11.5)
<0.05
浆膜侵犯
, 百拇医药
阳性
22
20(90.9)
2( 9.1)
阴性
28
16(57.1)
12(42.9)
<0.05
淋巴结转移
阳性
24
21(87.5)
, 百拇医药
3(12.5)
阴性
26
15(57.7)
11(42.3)
<0.05
生长方式
膨胀型
10
6(60.0)
4(40.0)
浸润型
40
, 百拇医药
30(75.0)
10(25.0)
>0.05
表2 CD表达与临床病理分期间关系
病理分期
n
CD表达率(%)
P值
阳性(36)
阴性(14)
Ⅰ期
3
, 百拇医药 1(33.3)
2(66.7)
Ⅱ期
22
15(68.2)
7(31.8)
>0.05
Ⅲ期
20
16(80.0)
4(20.2)
Ⅳ期
5
, http://www.100md.com
4(90.0)
1(10.0)
3 讨论
恶性肿瘤细胞产生多种蛋白水解酶，降解细胞外基质及基底膜，为其生长及转移提供空间及通道。CD于1979年由Westly等[1]首先描述，由定位于染色体11P15基因编码，是存于人体溶酶体的天冬氨酰蛋白酶原的激活形式，因此，在人体正常细胞中呈广泛低浓度分布。CD一方面可以通过水解作用降解细胞外基质[2]，另一方面可以激活组织蛋白酶B，再激活尿激酶型纤溶酶原激活因子(UPA)，与UPA受体结合，调节肿瘤相关蛋白分解的作用[3]。另外，CD还可以作为丝裂原，促进肿瘤细胞的增殖。Rochefort[1]概括CD的功能为(1)作为雌激素依赖的肿瘤标志物；(2)作为增生因子，通过胰岛素样增因子-Ⅱ受体起作用；(3)作为蛋白酶，降解细胞的基底膜；增加肽增生因子的合成和释放。
, 百拇医药
Saku等对正常胃粘膜、胃炎、溃疡、肠上皮化生、高中分化腺癌、低分化腺癌等一系列病变进行CD的检测，发现在癌前病变(肠化生)和高中分化腺癌CD表达存在明显缺失，并提出CD的缺失可能是和细胞内某些蛋白的的合成在恶性肿瘤的早期阶段被抑制有关。
我们的研究结果显示，胃癌组织中CD的表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移、浆膜侵犯相关，与生长方式无关。与Matsuo等[4]报告相符。我们还发现，癌巢边缘癌细胞的CD表达明显强于中央区，这种表达方式特征可能与肿瘤组织的进度及淋巴结转移相关。显然，CD的表达与临床病理分期无关，但随着病理分期的提高，其表达率是逐渐上升的，因此，我们推测，在更大样本量的病例研究中也许会有有意义的发现。因此胃癌细胞CD与胃癌生物行为相关，可作为胃癌的预后指标。
关于CD阳性间质炎细胞(主要是巨噬细胞、多核白细胞等)作用，目前看法不一致。有人认为，此类炎质症细胞具有抗肿瘤作用。Davies MC[5]认为这类炎质症细胞内的组织蛋白酶可以破坏正常组织结构，从而促进肿瘤的转移。Matsuo[4]研究显示，炎症细胞CD的表达与胃癌分化程度、淋巴结转移、浸润深度无关。关于这类间质炎症细胞是促进肿瘤转移，还是具有抗肿瘤的作用，是否类似于它们在炎症过程中两种作用共同存在，值得进一步探讨。参考文献
, 百拇医药
1，Westley B,Rochefort H.Estradiol induced protein in the MCF-7 hurman breast carcinoma cell line.Biophys Res Commun,1997,90∶410
2，Carlod PS,Norman HA,Darmender P,et al.Prostate cancer progression,metastasis,and gene expression in transgenic mice.Canncer Res,1997，57∶900
3，Ossowski L,Clunie G,Masucci MT,et al.In vivo paracrine interaction between urokinase and its recepter:effect on tumor cell invasion.J Cell Biol,1991,115∶1107
, 百拇医药
4，Matsuo K,kobayashi I,Tsukuba T,et al.Immunohistochemcal Iocalization of cathepsin Dand E in human gastric cancer,Hum Patho,1996,27(2)∶184
5，Davies MC,Barretl AJ,Travis J,et al.The degradation of human glomerular basement membrane with purified lysosomal proteinase:Evidence for the pathogenic role of the polymor phonuclear Ieucocgte in glomerulonephritis.Clin Sci Mol Med,1978,57∶233
2000年5月8日收稿, http://www.100md.com
单位：蒋新卫 江文浩(苏州市第二人民医院普外科，苏州，215002)；郭钟行(苏州医学院附属一院普外科)
关键词：胃癌；组织蛋白酶D；免疫组织化学
摘要 目的 研究胃癌组织中组织蛋白酶D 摘要 目的 研究胃癌组织中组织蛋白酶D(CD)的表达并探讨CD与胃癌生物学行为的相关性。方法 运用S-P免疫组化方法检测50例胃癌组织CD的表达，并分析与胃癌临床因素、临床病理分期间的关系。结果 CD阳性表达率72%(36/50)，CD阳性表达率在低分化组(23/26)明显高于分化组(13/24)；浆膜侵犯组(20/22)明显高于未侵犯组(16/28)；淋巴结转移阳性组(21/24)明显高于淋巴结转移阴性组(15/26)，且随着病理分期的提高，CD阳性率有逐渐升高趋势。结论 CD的表达与胃癌的分化程度、浆膜侵犯、淋巴结转移相关，CD是评估胃癌预后的有效参数。
, 百拇医药
中图法分类号 R735.02
The Immunohistochemistry Study of the Expression of Cathepsin D in Gastric Carcinoma
Jiang Xinwei, Guo Zhongxing, Jiang Wenhao, et al
(Department of General Surgery,Suzhou No.2 People's Hospital,Suzhou,215004)
Abstract Objective To study the expression of cathepsin D(CD) in gastric carcinoma and the relativity between CD and biological benhavior of gastric carcinoma.Methods To investigate expression of CD in fifty specimens resected from patients with gastric carcinoma by immunohistochemical S-P method,to analysis the relationship between the expression of CD and the clinic factors and pathologic stages.Results The positive expression rate of CD was 72% (36/50).The CD positivity in low differentiation group (23/26) was significantly higher than that in high differentiation group (13/24),the serosai invasion group (20/22) significantly higher than that in no invasion group (16/28),the lymphy node metastasis group (21/24) significantly higher than that in no lymphy node metastasis group (15/26) (P<0.05).Furthermore,the CD postivity was gradually increasing in accordance with pathologic stage.Conclusions The expression of CD is associated with the differentiation,serosal invasion and lympy node metastasis in gastric carcinoma.CD is a new efficient parameter for evaluation of the prognosis of patients with gastric carcinoma.
, 百拇医药
Key words gastric carcinoma;cathepsin D;immunohistochemistry
有关乳癌、结肠癌、肝癌等研究已表明，组织蛋白酶D(CD)的含量与它们的生物学行为密切相关。胃癌占恶性肿瘤死亡率的首位，而国内有关胃癌的CD表达的研究未见报道。本研究通过检测50例胃癌CD的表达，旨在探讨CD与胃癌生物学行为间的关系。结果报道于下。
1 材料与方法
1.1 标本 收集1997～1999年3月于我院胃癌根治性或姑息性切除术标本，病理证实为原发性胃癌50例。其中男31例，女19例，年龄45～78岁，中位年龄63岁。按国际抗癌联盟的胃癌临床病理分期(1988年)：Ⅰ期3例；Ⅱ期22例；Ⅲ期20例；Ⅳ期5例。所有标本取自原发灶，经10%福尔马林固定，石蜡包埋。
1.2 试剂 兔抗人CD多克隆抗体(美国Sigma公司)及S-P试剂盒(美国Maxim公司)购自福州迈新生物技术开发公司。
, 百拇医药
1.3 染色 按S-P试剂盒说明操作，以PBS代替一抗作阴性对照，以己知乳癌切片作阳性对照，设立10例正常胃粘膜作为正常对照组。显微镜下，棕黄色为阳性染色。
1.4 结果判断 根据切片中染色细胞数占全部肿瘤细胞的比例及染色强度分为：(1)(-)：无阳性细胞;(2)(+)：阳性细胞<20%;(3)(
)：阳性细胞占21%～50%、染色较深;(4)()：阳性细胞>50%，呈深棕色。将(-)、(+)判为CD阴性表达；()、()判为CD阳性表达。结果采用x2检验，α为0.05或0.01。, 百拇医药
2 结果
2.1 正常对照组 正常胃粘膜上皮细胞呈弱阳性染色。
2.2 胃癌原发灶 CD主要在癌细胞、间质炎症细胞、某些血管内皮细胞浆内表达。且癌巢边缘癌细胞表达强于中央区。50例胃癌中，36例(72%)阳性表达。CD表达与胃癌分化程度、淋巴结转移、浆膜侵犯相关(P<0.05)，与生长方式无关(P>0.05)见表1；CD与各病理分期无关(P>0.05)，但随着分期的提高，表达有升高趋势见表2。
表1 CD表达与各临床病理因素间关系
因素
n
CD表达率(%)
P值
, 百拇医药
阳性(36)
阴性(14)
分化程度
分化
24
13(54.2)
11(45.8)
低分化
26
23(88.5)
3(11.5)
<0.05
浆膜侵犯
, 百拇医药
阳性
22
20(90.9)
2( 9.1)
阴性
28
16(57.1)
12(42.9)
<0.05
淋巴结转移
阳性
24
21(87.5)
, 百拇医药
3(12.5)
阴性
26
15(57.7)
11(42.3)
<0.05
生长方式
膨胀型
10
6(60.0)
4(40.0)
浸润型
40
, 百拇医药
30(75.0)
10(25.0)
>0.05
表2 CD表达与临床病理分期间关系
病理分期
n
CD表达率(%)
P值
阳性(36)
阴性(14)
Ⅰ期
3
, 百拇医药 1(33.3)
2(66.7)
Ⅱ期
22
15(68.2)
7(31.8)
>0.05
Ⅲ期
20
16(80.0)
4(20.2)
Ⅳ期
5
, http://www.100md.com
4(90.0)
1(10.0)
3 讨论
恶性肿瘤细胞产生多种蛋白水解酶，降解细胞外基质及基底膜，为其生长及转移提供空间及通道。CD于1979年由Westly等[1]首先描述，由定位于染色体11P15基因编码，是存于人体溶酶体的天冬氨酰蛋白酶原的激活形式，因此，在人体正常细胞中呈广泛低浓度分布。CD一方面可以通过水解作用降解细胞外基质[2]，另一方面可以激活组织蛋白酶B，再激活尿激酶型纤溶酶原激活因子(UPA)，与UPA受体结合，调节肿瘤相关蛋白分解的作用[3]。另外，CD还可以作为丝裂原，促进肿瘤细胞的增殖。Rochefort[1]概括CD的功能为(1)作为雌激素依赖的肿瘤标志物；(2)作为增生因子，通过胰岛素样增因子-Ⅱ受体起作用；(3)作为蛋白酶，降解细胞的基底膜；增加肽增生因子的合成和释放。
, 百拇医药
Saku等对正常胃粘膜、胃炎、溃疡、肠上皮化生、高中分化腺癌、低分化腺癌等一系列病变进行CD的检测，发现在癌前病变(肠化生)和高中分化腺癌CD表达存在明显缺失，并提出CD的缺失可能是和细胞内某些蛋白的的合成在恶性肿瘤的早期阶段被抑制有关。
我们的研究结果显示，胃癌组织中CD的表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移、浆膜侵犯相关，与生长方式无关。与Matsuo等[4]报告相符。我们还发现，癌巢边缘癌细胞的CD表达明显强于中央区，这种表达方式特征可能与肿瘤组织的进度及淋巴结转移相关。显然，CD的表达与临床病理分期无关，但随着病理分期的提高，其表达率是逐渐上升的，因此，我们推测，在更大样本量的病例研究中也许会有有意义的发现。因此胃癌细胞CD与胃癌生物行为相关，可作为胃癌的预后指标。
关于CD阳性间质炎细胞(主要是巨噬细胞、多核白细胞等)作用，目前看法不一致。有人认为，此类炎质症细胞具有抗肿瘤作用。Davies MC[5]认为这类炎质症细胞内的组织蛋白酶可以破坏正常组织结构，从而促进肿瘤的转移。Matsuo[4]研究显示，炎症细胞CD的表达与胃癌分化程度、淋巴结转移、浸润深度无关。关于这类间质炎症细胞是促进肿瘤转移，还是具有抗肿瘤的作用，是否类似于它们在炎症过程中两种作用共同存在，值得进一步探讨。参考文献
, 百拇医药
1，Westley B,Rochefort H.Estradiol induced protein in the MCF-7 hurman breast carcinoma cell line.Biophys Res Commun,1997,90∶410
2，Carlod PS,Norman HA,Darmender P,et al.Prostate cancer progression,metastasis,and gene expression in transgenic mice.Canncer Res,1997，57∶900
3，Ossowski L,Clunie G,Masucci MT,et al.In vivo paracrine interaction between urokinase and its recepter:effect on tumor cell invasion.J Cell Biol,1991,115∶1107
, 百拇医药
4，Matsuo K,kobayashi I,Tsukuba T,et al.Immunohistochemcal Iocalization of cathepsin Dand E in human gastric cancer,Hum Patho,1996,27(2)∶184
5，Davies MC,Barretl AJ,Travis J,et al.The degradation of human glomerular basement membrane with purified lysosomal proteinase:Evidence for the pathogenic role of the polymor phonuclear Ieucocgte in glomerulonephritis.Clin Sci Mol Med,1978,57∶233
2000年5月8日收稿, http://www.100md.com