ND-ELISA 在预测麻风复发中应用的潜在远景
ND-ELISA 在预测麻风复发中应用的潜在远景
吴勤学 李志诚 吕成志 郁华 侯伟 尹跃平 张良芬 叶干运
关键词：麻风；酶联免疫吸附测定；复发
为进行麻风复发的预测研究，本室以一种人工合成的二糖抗原(natural disaccharide octylborine serum albumin)为基础建立了间接酶联免疫吸附测定(ND-ELISA)法[1，2]，该法的阈值(cut off value, CV)设定为(X±3s)。结合麻风病抗体水平实际状况，本实验设定实用光密度(OD)测定的CV值为：CV1=0.10和CV2=0.16。在CV2的条件下方法的敏感性为96%，特异性为100%，阳性预测值为1，阴性预测值为0.98，正确指数为0.914；批内变异系数为0.02～0.08，批间变异系数为0.01～0.09。现将本室用之于早期麻风复发预测研究的初步结果报告如下：
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材料和方法
(1)受检血液标本为DDS单疗治愈麻风患者全血滤纸干渍斑666份(MB 448，PB 218)，由甘肃省地方病研究所和大连市皮肤病防治所提供，还原成与血清相当稀释度后用于检测试验。抗原ND(ND-O-BSA)为美国Colorado州立大学免疫学系Brennan教授提供，抗原溶于挥发缓冲液(pH8.2)，按100 μl/孔包被于40孔聚苯乙烯微量滴盘。酶结合物为辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgM(美国CAPPEL公司)。工作浓度为1∶1 000。显色剂邻苯二胺与终浓度为0.003%的H2O2在pH5.0柠檬酸缓冲液中共成底物系统。封闭剂为去脂奶粉，工作浓度为2.5%和5%。(2)ND-ELISA按文献[1]方法进行。(3)确定复发的标准：1)出现新的麻风皮损和原有皮损恶化，或近期出现新的感觉障碍或肌肉麻痹。2)重新出现麻风菌(ML)增殖，原皮损查菌阴转后又呈阳性或ML量增多，或查见完整菌。3)组织病理检查可见特异性麻风病变或抗酸染色查菌阳性。具备以上两项者即可定为临床复发。(4)检测复发的方法：对列为研究对象的DDS单疗临床治愈的患者，每年检测血中IgM类抗体1次，并同时查体。发现有复发疑点者取相应部位组织切刮液检查抗酸菌。测定结果按上述标准判断是否复发。连续检测3年，观察血中IgM抗体水平的变化与复发的关系。
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结果
(1)麻风患者愈后血清IgM水平：MB愈后患者270例，PB愈后患者84例，均被分成6组，从愈后年限算每5年为1组。MB组愈后0～5年患者13例，血清IgM OD值>CV1，但2；愈后>6年患者(共257例)IgM OD值1；愈后0～20年(共167例)中每组段患者血清IgM呈缓慢递减趋势；愈后21～25年IgM水平最低。PB组除个别组段血清IgM OD值与CV1相同外，其余均低于CV1。在愈后0～20年间各对应组段MB组虽略高于PB组，但两大组IgM OD值均低于CV2。(2)麻风愈后第一年检测复发的结果：患者共666例，其中MB 448例，其血清IgM OD值>CV2者36例中有4例经查菌、病理及临床检查确诊为MB复发；其余412例IgM OD值2者皆无1例复发。218例PB中IgM OD值>CV2者8例，其中1例OD值为0.275，属 于BT复发；210例IgM OD值2者，其中有1例OD值虽然仅0.035，但实属TT复发。
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讨论
有效的联合化疗(MDT)虽可使麻风总数明显下降，但麻风的发病率并没有明显下降，MDT只能控制有症状的病例，麻风的亚临床传播是重要的潜在威胁。主要由耐药菌引起的复发将成为耐药麻风菌播散之源，因此对麻风复发进行预测和早期检测非常重要。本研究结果显示，治愈的原MB患者0～5年段IgM抗体处于CV1水平，其后逐渐降至正常水平，21年后降至最低。这证实了Bach等认为DDS长期单疗后部分患者体内仍有残留麻风菌未完全清除，但抗体水平随麻风菌的不断清除而下降的假设。对DDS单疗治愈的患者第1次检测显示复发的例数在OD>CV2组明显高于OD2组。提示测定IgM抗体水平对预测麻风复发有一定价值。Degtiarev等的研究结果也表明80%的复发患者在复发前1～3年血清抗体阳性。所以检测治疗后症状消退患者血中抗ND抗体水平对评价化疗效果和早期预测复发都是有价值的。本组所建立的ND-ELISA在评价麻风化疗效果和早期预测复发方面具有潜在应用前景。
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吴勤学(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
李志诚(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
吕成志(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
郁华(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
侯伟(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
尹跃平(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
张良芬(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
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叶干运(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
参考文献
1，Wu Qinxue, Ye Ganyun, Li Xinyu. Serological activity of natural disaccharide octyl bovine serum albumin (ND-O-BSA) in sera from patients with leprosy, tuberculosis and normal controls. Int J Lepr, 1988，56(1):50-55
2，吴勤学,李新宇,魏万惠,等.低糖人工抗原的麻风血清学活性比较研究. 中国麻风杂志，1991,7(3)：138-143, 百拇医药
吴勤学 李志诚 吕成志 郁华 侯伟 尹跃平 张良芬 叶干运
关键词：麻风；酶联免疫吸附测定；复发
为进行麻风复发的预测研究，本室以一种人工合成的二糖抗原(natural disaccharide octylborine serum albumin)为基础建立了间接酶联免疫吸附测定(ND-ELISA)法[1，2]，该法的阈值(cut off value, CV)设定为(X±3s)。结合麻风病抗体水平实际状况，本实验设定实用光密度(OD)测定的CV值为：CV1=0.10和CV2=0.16。在CV2的条件下方法的敏感性为96%，特异性为100%，阳性预测值为1，阴性预测值为0.98，正确指数为0.914；批内变异系数为0.02～0.08，批间变异系数为0.01～0.09。现将本室用之于早期麻风复发预测研究的初步结果报告如下：
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材料和方法
(1)受检血液标本为DDS单疗治愈麻风患者全血滤纸干渍斑666份(MB 448，PB 218)，由甘肃省地方病研究所和大连市皮肤病防治所提供，还原成与血清相当稀释度后用于检测试验。抗原ND(ND-O-BSA)为美国Colorado州立大学免疫学系Brennan教授提供，抗原溶于挥发缓冲液(pH8.2)，按100 μl/孔包被于40孔聚苯乙烯微量滴盘。酶结合物为辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgM(美国CAPPEL公司)。工作浓度为1∶1 000。显色剂邻苯二胺与终浓度为0.003%的H2O2在pH5.0柠檬酸缓冲液中共成底物系统。封闭剂为去脂奶粉，工作浓度为2.5%和5%。(2)ND-ELISA按文献[1]方法进行。(3)确定复发的标准：1)出现新的麻风皮损和原有皮损恶化，或近期出现新的感觉障碍或肌肉麻痹。2)重新出现麻风菌(ML)增殖，原皮损查菌阴转后又呈阳性或ML量增多，或查见完整菌。3)组织病理检查可见特异性麻风病变或抗酸染色查菌阳性。具备以上两项者即可定为临床复发。(4)检测复发的方法：对列为研究对象的DDS单疗临床治愈的患者，每年检测血中IgM类抗体1次，并同时查体。发现有复发疑点者取相应部位组织切刮液检查抗酸菌。测定结果按上述标准判断是否复发。连续检测3年，观察血中IgM抗体水平的变化与复发的关系。
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结果
(1)麻风患者愈后血清IgM水平：MB愈后患者270例，PB愈后患者84例，均被分成6组，从愈后年限算每5年为1组。MB组愈后0～5年患者13例，血清IgM OD值>CV1，但
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讨论
有效的联合化疗(MDT)虽可使麻风总数明显下降，但麻风的发病率并没有明显下降，MDT只能控制有症状的病例，麻风的亚临床传播是重要的潜在威胁。主要由耐药菌引起的复发将成为耐药麻风菌播散之源，因此对麻风复发进行预测和早期检测非常重要。本研究结果显示，治愈的原MB患者0～5年段IgM抗体处于CV1水平，其后逐渐降至正常水平，21年后降至最低。这证实了Bach等认为DDS长期单疗后部分患者体内仍有残留麻风菌未完全清除，但抗体水平随麻风菌的不断清除而下降的假设。对DDS单疗治愈的患者第1次检测显示复发的例数在OD>CV2组明显高于OD
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吴勤学(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
李志诚(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
吕成志(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
郁华(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
侯伟(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
尹跃平(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
张良芬(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
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叶干运(中国医学科学院 中国协和医科大学 皮肤病研究所麻风病研究室，南京 210042)
参考文献
1，Wu Qinxue, Ye Ganyun, Li Xinyu. Serological activity of natural disaccharide octyl bovine serum albumin (ND-O-BSA) in sera from patients with leprosy, tuberculosis and normal controls. Int J Lepr, 1988，56(1):50-55
2，吴勤学,李新宇,魏万惠,等.低糖人工抗原的麻风血清学活性比较研究. 中国麻风杂志，1991,7(3)：138-143, 百拇医药