抗独特型抗体对肿瘤的免疫治疗
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第七届肿瘤和第
作者：孙去病
单位：湖南科大学肿瘤研究所，湖南 长沙410078
关键词：
中国病理生理杂志0010234
1974年Jerne提出网络学说以来，以独特型(Id)、抗独特型(A-Id)、抗抗独特型调节网络进行了大量的研究，其中最受关注的是处于正负调节枢纽的Id环节，Id亦为抗原决定簇，为V基因编码的抗体和TCR表型。根据这一学说认为外在抗原为抗体中Id和T细胞受体所模仿，抗原注射于机体所产生的抗体为Abl,而Abl本身具有免疫原性产生A-Id抗体(Ab2)，有一部分Ab2在三度空间模仿外在抗原，称Ab2β，而Ab2β又可在免疫系统中诱导Ab3等，形成免疫网络。有人测定Ab2β与外在抗原在化学结构上并不相同，故称为功能性模仿(Functional mimicry)，但也有人研究CEA A-Id抗体时指出，在鉴定抗体的CDR区时，发现与CEA多肽同源，所以抗原-Id-A-Id可比喻为锁与钥匙的关系。应用Ab2或Ab1作疫苗，由于不是纯化的肿瘤抗原，制备较简单、经济，易于推广，其Id为蛋白质，是T依赖性抗原，可在免疫抑制或免疫功能障碍的机体产生反应。近年来应用分子生物学的方法制备了基因工程疫苗，有应用抗P53、抗CEA和抗卵巢癌的Id或A-Id抗体，并克隆出VL和VH基因，制备了单链和嵌合抗体，甚至应用V基因中CDR编码的多肽序列作为疫苗，得到抗肿瘤的效果。目前尚未见到人源化A-Id抗体作为疫苗的报导。在动物实验上已证明肿瘤A-Id疫苗能抑制肿瘤细胞增殖。应用SV-40诱导肿瘤的荷瘤鼠接种相应疫苗后，动物的生存期延长。小鼠白血病应用A-Id疫苗后，动物产生迟发性变态反应，肿瘤生长受抑制。新近报导小鼠B细胞淋巴瘤用环磷酰胺和A-Id疫苗联用，能明显延长动物生命。有人将小鼠大肠癌CEA阴性细胞株MC-38通过转基因形成CEA阳性细胞。小鼠用CEA A-Id疫苗进行免疫，再用MC-38 CEA攻击，发现CEA阳性肿瘤细胞接种后在10天内坏死，而阴性株，肿瘤生长并在22天内死亡。关于Id和A-Id疫苗对肿瘤生长抑制的机制，其中体液免疫主要表现为诱导Ab3，临床上用抗人T淋巴瘤A-Id疫苗，注射四次后，诱导了Ab3，并能抑制Ab2对Ab1的反应。为了证明Ab3能否对淋巴瘤反应，用Ab2做亲和层析柱，纯化Ab3，发现Ab3能与肿瘤细胞反应，为IgG，对非淋巴瘤反应阴性。这种现象亦见于大肠癌A-Id疫苗，Ab3能与肠癌细胞反应，在SDS-PAGE反应体系中Ab3与Ab1沉带是相同的。我室用鼻咽癌A-Id疫苗诱导的Ab3，对鼻咽癌细胞的免疫组化反应也是和Ab1的反应图像相同。Ab3杀伤肿瘤细胞主要依赖于ADCC反应。在细胞免疫方面，用鼻咽癌A-Id疫苗免疫小鼠，再用鼻咽癌细胞攻击，小鼠产生DTH反应，且可被动转移。应用大肠癌和T淋巴瘤A-Id疫苗治疗病人后取其PBMC在体外用相应疫苗处理，可产生细胞增殖反应，这种现象亦见于VH或VL中CDR的多肽疫苗，增殖的细胞为CD4+，占90%。而无关抗体和治疗前病人的PBMC无反应。增殖效应细胞能杀伤靶细胞。应用基因工程制备的抗突变型P53的VL-CDR3段多肽，免疫小鼠后取其脾细胞测定对靶细胞的杀伤活性，发现效靶比在1∶50-1∶100时具有明显的杀伤活性，而阴性多肽序列无此作用。在治疗前后细胞因子改变的研究中，鼻咽癌病人用A-Id疫苗治疗11例，治疗后有5例TNF升高，10例IFN-γ升高，1例INF-γ降低；血清IL-2水平7例升高，1例下降，且与IFN-γ下降为同一病人，血清的IL-2的含量改变与淋巴细胞IL-2 mRNA表达呈正相关。所以A-Id疫苗所致的T细胞反应，亦可称为抗独特型T细胞反应，疫苗中CDR多肽段，既可作为抗原诱导Ab3，亦可与TCR结合，使其增殖产生细胞免疫反应。关于A-Id疫苗的临床疗效由于所有受试病人全为晚期，疗效难以判断，但有良好反应的报导，如一病人为皮肤大细胞性淋巴瘤，在注射2针疫苗后皮肤病灶开始缩小，当第4针注射后，9个皮肤病灶全部变平、变软，病灶缩小与血液中Ab3滴度升高相平行，活检发现皮肤中只残留少数淋巴瘤细胞，且对Ab1呈阴性反应(抗原调变)。第二疗程的治疗期间肿瘤亦未复发，直至半年后病灶开始增厚，11个月肿瘤复发，而此时血液中Ab3降低。在大肠癌方面，CEA A-Id疫苗亦有明显延长病程的作用，以Ab3抑制Ab2与Ab1作用滴度为标准，分为三个组，抑制10%，20%～50%和>50%，其存活率分别为1.3月、2.4月、5.3月，可见Ab3滴度与患者存活期密切相关。A-Id疫苗问世已20年，而且实践证明对细菌、病毒、寄生虫和肿瘤性疾病有疗效，但至今尚未正式用于临床。其中有三点理由，其一疫苗为鼠源性，引起HAMA反应；其二A-Id疫苗的免疫持续时间不及细菌性疫苗长；其三为主要引起IgM反应。对此有人提出了不同意见：有人通过200例临床试验，认为鼠源性疫苗从未产生严重的反应，肝肾功能未受影响；至于免疫反应虽然不及菌苗那么长，但可长期、多次注射，使血中Ab3水平达到一个高水平，而且Ab3为IgG抗体。总之，A-Id疫苗没有放疗和化疗严重副反应，目前疫苗虽不能治愈肿瘤性疾病，但可得到部分缓解，延长生存期，改善病人生活质量，有安全和费用低廉等特点。, 百拇医药
单位：湖南科大学肿瘤研究所，湖南 长沙410078
关键词：
中国病理生理杂志0010234
1974年Jerne提出网络学说以来，以独特型(Id)、抗独特型(A-Id)、抗抗独特型调节网络进行了大量的研究，其中最受关注的是处于正负调节枢纽的Id环节，Id亦为抗原决定簇，为V基因编码的抗体和TCR表型。根据这一学说认为外在抗原为抗体中Id和T细胞受体所模仿，抗原注射于机体所产生的抗体为Abl,而Abl本身具有免疫原性产生A-Id抗体(Ab2)，有一部分Ab2在三度空间模仿外在抗原，称Ab2β，而Ab2β又可在免疫系统中诱导Ab3等，形成免疫网络。有人测定Ab2β与外在抗原在化学结构上并不相同，故称为功能性模仿(Functional mimicry)，但也有人研究CEA A-Id抗体时指出，在鉴定抗体的CDR区时，发现与CEA多肽同源，所以抗原-Id-A-Id可比喻为锁与钥匙的关系。应用Ab2或Ab1作疫苗，由于不是纯化的肿瘤抗原，制备较简单、经济，易于推广，其Id为蛋白质，是T依赖性抗原，可在免疫抑制或免疫功能障碍的机体产生反应。近年来应用分子生物学的方法制备了基因工程疫苗，有应用抗P53、抗CEA和抗卵巢癌的Id或A-Id抗体，并克隆出VL和VH基因，制备了单链和嵌合抗体，甚至应用V基因中CDR编码的多肽序列作为疫苗，得到抗肿瘤的效果。目前尚未见到人源化A-Id抗体作为疫苗的报导。在动物实验上已证明肿瘤A-Id疫苗能抑制肿瘤细胞增殖。应用SV-40诱导肿瘤的荷瘤鼠接种相应疫苗后，动物的生存期延长。小鼠白血病应用A-Id疫苗后，动物产生迟发性变态反应，肿瘤生长受抑制。新近报导小鼠B细胞淋巴瘤用环磷酰胺和A-Id疫苗联用，能明显延长动物生命。有人将小鼠大肠癌CEA阴性细胞株MC-38通过转基因形成CEA阳性细胞。小鼠用CEA A-Id疫苗进行免疫，再用MC-38 CEA攻击，发现CEA阳性肿瘤细胞接种后在10天内坏死，而阴性株，肿瘤生长并在22天内死亡。关于Id和A-Id疫苗对肿瘤生长抑制的机制，其中体液免疫主要表现为诱导Ab3，临床上用抗人T淋巴瘤A-Id疫苗，注射四次后，诱导了Ab3，并能抑制Ab2对Ab1的反应。为了证明Ab3能否对淋巴瘤反应，用Ab2做亲和层析柱，纯化Ab3，发现Ab3能与肿瘤细胞反应，为IgG，对非淋巴瘤反应阴性。这种现象亦见于大肠癌A-Id疫苗，Ab3能与肠癌细胞反应，在SDS-PAGE反应体系中Ab3与Ab1沉带是相同的。我室用鼻咽癌A-Id疫苗诱导的Ab3，对鼻咽癌细胞的免疫组化反应也是和Ab1的反应图像相同。Ab3杀伤肿瘤细胞主要依赖于ADCC反应。在细胞免疫方面，用鼻咽癌A-Id疫苗免疫小鼠，再用鼻咽癌细胞攻击，小鼠产生DTH反应，且可被动转移。应用大肠癌和T淋巴瘤A-Id疫苗治疗病人后取其PBMC在体外用相应疫苗处理，可产生细胞增殖反应，这种现象亦见于VH或VL中CDR的多肽疫苗，增殖的细胞为CD4+，占90%。而无关抗体和治疗前病人的PBMC无反应。增殖效应细胞能杀伤靶细胞。应用基因工程制备的抗突变型P53的VL-CDR3段多肽，免疫小鼠后取其脾细胞测定对靶细胞的杀伤活性，发现效靶比在1∶50-1∶100时具有明显的杀伤活性，而阴性多肽序列无此作用。在治疗前后细胞因子改变的研究中，鼻咽癌病人用A-Id疫苗治疗11例，治疗后有5例TNF升高，10例IFN-γ升高，1例INF-γ降低；血清IL-2水平7例升高，1例下降，且与IFN-γ下降为同一病人，血清的IL-2的含量改变与淋巴细胞IL-2 mRNA表达呈正相关。所以A-Id疫苗所致的T细胞反应，亦可称为抗独特型T细胞反应，疫苗中CDR多肽段，既可作为抗原诱导Ab3，亦可与TCR结合，使其增殖产生细胞免疫反应。关于A-Id疫苗的临床疗效由于所有受试病人全为晚期，疗效难以判断，但有良好反应的报导，如一病人为皮肤大细胞性淋巴瘤，在注射2针疫苗后皮肤病灶开始缩小，当第4针注射后，9个皮肤病灶全部变平、变软，病灶缩小与血液中Ab3滴度升高相平行，活检发现皮肤中只残留少数淋巴瘤细胞，且对Ab1呈阴性反应(抗原调变)。第二疗程的治疗期间肿瘤亦未复发，直至半年后病灶开始增厚，11个月肿瘤复发，而此时血液中Ab3降低。在大肠癌方面，CEA A-Id疫苗亦有明显延长病程的作用，以Ab3抑制Ab2与Ab1作用滴度为标准，分为三个组，抑制10%，20%～50%和>50%，其存活率分别为1.3月、2.4月、5.3月，可见Ab3滴度与患者存活期密切相关。A-Id疫苗问世已20年，而且实践证明对细菌、病毒、寄生虫和肿瘤性疾病有疗效，但至今尚未正式用于临床。其中有三点理由，其一疫苗为鼠源性，引起HAMA反应；其二A-Id疫苗的免疫持续时间不及细菌性疫苗长；其三为主要引起IgM反应。对此有人提出了不同意见：有人通过200例临床试验，认为鼠源性疫苗从未产生严重的反应，肝肾功能未受影响；至于免疫反应虽然不及菌苗那么长，但可长期、多次注射，使血中Ab3水平达到一个高水平，而且Ab3为IgG抗体。总之，A-Id疫苗没有放疗和化疗严重副反应，目前疫苗虽不能治愈肿瘤性疾病，但可得到部分缓解，延长生存期，改善病人生活质量，有安全和费用低廉等特点。, 百拇医药