糖皮质激素受体的高效液相分离特征
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第六届受体和信
作者：田文 刘志民 张鸿均
单位：田文(中国人民解放军第161医院内分泌科， 湖北 武汉 430010)；刘志民(第二军医大学长征医院， 上海 200003)；张鸿均(上海生物化学研究所国家实验室， 上海 200032)
关键词：
中国病理生理杂志0010253
目的：探讨糖皮质激素低亲和力受体的理化特征。方法：应用6-12周龄雄性SD大鼠肝胞液为标本，要求蛋白质浓度为4～8 mg/mL,在0～4℃，用[1，2，4，6，7 3 ?H]地塞米松(英国放化中心产品，3.18 TBq,318.2×1010 Bq/mmol,放化纯度>97%)，配制成10 nmol/L, 100 nmol/L(冷标法)，标记大鼠肝胞液中糖皮质激素受体，0～4℃放置3～4 h，用活性炭Dcc法吸附，离心，取其上清液，测其counts.min-1值。通过高压液相疏水作用(层析柱Synchropak propyl 100×4.6 mmID)，在不同温度分段收集分离样品，并迅速测其counts.min-1值，重复3次上述分离，并分段收集样品，测其counts.min-1值。达到洗脱标记蛋白峰稳定性及重复性好。结果：我们进行动态观察，发现[3H]Dex为10 nmol/L时，用高压液相疏水层析(HPHIC)洗脱时，只出现一个标记蛋白峰，不管温度怎样变化，在[3?H]Dex结合测定时只有一个单峰，为糖皮质激素高亲和力受体(GRH)峰。我们应用[3H]Dex浓度为100 nmol/L的肝胞液进行HPHIC洗脱动态观察；当温度为25～30℃(正常室温)，即可出现两个洗脱标记蛋白峰，但如果大鼠肝胞液0～4℃进行洗脱时，只出现一个单峰，此峰位与10 nmol/L[3?H]Dex大鼠肝胞液标记蛋白峰位置不同。结论：根据徐仁宝等关于糖皮质激素受体的基础研究，应用受体的饱和分析，动力学分析和特异性分析，证实10 nmol/L[3?H]Dex标记大鼠肝胞液的受体为糖皮质激素高亲和力受体，100 nmol/L[3?H]Dex标记大鼠肝胞的受体为糖皮质激素低亲和力受体。以此为依据，应用[3?H]Dex 10 nmol/L和100 nmol/L标记大鼠肝胞液，进行高效液相层分析，可分离出糖皮质激素高、低亲和力受体活性蛋白。冷冻麻醉实践中发现，4℃时，患者外周白细胞糖皮质素受体出现低亲和力现象。本实验也发现糖皮质激素受体HPHIC时分离时出现温度依赖性变化，在4℃ 100 nmol/L[3?H]Dex标记肝胞液GR，在HPHIC层析时出现的标记蛋白蜂可能为糖皮质激素低亲和力受体所致。, 百拇医药
单位：田文(中国人民解放军第161医院内分泌科， 湖北 武汉 430010)；刘志民(第二军医大学长征医院， 上海 200003)；张鸿均(上海生物化学研究所国家实验室， 上海 200032)
关键词：
中国病理生理杂志0010253
目的：探讨糖皮质激素低亲和力受体的理化特征。方法：应用6-12周龄雄性SD大鼠肝胞液为标本，要求蛋白质浓度为4～8 mg/mL,在0～4℃，用[1，2，4，6，7 3 ?H]地塞米松(英国放化中心产品，3.18 TBq,318.2×1010 Bq/mmol,放化纯度>97%)，配制成10 nmol/L, 100 nmol/L(冷标法)，标记大鼠肝胞液中糖皮质激素受体，0～4℃放置3～4 h，用活性炭Dcc法吸附，离心，取其上清液，测其counts.min-1值。通过高压液相疏水作用(层析柱Synchropak propyl 100×4.6 mmID)，在不同温度分段收集分离样品，并迅速测其counts.min-1值，重复3次上述分离，并分段收集样品，测其counts.min-1值。达到洗脱标记蛋白峰稳定性及重复性好。结果：我们进行动态观察，发现[3H]Dex为10 nmol/L时，用高压液相疏水层析(HPHIC)洗脱时，只出现一个标记蛋白峰，不管温度怎样变化，在[3?H]Dex结合测定时只有一个单峰，为糖皮质激素高亲和力受体(GRH)峰。我们应用[3H]Dex浓度为100 nmol/L的肝胞液进行HPHIC洗脱动态观察；当温度为25～30℃(正常室温)，即可出现两个洗脱标记蛋白峰，但如果大鼠肝胞液0～4℃进行洗脱时，只出现一个单峰，此峰位与10 nmol/L[3?H]Dex大鼠肝胞液标记蛋白峰位置不同。结论：根据徐仁宝等关于糖皮质激素受体的基础研究，应用受体的饱和分析，动力学分析和特异性分析，证实10 nmol/L[3?H]Dex标记大鼠肝胞液的受体为糖皮质激素高亲和力受体，100 nmol/L[3?H]Dex标记大鼠肝胞的受体为糖皮质激素低亲和力受体。以此为依据，应用[3?H]Dex 10 nmol/L和100 nmol/L标记大鼠肝胞液，进行高效液相层分析，可分离出糖皮质激素高、低亲和力受体活性蛋白。冷冻麻醉实践中发现，4℃时，患者外周白细胞糖皮质素受体出现低亲和力现象。本实验也发现糖皮质激素受体HPHIC时分离时出现温度依赖性变化，在4℃ 100 nmol/L[3?H]Dex标记肝胞液GR，在HPHIC层析时出现的标记蛋白蜂可能为糖皮质激素低亲和力受体所致。, 百拇医药