人胚胎肝脏褪黑素受体的鉴定
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第六届受体和信
作者：沈玉美 陆祖谦 何金 刘会敏 赵瑛 刘志民 彭树勋
单位：沈玉美 陆祖谦 何金 刘会敏 赵瑛 刘志民(第二军医大学长征医院内分泌科，上海 200003)；彭树勋(香港大学医学院生理系)
关键词：
中国病理生理杂志0010265
目的：应用免疫组织化和核酸原位杂交技术检测人胚胎肝脏的MEL受体及其亚型分布，为进一步研究MEL对肝脏功能的调节作用提供证据。方法：1.研究对象：中期水囊引产人胎儿，取出心脏和主动脉，立即用4%多聚甲醛+0.1%DEPC固定，石蜡包埋组织，4℃冰箱贮存待检测。2.MEL探针制备：培养含有MEL1A或MEL1B受体质粒的大肠杆菌，抽提质粒，酶切，地高辛标记探针(宝灵曼公司)。3.核酸分子原位杂交：原位杂交检测试剂盒、APES、Poly-L-Lysine(多聚赖氨酸)和专用盖玻片均购自武汉博士德生物工程公司、APES与Poly-L-Lysine 联合应用处理载玻片。按原位杂交试剂盒的说明进行检测。实验设不加探针为阴性对照。4.免疫组织化学法：一抗为鼠抗人MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体，由香港大学生理系彭树勋教授馈赠。免疫组化试剂盒购自福建迈新公司。MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体的稀释浓度为1∶75，以缓冲液代替第一抗体作为阴性对照，下丘脑组织作为阳性对照。结果：1.肝脏MEL1A和MEL1B受体蛋白的检测：肝脏免疫组织化学染色结果显示，在人胚胎肝脏细胞存在MEL1A和MEL1B受体蛋白，分布于细胞膜和胞核，但以胞膜为主。2.肝脏MEL1A受体和MEL1B受体mRNA的检测：肝脏的核酸分子原位杂交结果显示，在肝细胞的胞核和胞浆均存在MEL1A和 MEL1B受体mRNA的表达，但以胞核为主。结论：肝细胞的胞膜和胞核存在MEL1A和MEL1B受体蛋白，同时在胞浆和胞核检测到MEL1A受体和MEL1A受体mRNA的表达，提示肝细胞存在MEL1A和MEL1B受体，从而证实了肝脏是MEL作用的外周靶器官。, 百拇医药
单位：沈玉美 陆祖谦 何金 刘会敏 赵瑛 刘志民(第二军医大学长征医院内分泌科，上海 200003)；彭树勋(香港大学医学院生理系)
关键词：
中国病理生理杂志0010265
目的：应用免疫组织化和核酸原位杂交技术检测人胚胎肝脏的MEL受体及其亚型分布，为进一步研究MEL对肝脏功能的调节作用提供证据。方法：1.研究对象：中期水囊引产人胎儿，取出心脏和主动脉，立即用4%多聚甲醛+0.1%DEPC固定，石蜡包埋组织，4℃冰箱贮存待检测。2.MEL探针制备：培养含有MEL1A或MEL1B受体质粒的大肠杆菌，抽提质粒，酶切，地高辛标记探针(宝灵曼公司)。3.核酸分子原位杂交：原位杂交检测试剂盒、APES、Poly-L-Lysine(多聚赖氨酸)和专用盖玻片均购自武汉博士德生物工程公司、APES与Poly-L-Lysine 联合应用处理载玻片。按原位杂交试剂盒的说明进行检测。实验设不加探针为阴性对照。4.免疫组织化学法：一抗为鼠抗人MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体，由香港大学生理系彭树勋教授馈赠。免疫组化试剂盒购自福建迈新公司。MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体的稀释浓度为1∶75，以缓冲液代替第一抗体作为阴性对照，下丘脑组织作为阳性对照。结果：1.肝脏MEL1A和MEL1B受体蛋白的检测：肝脏免疫组织化学染色结果显示，在人胚胎肝脏细胞存在MEL1A和MEL1B受体蛋白，分布于细胞膜和胞核，但以胞膜为主。2.肝脏MEL1A受体和MEL1B受体mRNA的检测：肝脏的核酸分子原位杂交结果显示，在肝细胞的胞核和胞浆均存在MEL1A和 MEL1B受体mRNA的表达，但以胞核为主。结论：肝细胞的胞膜和胞核存在MEL1A和MEL1B受体蛋白，同时在胞浆和胞核检测到MEL1A受体和MEL1A受体mRNA的表达，提示肝细胞存在MEL1A和MEL1B受体，从而证实了肝脏是MEL作用的外周靶器官。, 百拇医药