库普弗细胞清道夫受体、CD14表达变化及其与内毒素性肝损伤的关系
库普弗细胞清道夫受体、CD14表达变化及其与内毒素性肝损伤的关系
蒋建新 谢国旗 陈永华 刘大为 周继红 朱佩芳 王正国 张洪杰
摘 要 目的 从细胞受体水平探讨内毒素性肝损伤过程中肝内库普弗细胞(KC)由防御性逐步转化为效应性的机制。 方法 经尾静脉注射不同剂量内毒素(LPS)复制轻、中、重度内毒素血症小鼠模型。肝内KC表面清道夫受体(SR)、CD14表达测定采用免疫组化法，并进行计算机图像分析。 结果 注射LPS后1 h，高剂量组肝内KC表面SR表达明显减少，至3 h，低剂量和中剂量组KC表面SR表达也开始明显减少，并随观察时间延长，3组KC表面SR表达均进行性减少，3组间SR的吸光度差异有显著性意义。3组肝内KC表面CD14表达在注射LPS后1 h均明显增多，并随时间延长而更加明显，但3组间CD14的吸光度无统计学意义。相关分析显示，各剂量组肝内SR与CD14表达变化呈显著负相关。血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)和肝组织内丙二醛(MDA)水平变化分别与SR表达下调呈显著负相关，与CD14表达上调呈显著正相关。肝组织结构改变及动物死亡率也与肝内KC表面SR、CD14表达变化呈明显的平行关系。 结论 内毒素致肝损伤过程中，肝内KC表面SR表达下调、CD14表达上调可能是KC防御功能减弱、致炎作用增强的重要机制。
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关键词：库普弗细胞；抗原，CD14；内毒素血症；清道夫受体
库普弗细胞(Kupffer cells, KC)是体内单核/巨噬细胞系统的主要成员，既是清除细菌及其毒素从而拮抗感染的重要防御细胞，同时也通过释放各种炎症介质，在内毒素性肝损伤的发生中发挥主导作用[1]。然而，关于感染发生过程中KC防御功能减弱、致炎作用增强的机制，迄今尚不清楚。近年研究表明，清道夫受体(scavenger receptor, SR)在巨噬细胞清除和灭活内毒素过程中发挥重要的作用[2]，CD14是介导内毒素激活巨噬细胞的重要受体[3]，因而，两者在KC-内毒素反应中可能起着重要的调控作用。但是，关于内毒素性肝损伤过程中KC表面SR、CD14表达的动态变化及其与内毒素性肝损伤的关系，尚鲜见文献报道。 笔者通过探讨内毒素血症时肝内KC表面SR、CD14表达变化及其与内毒素性肝损伤的关系，旨在从细胞受体水平揭示内毒素性肝损伤过程中肝内KC由防御性逐步转化为效应性细胞的机制，并为今后从增强机体防御能力方面入手，寻找抗感染的有效途径提供新思路。
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材料与方法
一、KC表面SR、CD14表达变化及其与内毒素的量效关系
昆明株小鼠64只，体重(20±2)g，雌雄不拘，实验前禁食，自由饮水。随机分为正常对照组和低(1 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高(10 mg/kg)内毒素(LPS)剂量组，内毒素组又分为注射内毒素后0.5，1，3，5，8 h组，每组4只。于尾静脉注入LPS(E.coli 026：B6， DIFCO)复制内毒素血症/休克模型。至相应时间点，采用质量浓度为40 g/L的多聚甲醛内灌注固定肝脏。酒精、二甲苯中逐级脱水，石蜡包埋。
KC表面SR、CD14表达测定采用免疫组化法。石蜡切片4 μm，常规脱蜡脱水、抗原复性，分别用体积分数为0.3% 的H2O2、10%正常羊血清封闭。大鼠抗小鼠SR(2F8，Serotec Ltd，英国)、CD14(Pharmingen，美国)单克隆抗体的工作稀释度均为1∶600，37℃孵育1 h后，4℃冰箱过夜。生物素标记IgG(1∶200)和辣根过氧化酶标记链酶卵白素(1∶200，Vector，美国) 标记，DAB 显色后，镜检、照相。在PECBIAS-6803 图像分析仪上测定表达产物的吸光度值(A)。
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二、内毒素致肝损伤实验观察
昆明株小鼠72只，体重(20±2)g。随机分为正常对照组、低(1 mg/kg)和高(10 mg/kg)内毒素组，动物模型制作同上，其中内毒素组又分为注射后1，3，5，8 h组，每组8只。至相应时间点，活杀动物取血，分离血浆，-30℃保存。采用全自动生化分析仪测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)和总胆红素(TB)含量。取肝组织分别供丙二醛(MDA)含量测定[4]和组织病理观察。
三、动物死亡率观察
小鼠60只，体重(20±2)g。随机分为低(1 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高(10 mg/kg)内毒素剂量组，每组20只，观察各组动物24 h死亡率。
四、统计学处理
实验所得计数、计量资料分别用χ2、t检验以及相关分析法进行统计学处理。
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结 果
一、KC表面SR、CD14表达变化及其与内毒素的量效关系
1.SR表达变化: 正常对照组KC表面SR表达呈弥漫性分布。注射LPS后3 h，3个内毒素剂量组KC表面SR表达均明显减少，并随时间延长而进行性下调。图像分析显示，注射LPS后1 h，高剂量组KC SR平均吸光度显著低于对照组(P<0.01)，至3 h，其他两组平均吸光度也显著低于对照组(P<0.01)，随着时间延长，各组平均吸光度下降更明显。KC表面SR表达变化与LPS呈明显的量效关系。注射LPS后1 h，高剂量组KC SR平均吸光度明显低于低剂量组(P<0.01)，至3 h，3组间差异均有显著性意义 (图1)。
图1 库普弗细胞表面SR表达变化及其与内毒素的量效关系。与对照组比较：*P<0.01，与低剂量组比较：#P<0.01，与中剂量组比较：△P<0.01
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2. CD14表达变化: 正常对照组KC表面可见散在CD14阳性产物。注射LPS后3 h，3组KC CD14表达均明显增多，至8 h，3组CD14阳性产物呈弥漫性分布。图像分析显示，注射LPS后1 h，3组CD14平均吸光度均分别显著高于正常对照组(P<0.05)，并随时间延长均进一步增多。但3组间KC CD14表达差异无统计学意义。
3. SR与CD14表达的相关分析: 低、中、高剂量组SR平均吸光度与CD14平均吸光度变化呈显著负相关关系(r=-0.922，-0.945，-0.948，P<0.01)。
二、内毒素致肝损伤及其与SR、CD14表达变化的关系
1. MDA变化: 注射LPS后1 h，高剂量组肝组织内MDA含量即显著高于正常对照组(P<0.05)，至3 h，低剂量组肝组织内MDA含量也明显升高，两组均随时间延长而升高更甚。高剂量组肝组织内MDA含量明显高于低剂量组(P<0.01)(表1)。
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2. 血浆ALT、TB变化: 注射LPS后1 h，高剂量组血浆ALT、TB水平即显著高于对照组，至3 h，低剂量组血浆ALT、TB水平也明显升高，两组均随时间延长而持续升高。两组间血浆ALT、TB水平差异具有非常显著性意义(表2)。
表1 小鼠内毒素血症时肝内MDA含量变化及其与内毒素的量效关系(nmol/mg, ±s)
组别
正常组
注射LPS后时间( h)
1
3
5
8
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正常组
7.1±0.8(8)
低剂量组
-
7.3±0.8(8)
7.9±0.7(8)
9.5±0.9(8)**
10.5±0.8(8)**
高剂量组
-
8.1±0.9(8)*
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12.2±1.7(8)**△△
14.7±0.8(8)**△△
16±1.2(8)**△△
注：表中括号内数字为鼠数。与对照组比较：* P<0.05，**P<0.01；与低剂量组比较：△△P<0.01表2 小鼠内毒素血症时血浆ALT、TB水平变化及其与内毒素的量效关系(±s)
组别
正常组
注射LPS后时间(h)
1
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3
5
8
ALT(IU/L)
正常组
14.4±1.1(8)
低剂量组
-
15.2±1.3(8)
15.7±1.0(8)*
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18.9±1.6(8)*
22.8±1.5(8)**
高剂量组
-
19.3±1.7(8)*△△
26.7±1.9(8)**△△
35.7±3.9(8)**△△
38.5±3.2(8)**△△
TB((mol/L)
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正常组
1.6±0.1(8)
低剂量组
-
1.7±0.1(8)
1.9±0.2(8)*
2.4±0.2(8)**
2.8±0.2(8)**
高剂量组
-
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2.6±0.4(8)**△△
3.1±0.3(8)**△△
3.9±0.3(8)**△△
4.2±0.5(8)**△△
注：表中括号内数字为鼠数。与对照组比较：*P<0.05，**P<0.01; 与低剂量组比较：△△P<0.01； 3.与肝内SR、CD14平均吸光度变化的相关性分析: 血浆ALT、TB和肝组织内MDA水平变化分别与CD14的平均吸光度呈显著正相关，与SR 的平均吸光度呈显著负相关(P<0.01)(表3)。
表3 内毒素血症小鼠血浆ALT、TB、MDA水平变化
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与SR、CD14平均吸光度的相关分析(r值)
组别
ALT
TBIL
MDA
低剂量组CD14
0.839
0.897
-0.800
低剂量组SR
-0.840
-0.917
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-0.806
高剂量组CD14
0.930
0.876
0.817
高剂量组SR
-0.949
-0.876
-0.854
4. 肝组织结构改变: 注射LPS后3 h，小剂量组见肝窦轻度扩张充血，少量炎细胞浸润；高剂量组肝窦扩张充血明显，炎性细胞浸润，可见灶性肝细胞坏死，肝小叶结构紊乱。8 h时，小剂量组部分肝细胞呈变性、坏死，肝小叶结构轻度紊乱；高剂量组大部分肝细胞变性、坏死，肝小叶结构紊乱。
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三、内毒素血症小鼠死亡率观察
低剂量组动物死亡率为0%(0/20)，中剂量组为40%(8/20)，高剂量组80%(16/20)，3组间差异具有显著性意义(P<0.05和P<0.01)。
讨 论
本研究结果显示，注射LPS后，低、中、高内毒素剂量组肝内KC表面SR表达产物进行性减少，CD14表达产物呈进行性增多，其中SR减少与LPS剂量呈明显的量效关系。已有研究表明[5]，巨噬细胞表面SR是重要的防御性受体，参与内毒素的清除和灭活作用。CD14则是内毒素激活巨噬细胞的主要受体[3]，与细胞释放炎症介质有关。因此，在内毒素血症/休克过程中，肝内KC表面SR表达下调、CD14表达上调可能是促使KC由防御性逐步转化为效应性细胞的重要机制。
相关分析显示，各内毒素剂量组肝内SR与CD14表达变化呈显著的负相关关系。笔者体外研究还发现，用乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)阻断库普弗细胞SR，可显著增强内毒素诱导库普弗细胞产生TNF-α、IL-6的作用(尚未发表)。Richard等[6]研究显示，给SR基因敲除的小鼠注射LPS后，血中TNF-α水平明显升高，小鼠死亡率显著增加。上述结果说明，SR、CD14虽分别是调控巨噬细胞清除、灭活内毒素和内毒素激活巨噬细胞的细胞受体，但这两种受体之间却存在一定的内在联系，即SR对内毒素的清除作用可能是机体调控内毒素激活炎性细胞的一种内源性机制。
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研究结果还显示，注射内毒素后血浆ALT、TB和肝组织内MDA水平呈进行性升高，并分别与肝内SR表达下调呈显著负相关，与CD14表达上调呈显著正相关。肝组织结构改变及动物死亡率也与肝内KC表面SR、CD14表达变化呈明显的平行关系，说明KC表面SR、CD14表达变化与内毒素性肝损害存在一定的内在联系。由于肝内KC表面CD14表达上调并未随着内毒素剂量的增加而增多，而不同内毒素剂量组动物肝损害及死亡率却存在显著差异，提示在大剂量内毒素作用时，体内可能还存在其他低亲和力受体途径[7]。
基金项目：国家重点基础研究发展规划项目(G1999054200)；国家自然科学基金资助项目(No.39770313)；军队杰出中青年科学基金资助项目
作者单位：蒋建新(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
谢国旗(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
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陈永华(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
刘大为(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
周继红(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
朱佩芳(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
王正国(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
张洪杰 (重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
参考文献
1，高静涛. 单核巨噬细胞系统在肠源性内毒素性肝损伤中的作用. 国外医学创伤与外科基本问题分册，1994，15：89-91.
, 百拇医药
2，Van Der Laan LJ, Dopp EA, Haworth R, et al. Regulation and functional involvement of macrophage scavenger receptor MARCO in clearance of bacteria in vivo. J Immunol, 1999, 15, 162: 939-947.
3，蒋建新. LBP/CD14系统及其与内毒素作用的关系. 生理科学进展, 1997, 28: 86-88.
4，Gutteridge JMC, Quinlan GJ. Malondialdehyde formation from lipid peroxides in the thiobarbituric acid test: the role of lipid radicals, iron salts and metal chelators. J Appl Biochem， 1983, 5:293-298.
, http://www.100md.com
5，Hampton RY, Golenbock DT, Penman M, et al. Recognition and plasma clearance of endotoxin by scavenger receptors. Nature, 1991,352: 342-344.
6，Richard H, Nick P, Satish K, et al. The macrophage scavenger receptor type A is expressed by activated macrophage and protects the host against lethal endotoxic shock. J Exp Med，1997, 186:1431-1439.
7， Malhotra R, Bird M. L-selection: a novel receptor for lipopolysacharide and its potential role in bacterial sepsis. Bio Essays, 1997, 19: 919-923., http://www.100md.com
蒋建新 谢国旗 陈永华 刘大为 周继红 朱佩芳 王正国 张洪杰
摘 要 目的 从细胞受体水平探讨内毒素性肝损伤过程中肝内库普弗细胞(KC)由防御性逐步转化为效应性的机制。 方法 经尾静脉注射不同剂量内毒素(LPS)复制轻、中、重度内毒素血症小鼠模型。肝内KC表面清道夫受体(SR)、CD14表达测定采用免疫组化法，并进行计算机图像分析。 结果 注射LPS后1 h，高剂量组肝内KC表面SR表达明显减少，至3 h，低剂量和中剂量组KC表面SR表达也开始明显减少，并随观察时间延长，3组KC表面SR表达均进行性减少，3组间SR的吸光度差异有显著性意义。3组肝内KC表面CD14表达在注射LPS后1 h均明显增多，并随时间延长而更加明显，但3组间CD14的吸光度无统计学意义。相关分析显示，各剂量组肝内SR与CD14表达变化呈显著负相关。血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)和肝组织内丙二醛(MDA)水平变化分别与SR表达下调呈显著负相关，与CD14表达上调呈显著正相关。肝组织结构改变及动物死亡率也与肝内KC表面SR、CD14表达变化呈明显的平行关系。 结论 内毒素致肝损伤过程中，肝内KC表面SR表达下调、CD14表达上调可能是KC防御功能减弱、致炎作用增强的重要机制。
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关键词：库普弗细胞；抗原，CD14；内毒素血症；清道夫受体
库普弗细胞(Kupffer cells, KC)是体内单核/巨噬细胞系统的主要成员，既是清除细菌及其毒素从而拮抗感染的重要防御细胞，同时也通过释放各种炎症介质，在内毒素性肝损伤的发生中发挥主导作用[1]。然而，关于感染发生过程中KC防御功能减弱、致炎作用增强的机制，迄今尚不清楚。近年研究表明，清道夫受体(scavenger receptor, SR)在巨噬细胞清除和灭活内毒素过程中发挥重要的作用[2]，CD14是介导内毒素激活巨噬细胞的重要受体[3]，因而，两者在KC-内毒素反应中可能起着重要的调控作用。但是，关于内毒素性肝损伤过程中KC表面SR、CD14表达的动态变化及其与内毒素性肝损伤的关系，尚鲜见文献报道。 笔者通过探讨内毒素血症时肝内KC表面SR、CD14表达变化及其与内毒素性肝损伤的关系，旨在从细胞受体水平揭示内毒素性肝损伤过程中肝内KC由防御性逐步转化为效应性细胞的机制，并为今后从增强机体防御能力方面入手，寻找抗感染的有效途径提供新思路。
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材料与方法
一、KC表面SR、CD14表达变化及其与内毒素的量效关系
昆明株小鼠64只，体重(20±2)g，雌雄不拘，实验前禁食，自由饮水。随机分为正常对照组和低(1 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高(10 mg/kg)内毒素(LPS)剂量组，内毒素组又分为注射内毒素后0.5，1，3，5，8 h组，每组4只。于尾静脉注入LPS(E.coli 026：B6， DIFCO)复制内毒素血症/休克模型。至相应时间点，采用质量浓度为40 g/L的多聚甲醛内灌注固定肝脏。酒精、二甲苯中逐级脱水，石蜡包埋。
KC表面SR、CD14表达测定采用免疫组化法。石蜡切片4 μm，常规脱蜡脱水、抗原复性，分别用体积分数为0.3% 的H2O2、10%正常羊血清封闭。大鼠抗小鼠SR(2F8，Serotec Ltd，英国)、CD14(Pharmingen，美国)单克隆抗体的工作稀释度均为1∶600，37℃孵育1 h后，4℃冰箱过夜。生物素标记IgG(1∶200)和辣根过氧化酶标记链酶卵白素(1∶200，Vector，美国) 标记，DAB 显色后，镜检、照相。在PECBIAS-6803 图像分析仪上测定表达产物的吸光度值(A)。
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二、内毒素致肝损伤实验观察
昆明株小鼠72只，体重(20±2)g。随机分为正常对照组、低(1 mg/kg)和高(10 mg/kg)内毒素组，动物模型制作同上，其中内毒素组又分为注射后1，3，5，8 h组，每组8只。至相应时间点，活杀动物取血，分离血浆，-30℃保存。采用全自动生化分析仪测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)和总胆红素(TB)含量。取肝组织分别供丙二醛(MDA)含量测定[4]和组织病理观察。
三、动物死亡率观察
小鼠60只，体重(20±2)g。随机分为低(1 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高(10 mg/kg)内毒素剂量组，每组20只，观察各组动物24 h死亡率。
四、统计学处理
实验所得计数、计量资料分别用χ2、t检验以及相关分析法进行统计学处理。
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结 果
一、KC表面SR、CD14表达变化及其与内毒素的量效关系
1.SR表达变化: 正常对照组KC表面SR表达呈弥漫性分布。注射LPS后3 h，3个内毒素剂量组KC表面SR表达均明显减少，并随时间延长而进行性下调。图像分析显示，注射LPS后1 h，高剂量组KC SR平均吸光度显著低于对照组(P<0.01)，至3 h，其他两组平均吸光度也显著低于对照组(P<0.01)，随着时间延长，各组平均吸光度下降更明显。KC表面SR表达变化与LPS呈明显的量效关系。注射LPS后1 h，高剂量组KC SR平均吸光度明显低于低剂量组(P<0.01)，至3 h，3组间差异均有显著性意义 (图1)。
图1 库普弗细胞表面SR表达变化及其与内毒素的量效关系。与对照组比较：*P<0.01，与低剂量组比较：#P<0.01，与中剂量组比较：△P<0.01
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2. CD14表达变化: 正常对照组KC表面可见散在CD14阳性产物。注射LPS后3 h，3组KC CD14表达均明显增多，至8 h，3组CD14阳性产物呈弥漫性分布。图像分析显示，注射LPS后1 h，3组CD14平均吸光度均分别显著高于正常对照组(P<0.05)，并随时间延长均进一步增多。但3组间KC CD14表达差异无统计学意义。
3. SR与CD14表达的相关分析: 低、中、高剂量组SR平均吸光度与CD14平均吸光度变化呈显著负相关关系(r=-0.922，-0.945，-0.948，P<0.01)。
二、内毒素致肝损伤及其与SR、CD14表达变化的关系
1. MDA变化: 注射LPS后1 h，高剂量组肝组织内MDA含量即显著高于正常对照组(P<0.05)，至3 h，低剂量组肝组织内MDA含量也明显升高，两组均随时间延长而升高更甚。高剂量组肝组织内MDA含量明显高于低剂量组(P<0.01)(表1)。
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2. 血浆ALT、TB变化: 注射LPS后1 h，高剂量组血浆ALT、TB水平即显著高于对照组，至3 h，低剂量组血浆ALT、TB水平也明显升高，两组均随时间延长而持续升高。两组间血浆ALT、TB水平差异具有非常显著性意义(表2)。
表1 小鼠内毒素血症时肝内MDA含量变化及其与内毒素的量效关系(nmol/mg, ±s)
组别
正常组
注射LPS后时间( h)
1
3
5
8
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正常组
7.1±0.8(8)
低剂量组
-
7.3±0.8(8)
7.9±0.7(8)
9.5±0.9(8)**
10.5±0.8(8)**
高剂量组
-
8.1±0.9(8)*
, 百拇医药
12.2±1.7(8)**△△
14.7±0.8(8)**△△
16±1.2(8)**△△
注：表中括号内数字为鼠数。与对照组比较：* P<0.05，**P<0.01；与低剂量组比较：△△P<0.01表2 小鼠内毒素血症时血浆ALT、TB水平变化及其与内毒素的量效关系(±s)
组别
正常组
注射LPS后时间(h)
1
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3
5
8
ALT(IU/L)
正常组
14.4±1.1(8)
低剂量组
-
15.2±1.3(8)
15.7±1.0(8)*
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18.9±1.6(8)*
22.8±1.5(8)**
高剂量组
-
19.3±1.7(8)*△△
26.7±1.9(8)**△△
35.7±3.9(8)**△△
38.5±3.2(8)**△△
TB((mol/L)
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正常组
1.6±0.1(8)
低剂量组
-
1.7±0.1(8)
1.9±0.2(8)*
2.4±0.2(8)**
2.8±0.2(8)**
高剂量组
-
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2.6±0.4(8)**△△
3.1±0.3(8)**△△
3.9±0.3(8)**△△
4.2±0.5(8)**△△
注：表中括号内数字为鼠数。与对照组比较：*P<0.05，**P<0.01; 与低剂量组比较：△△P<0.01； 3.与肝内SR、CD14平均吸光度变化的相关性分析: 血浆ALT、TB和肝组织内MDA水平变化分别与CD14的平均吸光度呈显著正相关，与SR 的平均吸光度呈显著负相关(P<0.01)(表3)。
表3 内毒素血症小鼠血浆ALT、TB、MDA水平变化
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与SR、CD14平均吸光度的相关分析(r值)
组别
ALT
TBIL
MDA
低剂量组CD14
0.839
0.897
-0.800
低剂量组SR
-0.840
-0.917
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-0.806
高剂量组CD14
0.930
0.876
0.817
高剂量组SR
-0.949
-0.876
-0.854
4. 肝组织结构改变: 注射LPS后3 h，小剂量组见肝窦轻度扩张充血，少量炎细胞浸润；高剂量组肝窦扩张充血明显，炎性细胞浸润，可见灶性肝细胞坏死，肝小叶结构紊乱。8 h时，小剂量组部分肝细胞呈变性、坏死，肝小叶结构轻度紊乱；高剂量组大部分肝细胞变性、坏死，肝小叶结构紊乱。
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三、内毒素血症小鼠死亡率观察
低剂量组动物死亡率为0%(0/20)，中剂量组为40%(8/20)，高剂量组80%(16/20)，3组间差异具有显著性意义(P<0.05和P<0.01)。
讨 论
本研究结果显示，注射LPS后，低、中、高内毒素剂量组肝内KC表面SR表达产物进行性减少，CD14表达产物呈进行性增多，其中SR减少与LPS剂量呈明显的量效关系。已有研究表明[5]，巨噬细胞表面SR是重要的防御性受体，参与内毒素的清除和灭活作用。CD14则是内毒素激活巨噬细胞的主要受体[3]，与细胞释放炎症介质有关。因此，在内毒素血症/休克过程中，肝内KC表面SR表达下调、CD14表达上调可能是促使KC由防御性逐步转化为效应性细胞的重要机制。
相关分析显示，各内毒素剂量组肝内SR与CD14表达变化呈显著的负相关关系。笔者体外研究还发现，用乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)阻断库普弗细胞SR，可显著增强内毒素诱导库普弗细胞产生TNF-α、IL-6的作用(尚未发表)。Richard等[6]研究显示，给SR基因敲除的小鼠注射LPS后，血中TNF-α水平明显升高，小鼠死亡率显著增加。上述结果说明，SR、CD14虽分别是调控巨噬细胞清除、灭活内毒素和内毒素激活巨噬细胞的细胞受体，但这两种受体之间却存在一定的内在联系，即SR对内毒素的清除作用可能是机体调控内毒素激活炎性细胞的一种内源性机制。
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研究结果还显示，注射内毒素后血浆ALT、TB和肝组织内MDA水平呈进行性升高，并分别与肝内SR表达下调呈显著负相关，与CD14表达上调呈显著正相关。肝组织结构改变及动物死亡率也与肝内KC表面SR、CD14表达变化呈明显的平行关系，说明KC表面SR、CD14表达变化与内毒素性肝损害存在一定的内在联系。由于肝内KC表面CD14表达上调并未随着内毒素剂量的增加而增多，而不同内毒素剂量组动物肝损害及死亡率却存在显著差异，提示在大剂量内毒素作用时，体内可能还存在其他低亲和力受体途径[7]。
基金项目：国家重点基础研究发展规划项目(G1999054200)；国家自然科学基金资助项目(No.39770313)；军队杰出中青年科学基金资助项目
作者单位：蒋建新(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
谢国旗(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
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陈永华(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
刘大为(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
周继红(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
朱佩芳(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
王正国(重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
张洪杰 (重庆，第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所 400042)
参考文献
1，高静涛. 单核巨噬细胞系统在肠源性内毒素性肝损伤中的作用. 国外医学创伤与外科基本问题分册，1994，15：89-91.
, 百拇医药
2，Van Der Laan LJ, Dopp EA, Haworth R, et al. Regulation and functional involvement of macrophage scavenger receptor MARCO in clearance of bacteria in vivo. J Immunol, 1999, 15, 162: 939-947.
3，蒋建新. LBP/CD14系统及其与内毒素作用的关系. 生理科学进展, 1997, 28: 86-88.
4，Gutteridge JMC, Quinlan GJ. Malondialdehyde formation from lipid peroxides in the thiobarbituric acid test: the role of lipid radicals, iron salts and metal chelators. J Appl Biochem， 1983, 5:293-298.
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5，Hampton RY, Golenbock DT, Penman M, et al. Recognition and plasma clearance of endotoxin by scavenger receptors. Nature, 1991,352: 342-344.
6，Richard H, Nick P, Satish K, et al. The macrophage scavenger receptor type A is expressed by activated macrophage and protects the host against lethal endotoxic shock. J Exp Med，1997, 186:1431-1439.
7， Malhotra R, Bird M. L-selection: a novel receptor for lipopolysacharide and its potential role in bacterial sepsis. Bio Essays, 1997, 19: 919-923., http://www.100md.com