肝病患者血清中游离CD44和CD95的检测及其意义
罗振革 彭虹 张燕军 孔祥英 高杰英
关键词：CD44；CD95；抗体，单克隆；抗体，多克隆
CD44和CD95均是细胞表面的受体分子，其中CD44是细胞表面的粘附分子，介导细胞之间及细胞与胞外基质成分的结合，同时参与淋巴细胞的迁移和归巢；CD95是细胞凋亡相关的受体分子。正常情况下，CD44和CD95存在于细胞膜表面，体液中也可能有低水平的存在，但在自身免疫性疾病、肿瘤及感染状态下，血清中可能会出现这些游离型受体分子的异常表达或出现变异型的受体分子。因此，分析血清中游离的受体分子对于分析它们在各种疾病发生发展中的作用有重要意义，游离受体分子的存在可能成为多种疾病诊断和预后预测的重要指标。
本实验室建立了双抗夹心法检测血清中游离CD44和CD95的方法，并应用于临床肝病患者血清标本的检测。CD44的单克隆抗体和多克隆抗体以及CD95的多克隆抗体均由本室制备，用间接双抗夹心法检测游离CD44分子。首先在酶联板上包被CD44多克隆抗体，加入待测标本(原血清或1∶2稀释的血清)，而后加入识别多表位的CD44混合单抗，最后加入HRP标记的羊抗鼠IgG，显色剂显色。用直接双抗夹心法检测游离CD95分子，在酶联板上包被CD95多克隆抗体，加入待测标本，而后加入HRP标记的CD95多抗，显色剂显色，分别用重组CD44和CD95蛋白作为阳性对照，D450>0.2定为阳性。结果显示，肝硬化和肝癌患者组血清中游离CD44阳性率分别为94.29%(66/70)和90.20%(92/102)，非肝病对照组为64.29%(27/42)，肝病组和对照组之间有非常显著差异(P<0.001)(图1)，肝病组阳性血清中CD44含量也明显高于对照组，蛋白质印迹结果显示大部分阳性血清中在相对分子质量80 000～90 000处存在阳性条带，与标准型CD44(CD44S)的相对分子质量一致，在一例肝硬化的患者血中检出高分子量的阳性条带(10 000～20 000)，可能为CD44的变异体。肝硬化和肝癌患者组血清Fas阳性率分别为22.39%(15/67)和17.89%(17/95)，对照组阳性率为9.09%(3/33)(图2)，虽然两肝病组的阳性率分别与对照组相比在统计学上没有显著差异(P>0.1)，但肝病组阳性标本中游离Fas的含量明显高于对照组(图3)。因此粘附分子CD44及凋亡相关受体CD95在肝病发生发展中的作用值得进一步探讨。
, http://www.100md.com
图1 肝病患者血清中游离CD44的检测
图2 肝病患者血清中游离Fas分子的检测
图3 肝病患者血清中游离Fas分子的检测
[作者简介]罗振革(1967-)，男，天津人，副研究员，博士。
罗振革(军事医学科学院微生物学流行病学研究所，北京 100850)
彭虹(军事医学科学院微生物学流行病学研究所，北京 100850)
张燕军(军事医学科学院微生物学流行病学研究所，北京 100850)
孔祥英(军事医学科学院微生物学流行病学研究所，北京 100850)
高杰英(军事医学科学院微生物学流行病学研究所，北京 100850), http://www.100md.com
关键词：CD44；CD95；抗体，单克隆；抗体，多克隆
CD44和CD95均是细胞表面的受体分子，其中CD44是细胞表面的粘附分子，介导细胞之间及细胞与胞外基质成分的结合，同时参与淋巴细胞的迁移和归巢；CD95是细胞凋亡相关的受体分子。正常情况下，CD44和CD95存在于细胞膜表面，体液中也可能有低水平的存在，但在自身免疫性疾病、肿瘤及感染状态下，血清中可能会出现这些游离型受体分子的异常表达或出现变异型的受体分子。因此，分析血清中游离的受体分子对于分析它们在各种疾病发生发展中的作用有重要意义，游离受体分子的存在可能成为多种疾病诊断和预后预测的重要指标。
本实验室建立了双抗夹心法检测血清中游离CD44和CD95的方法，并应用于临床肝病患者血清标本的检测。CD44的单克隆抗体和多克隆抗体以及CD95的多克隆抗体均由本室制备，用间接双抗夹心法检测游离CD44分子。首先在酶联板上包被CD44多克隆抗体，加入待测标本(原血清或1∶2稀释的血清)，而后加入识别多表位的CD44混合单抗，最后加入HRP标记的羊抗鼠IgG，显色剂显色。用直接双抗夹心法检测游离CD95分子，在酶联板上包被CD95多克隆抗体，加入待测标本，而后加入HRP标记的CD95多抗，显色剂显色，分别用重组CD44和CD95蛋白作为阳性对照，D450>0.2定为阳性。结果显示，肝硬化和肝癌患者组血清中游离CD44阳性率分别为94.29%(66/70)和90.20%(92/102)，非肝病对照组为64.29%(27/42)，肝病组和对照组之间有非常显著差异(P<0.001)(图1)，肝病组阳性血清中CD44含量也明显高于对照组，蛋白质印迹结果显示大部分阳性血清中在相对分子质量80 000～90 000处存在阳性条带，与标准型CD44(CD44S)的相对分子质量一致，在一例肝硬化的患者血中检出高分子量的阳性条带(10 000～20 000)，可能为CD44的变异体。肝硬化和肝癌患者组血清Fas阳性率分别为22.39%(15/67)和17.89%(17/95)，对照组阳性率为9.09%(3/33)(图2)，虽然两肝病组的阳性率分别与对照组相比在统计学上没有显著差异(P>0.1)，但肝病组阳性标本中游离Fas的含量明显高于对照组(图3)。因此粘附分子CD44及凋亡相关受体CD95在肝病发生发展中的作用值得进一步探讨。
, http://www.100md.com
图1 肝病患者血清中游离CD44的检测
图2 肝病患者血清中游离Fas分子的检测
图3 肝病患者血清中游离Fas分子的检测
[作者简介]罗振革(1967-)，男，天津人，副研究员，博士。
罗振革(军事医学科学院微生物学流行病学研究所，北京 100850)
彭虹(军事医学科学院微生物学流行病学研究所，北京 100850)
张燕军(军事医学科学院微生物学流行病学研究所，北京 100850)
孔祥英(军事医学科学院微生物学流行病学研究所，北京 100850)
高杰英(军事医学科学院微生物学流行病学研究所，北京 100850), http://www.100md.com